1、關于微生物的遺傳與變異 (3)第一張，PPT共九十一頁，創作于2022年6月第九章 微生物遺傳課程標準 了解微生物的遺傳物質及基因組存在方式，理解基因突變的特點，掌握微生物的基因重組方式。 Back第二張，PPT共九十一頁，創作于2022年6月3本章要點一 微生物遺傳的物質基礎二 微生物的基因突變三 微生物的基因重組四 微生物的遺傳育種第三張，PPT共九十一頁，創作于2022年6月4遺傳：親代與子代相似變異：親代與子代、子代間不同個體不完全相同遺傳（inheritance）和變異（variation）是生命的最本質特性之一生物的全部遺傳因子及基因具有一定遺傳型的個體，在特定環境條件下通過生長發

2、育所表現出來的形態等生物學特征的總和。表型是由遺傳型所決定，但也和環境有關。遺傳型（genotype） ：表型（表現型） （phenotype） ：第四張，PPT共九十一頁，創作于2022年6月5飾變（modification）：指生物體由于非遺傳因素引起的表型改變，變化發生在轉錄、轉譯水平，特點是幾乎整個群體中的每一個個體都發生同樣的變化，性狀變化的幅度小，不遺傳，引起飾變的因素消失后，表型即可恢復。第五張，PPT共九十一頁，創作于2022年6月6表型飾變：表型的差異只與環境有關特點：暫時性、不可遺傳性、表現為全部個體的行為橘生淮南則為橘，生于淮北則為枳。遺傳型變異（基因變異、基因突變）：遺

3、傳物質改變，導致表型改變特點：遺傳性、群體中極少數個體的行為 （自發突變頻率通常為10-6-10-9）第六張，PPT共九十一頁，創作于2022年6月7微生物是遺傳學研究中的明星： 微生物細胞結構簡單，營養體一般為單倍體，方便建立純系。 很多常見微生物都易于人工培養，快速、大量生長繁殖。 對環境因素的作用敏感，易于獲得各類突變株，操作性強。第七張，PPT共九十一頁，創作于2022年6月8第一節 遺傳的物質基礎一、DNA作為遺傳物質二、RNA作為遺傳物質三、朊病毒的發現與思考第八張，PPT共九十一頁，創作于2022年6月91928年，Griffith進行了以下幾組實驗：（1）動物實驗對小鼠注射活R

4、菌或死S菌 小鼠存活對小鼠注射活S菌小鼠死亡對小鼠注射活R菌和熱死S菌 小鼠死亡 抽取心血分離活的S菌（一 ） 轉化實驗（transformation）：F. Griffith，研究對象：Streptococcus pneumoniae（肺炎雙球菌）S型菌株：有致病性，菌落表面光滑，有莢膜R型菌株：無致病性，菌落表面粗糙，無莢膜一 DNA作為遺傳物質第九張，PPT共九十一頁，創作于2022年6月10（2）細菌培養實驗熱死S菌不生長活R 菌長出R菌熱死S菌+活R 菌長出大量R菌和10-6S菌（3）S型菌的無細胞抽提液試驗活R菌+S菌無細胞抽提液長出大量R菌和少量S菌以上實驗說明：加熱殺死的S型細

5、菌細胞內可能存在一種轉化物質，它能通過某種方式進入R型細胞并使R型細胞獲得穩定的遺傳性狀第十張，PPT共九十一頁，創作于2022年6月11一、DNA作為遺傳物質第一節 遺傳的物質基礎第十一張，PPT共九十一頁，創作于2022年6月12加S菌DNA加S菌DNA及DNA酶以 外的酶加S菌的DNA和DNA酶加S菌的RNA加S菌的蛋白質加S菌的莢膜多糖活R菌長出S菌只有R菌1944年O.T.Avery、C.M.MacLeod和M. McCarty從熱死S型S. pneumoniae中提純了可能作為轉化因子的各種成分，在離體條件下進行了轉化試驗：Avery等在四十年代以更精密的實驗設計重復了以上實驗分別

6、用降解DNA、RNA、蛋白質的酶作用于有毒的S型菌細胞抽提物只有DNA被酶降解破壞的抽提物無轉化活性DNA是轉化所必需的轉化因子第十二張，PPT共九十一頁，創作于2022年6月13（二） 噬菌體感染實驗A. D. Hershey和M. Chase， 1952年（1）含32P-DNA的一組：放射性85%在沉淀中（2）含35S-蛋白質的一組：放射性75%在上清液中所以，進入細胞的是噬菌體的核酸而不是蛋白質。第十三張，PPT共九十一頁，創作于2022年6月14第一節 遺傳的物質基礎T2噬菌體感染實驗（1952年）第十四張，PPT共九十一頁，創作于2022年6月15TMVHR第一節 遺傳的物質基礎二、

7、RNA作為遺傳物質生化提取分別獲得含RNA的煙草花葉病毒蛋白質外殼（病毒1）和核酸（病毒2）抗血清處理，證明雜種病毒的蛋白質外殼來自病毒1，而非病毒2雜種病毒的后代的蛋白質外殼表現為病毒2，而非病毒1遺傳物質是核酸（RNA）而非蛋白質病毒拆開重建實驗第十五張，PPT共九十一頁，創作于2022年6月16第一節 遺傳的物質基礎三、朊病毒的發現與思考亞病毒的一種：具有傳染性的蛋白質致病因子，迄今為止尚為 發現該蛋白內含有核酸。其致病作用是由于動物體內正常的蛋白質PrP c改變折疊狀態為PrP sc所致，而這二種蛋白質的一級結構并沒有改變。第十六張，PPT共九十一頁，創作于2022年6月17人的庫魯病

8、(kuru)、克雅氏病(Creutzfeldt Jakob disease, CJD)等羊搔癢癥(scrapie)牛海綿狀腦病(spongiform encephalopathy)第十七張，PPT共九十一頁，創作于2022年6月18引起人與動物的致死性中樞神經系統疾病第十八張，PPT共九十一頁，創作于2022年6月19Prusiner (1982)提出羊搔癢病因子是一種蛋白質侵染顆粒（proteinaceous infectious particle），并將之稱做Prion或Virino。 -朊病毒1997年，Stanley B. Prusiner榮獲諾貝爾獎第十九張，PPT共九十一頁，創作于

9、2022年6月20第一節 遺傳的物質基礎三、朊病毒的發現與思考1）蛋白質是否可以作為遺傳物質？ prion是生命的一個特例？還是僅僅為表達調控的一種形式？2）蛋白質折疊與功能的關系，是否存在折疊密碼？DNARNA肽鏈蛋白質第二十張，PPT共九十一頁，創作于2022年6月21第二節 微生物的基因組結構一、概念基因組（genome）：一個物種的單倍體的所有染色體及其所包含的遺傳信息的總稱原核生物（如細菌），多為單倍體（在一般情況下只有一條染色體）真核微生物，多條染色體，例如啤酒酵母有16條染色體。有時為雙倍體第二十一張，PPT共九十一頁，創作于2022年6月22第二節 微生物的基因組結構二、微生物

10、與人類基因組計劃人類基因組計劃 （Human Genome Project）1985年提出； 1990年正式開始實施； 2001年2月，測序工作完成；后基因組時代（Postgenome Era）第二十二張，PPT共九十一頁，創作于2022年6月23第二節 微生物的基因組結構二、微生物與人類基因組計劃微生物基因組測序工作是在人類基因組計劃的促進下開始的，最開始是作為模式生物，后來不斷發展，已成為研究微生物學的最有力的手段。/tdb/mdb/mdb.html截止到2001年4月： 43種微生物完成了全基因組測序； 100多個正在進行之中；第二十三張，PPT共九十一頁，創作于2022年6月24第二節

11、 微生物的基因組結構二、微生物與人類基因組計劃被選擇進行全基因組測序的微生物：1、人類基因組計劃中的模式生物a）從技術上從低等入手，建立技術、積累經驗。通過對基因 組結構相對簡單生物，特別是微生物基因組的測序，對大規模測序的策略及技術進行檢驗，積累經驗；b）理論上利用基因組在進化上的連續性進行比較研究通過對不同進化程度的基因組的分析、比較揭示更多的基本生物學信息。通過研究較為簡單的基因組而解答復雜的人類基因組問題，第二十四張，PPT共九十一頁，創作于2022年6月25第二節 微生物的基因組結構二、微生物與人類基因組計劃被選擇進行全基因組測序的微生物：1、人類基因組計劃中的模式生物2、與人類生活

12、關系密切的微生物重要的致病菌及一些工業生產菌3、對闡明生物學基本問題有價值的微生物例如一些古生菌：如Methanococcus jannaschii (詹氏甲烷球菌)等，它們是微生物世界多樣性的代表，它們的序列比較有助于找出其進化關系。第二十五張，PPT共九十一頁，創作于2022年6月26第二節 微生物的基因組結構三、微生物基因組結構的特點1、原核生物（細菌、古生菌）的基因組1）染色體為雙鏈環狀的DNA分子（單倍體）；鏈環狀的染色體在細胞中以緊密纏繞成的較致密的不規則小體形式存在于細胞中，該小體稱為擬核(nucliod)，其上結合有類組蛋白蛋白質和少量RNA分子，使其壓縮成一種手腳架形的致密結

13、構。例外：布氏疏螺旋體(Borrelia burgdorferi)的染色體是線狀的第二十六張，PPT共九十一頁，創作于2022年6月27第二節 微生物的基因組結構三、微生物基因組結構的特點1、原核生物（細菌、古生菌）的基因組1）染色體為雙鏈環狀的DNA分子（單倍體）；2）基因組上遺傳信息具有連續性；基因數基本接近由它的基因組大小所估計的基因數參見表8-1（通常以1000bp1500bp為一個基因進行計算）微生物基因組DNA絕大部分用來編碼蛋白質、RNA；用作為復制起點、啟動子、終止子和一些由調節蛋白識別和結合的位點等信號序列。一般不含內含子，遺傳信息是連續的而不是中斷的。真核生物基因組的一個重

14、要特點就是含有內含子個別細菌(鼠傷寒沙門氏菌和犬螺桿菌)和古生菌的rRNA和tRNA中也發現有內含子或間插序列第二十七張，PPT共九十一頁，創作于2022年6月28第二節 微生物的基因組結構三、微生物基因組結構的特點1、原核生物（細菌、古生菌）的基因組1）染色體為雙鏈環狀的DNA分子（單倍體）；2）基因組上遺傳信息具有連續性；3）功能相關的結構基因組成操縱子結構；4）結構基因的單拷貝及rRNA基因的多拷貝；5）基因組的重復序列少而短；古生菌的基因組在結構上類似于細菌。但是信息傳遞系統(復制、轉錄和翻譯)則與細菌不同而類似于真核生物。操縱子（operon）：功能相關的幾個基因前后相連，再加上一個

15、共同的調節基因和一組共同的控制位點（啟動子、操作子等）在基因轉錄時協同動作。操縱子（operon）：功能相關的幾個基因前后相連，再加上一個共同的調節基因和一組共同的控制位點（啟動子、操作子等）在基因轉錄時協同動作。第二十八張，PPT共九十一頁，創作于2022年6月29第二節 微生物的基因組結構三、微生物基因組結構的特點2、真核微生物（啤酒酵母）的基因組1）典型的真核染色體結構；2）沒有明顯的操縱子結構；啤酒酵母基因組大小為13.5106bp，分布在16條染色體中。3）有間隔區（即非編碼區）和內含子序列；4）重復序列多；第二十九張，PPT共九十一頁，創作于2022年6月30第三節 質粒和轉座因子

16、質粒（plasmid）：一種獨立于染色體外，能進行自主復制的細胞質遺傳因子，主要存在于各種微生物細胞中。轉座因子（transposable element）：位于染色體或質粒上的一段能改變自身位置的DNA序列，廣泛分布于原核和真核細胞中。質粒和轉座因子是細胞中除染色體以外的另外二類遺傳因子第三十張，PPT共九十一頁，創作于2022年6月31第三節 質粒和轉座因子一、質粒的分子結構1、結構通常以共價閉合環狀(covalently closed circle，簡稱CCC)的超螺旋雙鏈DNA分子存在于細胞中；也發現有線型雙鏈DNA質粒和RNA質粒；質粒分子的大小范圍從1kb左右到1000kb；（細菌

17、質粒多在10kb以內）第三十一張，PPT共九十一頁，創作于2022年6月32第三節 質粒和轉座因子一、質粒的分子結構2、質粒的檢測 提取所有胞內DNA后電鏡觀察； 超速離心或瓊脂糖凝膠電泳后觀察； 對于實驗室常用菌，可用質粒所帶的某些特點， 如抗藥性初步判斷。對于由于三種構型同時存在時造成的多帶現象（提取質粒時造成或自然存在），可以進行特異性單酶切，使其成為一條帶。特定的質粒提取方法和后處理使染色體和RNA均被除掉。第三十二張，PPT共九十一頁，創作于2022年6月33第三節 質粒和轉座因子二、質粒的主要類型在某些特殊條件下，質粒有時能賦予宿主細胞以特殊的機能，從而使宿主得到生長優勢。質粒所含

18、的基因對宿主細胞一般是非必需的；第三十三張，PPT共九十一頁，創作于2022年6月34第三節 質粒和轉座因子二、質粒的主要類型質粒所編碼的功能和賦予宿主的表型效應致育因子（Fertility factor，F因子）抗性因子（Resistance factor，R因子）產細菌素的質粒（Bacteriocin production plasmid）毒性質粒（virulence plasmid）代謝質粒（Metabolic plasmid）隱秘質粒（cryptic plasmid）第三十四張，PPT共九十一頁，創作于2022年6月35第三節 質粒和轉座因子二、質粒的主要類型1、致育因子(Fertil

19、ity factor，F因子)又稱F質粒，其大小約100kb，這是最早發現的一種與大腸桿菌的有性生殖現象（接合作用）有關的質粒。攜帶F質粒的菌株稱為F+菌株（相當于雄性），無F質粒的菌株稱為F-菌株（相當于雌性）。F因子能以游離狀態(F+)和以與染色體相結合的狀態(Hfr)存在于細胞中，所以又稱之為附加體(episome)。有關內容在講細菌的接合作用（conjugation）時具體介紹第三十五張，PPT共九十一頁，創作于2022年6月36第三節 質粒和轉座因子二、質粒的主要類型2、抗性因子（Resistance factor，R因子）包括抗藥性和抗重金屬二大類，簡稱R質粒。R100質粒(89k

20、b)可使宿主對下列藥物及重金屬具有抗性：汞（mercuric ion ，mer）四環素（tetracycline，tet ）鏈霉素(Streptomycin, Str)、磺胺(Sulfonamide, Su)、氯霉素(Chlorampenicol, Cm)夫西地酸（fusidic acid，fus）并且負責這些抗性的基因是成簇地存在于抗性質粒上。抗性質粒在細菌間的傳遞是細菌產生抗藥性的重要原因之一。第三十六張，PPT共九十一頁，創作于2022年6月37第三節 質粒和轉座因子二、質粒的主要類型3、產細菌素的質粒（Bacteriocin production plasmid）細菌素結構基因、 涉及

21、細菌素運輸及發揮作用（processing）的蛋白質的基因、 賦予宿主對該細菌素具有“免疫力”的相關產物的基因一般都位于質粒或轉座子上，因此，細菌素可以殺死同種但不攜帶該質粒的菌株。第三十七張，PPT共九十一頁，創作于2022年6月38第三節 質粒和轉座因子二、質粒的主要類型3、產細菌素的質粒（Bacteriocin production plasmid）細菌素一般根據產生菌的種類進行命名：大腸桿菌（E. coli）產生的細菌素為colicins（大腸桿菌素），而質粒被稱為Col質粒。由G+細菌產生的細菌素或與細菌素類似的因子與colicins有所不同，但通常也是由質粒基因編碼，有些甚至有商業

22、價值，例如一種乳酸細菌產生的細菌素NisinA能強烈抑制某些G+細菌的生長，而被用于食品工業的保藏。第三十八張，PPT共九十一頁，創作于2022年6月39第三節 質粒和轉座因子二、質粒的主要類型4、毒性質粒（virulence plasmid）許多致病菌的致病性是由其所攜帶的質粒引起的，這些質粒具有編碼毒素的基因，其產物對宿主（動物、植物）造成傷害。產毒素大腸桿菌是引起人類和動物腹瀉的主要病原菌之一，其中許多菌株含有為一種或多種腸毒素編碼的質粒。蘇云金桿菌含有編碼內毒素(伴孢晶體中)的質粒根癌土壤桿菌所含Ti質粒是引起雙子葉植物冠癭瘤的致病因子第三十九張，PPT共九十一頁，創作于2022年6月

23、40第三節 質粒和轉座因子二、質粒的主要類型5、代謝質粒（Metabolic plasmid）質粒上攜帶有有利于微生物生存的基因，如能降解某些基質的酶，進行共生固氮，或產生抗生素（某些放線菌）等。將復雜的有機化合物降解成能被其作為碳源和能源利用的簡單形式，環境保護方面具有重要的意義。假單胞菌：具有降解一些有毒化合物，如芳香簇化合物(苯)、農藥(2,4dichlorophenoxyacetic acid)、辛烷和樟腦等的能力。降解質粒：第四十張，PPT共九十一頁，創作于2022年6月41第三節 質粒和轉座因子二、質粒的主要類型6、隱秘質粒（cryptic plasmid）隱秘質粒不顯示任何表型效

24、應，它們的存在只有通過物理的方法，例如用凝膠電泳檢測細胞抽提液等方法才能發現。它們存在的生物學意義，目前幾乎不了解。在應用上，很多隱秘質粒被加以改造作為基因工程的載體（一般加上抗性基因）第四十一張，PPT共九十一頁，創作于2022年6月42第三節 質粒和轉座因子二、質粒的主要類型高拷貝數(high copy number)質粒（每個宿主細胞中可以有10-100個拷貝） 松弛型質粒(relaxed plasmid)低拷貝數(low copy number)質粒（每個宿主細胞中可以有1-4個拷貝） 嚴謹型質粒(stringent plasmid)窄宿主范圍質粒(narrow host range

25、plasmid)（只能在一種特定的宿主細胞中復制）廣宿主范圍質粒(broad host range plasmid)（可以在許多種細菌中復制）第四十二張，PPT共九十一頁，創作于2022年6月43第三節 質粒和轉座因子三、質粒的不親和性質粒之間的不親和性、以及質粒拷貝數的多少、能適應的宿主范圍的寬窄等特性均與質粒的復制控制類型有關。第四十三張，PPT共九十一頁，創作于2022年6月44第三節 質粒和轉座因子四、轉座因子的類型和分子結構五、轉座的遺傳學效應第四十四張，PPT共九十一頁，創作于2022年6月45第四節 基因突變及修復一個基因內部遺傳結構或DNA序列的任何改變基因突變：第四十五張，P

26、PT共九十一頁，創作于2022年6月46第四節 基因突變及修復一個基因內部遺傳結構或DNA序列的任何改變基因突變：基因突變是重要的生物學現象，它是一切生物變化的根源，連同基因轉移、重組一起提供了推動生物進化的遺傳多變性。基因突變DNA損傷修復機制突變自發突變誘變環境因素的影響，DNA復制過程的偶然錯誤等而導致，一般頻率較低，通常為10-6-10-9 。某些物理、化學因素對生物體的DNA進行直接作用，突變以較高的頻率產生。前者可以通過DNA復制而成為真正的突變，也可以重新變為原來的結構，這取決于修復作用和其它多種因素。第四十六張，PPT共九十一頁，創作于2022年6月471、特點1）非對應性2）

27、稀有性3）規律性4）獨立性5）遺傳和回復性6）可誘變性第四節 基因突變及修復一、基因突變的特點第四十七張，PPT共九十一頁，創作于2022年6月48證明突變的性狀與引起突變的原因間無直接對應關系！如何證明基因突變的非對應性？三個經典實驗變量實驗、涂布實驗、影印實驗一、基因突變的特點2、實驗證據第四十八張，PPT共九十一頁，創作于2022年6月49變量實驗（fluctuation analysis）Salvador Luria and Max Delbruck（1943）Salvador LuriaMax DelbruckThe Nobel Prize in Physiology or Medi

28、cine 1969第四十九張，PPT共九十一頁，創作于2022年6月50Newcombe的涂布實驗（1949）第五十張，PPT共九十一頁，創作于2022年6月51影印實驗（replica plating ）Joshua Lederberg and Esther Lederberg（1952）Joshua LederbergJ. Lederberg is awarded the Noble Prize in Medicine and Physiology in 1958第五十一張，PPT共九十一頁，創作于2022年6月52突變真的與選擇壓力無關嗎？適應性突變（adaptive mutabilit

29、y）和高頻突變（hypermutation ）Benson S.Adaptive mutation: a general phenomenon or special case?Bioessays. 1997 Jan;19(1):9-11. Review.Galitski T, Roth JR. A search for a general phenomenon of adaptive mutability.Genetics. 1996 Jun;143(2):645-59.Dan I. Andersson, E. Susan Slechta, and John R. Roth Evidence

30、That Gene Amplification Underlies Adaptive Mutability of the Bacterial lac Operon。 Science 1998 November 6; 282: 1133-1135. Godoy VG, Fox MS. Transposon stability and a role for conjugational transfer in adaptive mutability.Proc Natl Acad Sci U S A. 2000 Jun 20;97(13):7393-8.Bull HJ, McKenzie GJ, Ha

31、stings PJ, Rosenberg SM. Evidence that stationary-phase hypermutation in the Escherichia coli chromosome is promoted by recombination. Genetics. 2000 Apr;154(4):1427-37.第五十二張，PPT共九十一頁，創作于2022年6月53點突變：堿基置換 轉換：嘧啶 嘧啶；嘌呤 嘌呤 T C A G 顛換：嘧啶 嘌呤；嘌呤 嘧啶 A T A C G T G C第四節 基因突變及修復二、常見的微生物突變類型 移碼突變 缺失：ABC AB ABC

32、 ABC 插入： ABC ABC ADB C 畸變： 缺失：abchijk 添加： 重復：abc abc def ghi 插入：abc pqr def ghi 易位： abc pqrst defghi 倒位： abc fed ghi 第五十三張，PPT共九十一頁，創作于2022年6月54第四節 基因突變及修復二、常見的微生物突變類型表型基因型這里主要介紹幾種常用的由于基因突變而造成微生物表型變化的突變型及其分離第五十四張，PPT共九十一頁，創作于2022年6月55第四節 基因突變及修復二、常見的微生物突變類型1）營養缺陷型（auxotroph）一種缺乏合成其生存所必須的營養物（包括氨基酸、維生

33、素、堿基等）的突變型，只有從周圍環境或培養基中獲得這些營養或其前體物（precursor）才能生長。營養缺陷型是微生物遺傳學研究中重要的選擇標記和育種的重要手段表型判斷的標準：在基本培養基上能否生長第五十五張，PPT共九十一頁，創作于2022年6月56第四節 基因突變及修復二、常見的微生物突變類型1）營養缺陷型（auxotroph）特點：在選擇培養基（一般為基本培養基）上不生長負選擇標記突變株不能通過選擇平板直接獲得第五十六張，PPT共九十一頁，創作于2022年6月571）營養缺陷型（auxotroph）影印平板（Replica plating）法是Lederberg夫婦在1952年建立第五十

34、七張，PPT共九十一頁，創作于2022年6月58第四節 基因突變及修復二、常見的微生物突變類型營養缺陷型的表示方法：1）營養缺陷型（auxotroph）基因型：所需營養物的前三個英文小寫斜體字母表示：hisC（組氨酸缺陷型，其中的大寫字母C同一表型中不同基因的突變）表型：同上，但第一個字母大寫，且不用斜體：HisC在具體使用時多用hisC-和hisC+，分別表示缺陷型和野生型。第五十八張，PPT共九十一頁，創作于2022年6月59第四節 基因突變及修復二、常見的微生物突變類型2）抗藥性突變型（resistant mutant）基因突變使菌株對某種或某幾種藥物，特別是抗生素，產生抗性。特點：正選

35、擇標記（突變株可直接從抗性平板上獲得-在加有相應抗生素的平板上，只有抗性突變能生長。所以很容易分離得到。）表示方法：所抗藥物的前三個小寫斜體英文字母加上“r”表示strr 和 strs 分別表示對鏈霉素的抗性和敏感性第五十九張，PPT共九十一頁，創作于2022年6月60第四節 基因突變及修復二、常見的微生物突變類型3）條件致死突變型（conditional lethal mutant） 在某一條件下具有致死效應，而在另一條件下沒有致死效應的突變型。常用的條件致死突變是溫度敏感突變，用ts（temperaturesensitive）表示，這類突變在高溫下（如42）是致死的，但可以在低溫（如25-

36、30）下得到這種突變。特點：負選擇標記這類突變型常被用來分離生長繁殖必需的突變基因第六十張，PPT共九十一頁，創作于2022年6月61第四節 基因突變及修復二、常見的微生物突變類型4）形態突變型（morphological mutant）造成形態改變的突變型特點：非選擇性突變突變株和野生型菌株均可生長，但可從形態特征上進行區分。舉例：產蛋白酶缺陷突變株的篩選菌落顏色變化半乳糖苷酶基因的插入失活，使重組子菌落為白色而與蘭色的非重組子分開。形成芽孢缺陷菌株細胞水平上的形態突變，突變株的檢出更加困難。第六十一張，PPT共九十一頁，創作于2022年6月62第四節 基因突變及修復二、常見的微生物突變類型

37、5）其它突變類型毒力、生產某種代謝產物的發酵能力的變化等在實際應用中具有重要意義，突變類型一般都不具有很明顯或可直接檢測到的表型。其突變株的獲得往往需要較大的工作量。第六十二張，PPT共九十一頁，創作于2022年6月63第四節 基因突變及修復三、誘變劑與致癌物質Ames試驗a）利用各種誘變劑獲得各類遺傳突變，進行誘變育種；c）危害人類自身的健康b）對有害微生物進行控制；很多種化學物質，能以各種機制導致DNA的突變第六十三張，PPT共九十一頁，創作于2022年6月64“生物化學統一性”法則：人和細菌在DNA的結構及特性方面是一致的，能使微生物發生突變的誘變劑必然也會作用于人的DNA，使其發生突變

38、，最后造成癌變或其他不良的后果。第六十四張，PPT共九十一頁，創作于2022年6月65誘變劑的共性原則：化學藥劑對細菌的誘變率與其對動物的致癌性成正比 超過95%的致癌物質對微生物有誘變作用90%以上的非致癌物質對微生物沒有誘變作用第六十五張，PPT共九十一頁，創作于2022年6月66回復突變(reverse mutation或back mutation)：突變體失去的野生型性狀，可以通過第二次突變得到恢復，這種第二次突變稱為回復突變美國加利福尼亞大學的Bruce Ames教授于1966年發明，因此稱為Ames試驗具體操作：檢測鼠傷寒沙門氏菌(Salmonella typhmurium)組氨酸

39、營養缺陷型菌株(his-)的回復突變率第六十六張，PPT共九十一頁，創作于2022年6月67Ames試驗第六十七張，PPT共九十一頁，創作于2022年6月68證明Ames試驗重要性的應用實例：國外曾開發了一種降低婦女妊娠反應的藥物“反應停”，由于其藥效顯著，在60-70年代十分流行，但隨后人們就發現畸形兒的出生率明顯增高，而且生產畸形兒的婦女大多曾服用“反應停”，后來采用Ames試驗發現這種物質的確具有很強的致突變作用，因此這種藥物被禁止使用但如果能在這種藥物上市之前就進行Ames試驗檢測，那么這種大量出生畸形兒的悲劇完全可以避免，第六十八張，PPT共九十一頁，創作于2022年6月69第四節

40、基因突變及修復三、誘變劑與致癌物質Ames試驗由于生物體內、體外可能存在的差異，可在體外加入哺乳動物（如大鼠）微粒體酶系統，使待測物活化，使Ames試驗的準確率達80-90%。第六十九張，PPT共九十一頁，創作于2022年6月70第五節 微生物的基因重組 基因重組將兩個不同性狀個體細胞內的基因轉移到一起，經過遺傳分子間的重新組合，形成新遺傳個體的方式。也稱遺傳重組。 原核微生物遺傳重組方式轉化作用轉導作用接合作用原生質體融合真核微生物遺傳重組方式有性生殖準性生殖原生質體融合基因重組在細胞水平上的反應第七十張，PPT共九十一頁，創作于2022年6月711. 原核微生物遺傳重組方式強調：缺乏有性系

41、統，基因重組時，兩個親本細胞并不提供等量的遺傳信息給其子代，只是交換小部分遺傳信息。 供體提供DNA的細菌細胞。受體獲得DNA的細菌細胞。（1）轉化 受體細胞直接吸收來自供體細胞的DNA片段或質粒DNA片段，并把它組合到自己的基因組中，從而獲得供體細胞部分遺傳性狀的現象。 轉化子含有供體DNA受體菌。三個階段： 感受態階段： 受體菌成為易接受DNA片段的生理狀態。 DNA的結合和吸收 雙鏈DNA片段與感受態細菌細胞表面的特定位點結合 DNA分子的一條鏈被降解，另一條鏈進入受體細胞。 DNA的整合 同源區段配對 受體DNA的相應單鏈片段被切割、降解 供體DNA整合，形成雜合DNA片段，復制、分離

42、。 第七十一張，PPT共九十一頁，創作于2022年6月72 轉化過程示意圖第七十二張，PPT共九十一頁，創作于2022年6月73（2）轉導作用 供體細胞的DNA通過噬菌體作為中間載體轉移至受體細胞中，通過交換、整合，從而獲得供體細胞部分遺傳性狀的現象。 是利用溫和性噬菌體和溶源細胞的特性來進行的。類型： 普遍轉導通過完全缺陷噬菌體噬菌體把供體菌的任何DNA小片段攜帶到受體菌中，而實現其遺傳性狀傳遞的轉導現象。 完全缺陷噬菌體的獲得：噬菌體侵染供體菌，在其體內復制增殖時，并不降解宿主DNA，而使宿主的染色體DNA斷裂。噬菌體裝配成熟時，極少數噬菌體衣殼包裝一小段供體菌DNA片段，即“誤包”，形成

43、了一個完全不含噬菌體自身DNA的假噬菌體，即為完全缺陷噬菌體噬菌體。 特異轉導通過部分缺陷的 溫和性噬菌體把供體菌的少數特定基因攜帶到受體菌中，并獲得表達的轉導現象。第七十三張，PPT共九十一頁，創作于2022年6月74轉 導 示 意 圖第七十四張，PPT共九十一頁，創作于2022年6月75接合轉移 兩種細菌細胞通過性菌毛直接接觸將DNA從一種細菌轉移到另一種細菌的現象。強調： 供體菌和受體菌都是完整的細胞 直接對接研究最清楚的是E.coli，決定其性別的是一種質粒F因子。 根據F因子在細胞中的有無及存在方式的不同，分為四種接合類型：F +菌株 ：細胞中存在游離狀態的F因子，有相應的性菌毛。F

44、 -菌株 ：細胞中無F因子，無性菌毛。Hfr菌株： F因子以整合狀態存在于核染色體DNA的特定位點上 Hfr菌株與F -菌株接合后，發生的重組頻率要比F +菌株 與F -菌株 的重組頻率高出數百倍， 故又名高頻重組菌株。F 菌株：當Hfr菌株內的F因子不正常切離而脫離染色體時，形成了游離的但 攜帶了一小段染色體基因的F因子。第七十五張，PPT共九十一頁，創作于2022年6月76第七十六張，PPT共九十一頁，創作于2022年6月77與F +菌株接合 分離或消除與核染色體DNA整合正常切離不正常切離分離或消除與F接合 F -菌株F +菌株Hfr菌株F菌株 F因子的存在方式與相互關系第七十七張，PP

45、T共九十一頁，創作于2022年6月782. 真核微生物遺傳重組方式 有性生殖兩個性細胞結合后形成新個體的繁殖方式。 經歷了質配、核配和減數分裂三個過程。 準性生殖是一些 半知菌亞門真菌所特有的類似于有性生殖，但比 有性生殖更為原始的一種生殖方式。它可使同一生物的 兩個不同來源的體細胞經質配、核配，但不通過減數分裂 而導致低頻率基因重組。 三個階段： 異核體的形成： 兩個體細胞接合形成雙相異核體 二倍體化：即核配，核融合，形成二倍體雜合子。 體細胞交換和單倍體化： 雜合的二倍體有絲分裂過程中，染色體可以進行部分 基因的交換。第七十八張，PPT共九十一頁，創作于2022年6月79第七十九張，PPT共九十一頁，創作于2022年6月80 準性生殖與有性生殖的主要差別 準性生殖 有性生殖參與接合的親本細胞 形態相同的體細胞 形態相同或不同，但生理 上有分化的性細胞獨立生活的異核階段 有 無接合后雙倍體的細胞狀態 與單倍體基本相同 與單