1、散射免疫比濁法散射免疫比濁法第1頁目錄 第一節 免疫比濁技術原理 第二節 自動化免疫比濁分析 第三節 小結 散射免疫比濁法第2頁第一節 免疫比濁技術原理免疫比濁技術分類：透射免疫比濁法（turbidimetric immunoassay）散射免疫比濁法（nephelometry immunoassay）速率散射比濁法終點散射比濁法散射免疫比濁法第3頁一、透射免疫比濁法 當一定波長光經過抗原抗體反應形成免疫復合物時會因為反射和吸收而減弱，一定范圍內，透射光被吸收量與復合物量呈正相關關系，而復合物量與抗原抗體量為一定函數關系。（一）基礎原理散射免疫比濁法第4頁 在抗原或抗體量一定條件下，能夠利用比

2、濁儀在光源光路方向上測定透射光強度與入射光強度比值或吸光度，來判斷待測抗原量，這種方法稱為透射比濁法 。散射免疫比濁法第5頁透射免疫比濁法光路圖散射免疫比濁法第6頁待測抗原抗體復合物分子量足夠大?？乖贵w復合物數量足夠多。含有充分反應時間。高親和力抗體，并確?？贵w過量。（二）技術要求散射免疫比濁法第7頁 透射免疫比濁法靈敏度是單向瓊脂擴散方法510倍，但其與標識免疫分析技術相比還不夠高。所以，透射比濁類自動分析儀用于免疫測定已趨降低，該測定原理主要用于生化分析儀。（三）方法學評價散射免疫比濁法第8頁抗原抗體反應曲線散射免疫比濁法第9頁二、散射免疫比濁法散射比濁法是指一定波長光沿水平軸照射，經過

3、溶液時碰到其中抗原抗體復合物，光線被粒子顆粒折射而發生偏轉，產 生散射光。（一）基礎原理散射免疫比濁法第10頁 其中光線偏轉角度與發射光波長和抗原抗體復合物大小和多少親密相關。散射光強度與復合物含量成正比，即待測抗原越多，形成復合物越多，散射光就越強。散射免疫比濁法第11頁透射濁度法和散射濁度法光路散射免疫比濁法第12頁 應選擇適當光源強度、反應時間、測量角度及光源波長。另外，要注意確?？乖瓭舛冗m當。另外，還要選擇適宜離子強度、pH值等。（二）技術要求散射免疫比濁法第13頁 散射免疫比濁法是當今免疫化學分析中比較有優勢方法。能夠實現自動化管理，但用于免疫沉淀反應有很多缺點，如因為是一次性測定光

4、吸收值，沒有考慮單個待測樣本散射效果，可能使測定結果不準確。（三）方法學評價散射免疫比濁法第14頁 測定時間依然較長，且隨時間延長，抗原抗體復合物有重新結合趨勢，可影響散射值改變及存在反應本底，在微量測定時，本底干擾是影響測定準確性主要原因。散射免疫比濁法第15頁三、速率免疫比濁法該法是抗原抗體結合反應一個動態測定方法。將抗原抗體沉淀反應與散射比濁分析相結合，對單位時間內抗原和抗體結合形成復合物速度進行動力學測定即為速率免疫比濁法。（一）基礎原理散射免疫比濁法第16頁 當抗體濃度固定于一定范圍時，速度峰值高低與抗原含量成正比，伴隨時間延長，免疫復合物量逐步增多，抗原抗體結合速度峰值在一定時間出

5、現。經過微機處理即可得到待測蛋白成份含量。散射免疫比濁法第17頁累計時間復合物產生總量產生速率510152025303540455055608132560150230300360415450480500512359080706055453020 抗原抗體復合物形成時間與速率關系散射免疫比濁法第18頁 速率散射比濁法峰值出現時間與抗體濃度及純度直接相關，需選取抗體純度及親和力交高試劑。另外，要確保待測樣本血清性狀符合要求，如嚴重脂血等即為不合格樣本。（二）技術要求散射免疫比濁法第19頁 該法含有快速、敏感度及精密度高特點，其最大優點在于快速，檢測無須等到抗原抗體到達平衡，大大節約反應時間，每小時

6、可檢測標本數十份；敏感度高，最小檢出量達微克/升水平。（三）方法學評價散射免疫比濁法第20頁四、免疫膠乳比濁法將抗體吸附在大小適中、均勻一致膠乳顆粒上，制成致敏膠乳顆粒，當碰到對應抗原時，發生交聯反應，形成抗原抗體復合物，膠乳顆粒發生凝集。（一）基礎原理散射免疫比濁法第21頁 單個膠乳顆粒在入射光波長之內并不妨礙光線透過，兩個及其兩個以上膠乳顆粒凝聚時則使透過光降低，其降低程度與膠乳顆粒凝聚程度呈正比，即與待測抗原量呈正比，由此可檢測樣本中特定抗原含量。散射免疫比濁法第22頁 膠乳顆粒均一性將直接影響光散射作用，影響檢測結果，所以需要選擇均勻一致膠乳顆粒。另外，試劑需要加保護劑以提升其穩定性，

7、所用器皿要潔凈，防止雜質微粒干擾。（二）技術要求散射免疫比濁法第23頁 該法敏感度高，試劑穩定，個體免疫復合物對結果影響也小，所以結果穩定、可靠，特異性好，準確度高，且不需要特殊儀器設備，普通分光光度計、自動化生化分析儀或散射比濁儀均可使用。返回章目錄（三）方法學評價散射免疫比濁法第24頁（一）BN特種蛋白分析測定系統該系統測定方法是透射免疫比濁法一個改良。以發光二極管作為光源，檢測前向角1324度散射光，然后利用硅化光電二極管接收散射光信號，經過微電腦處理，與標準曲線進行比較，最終轉換成待檢物質濃度。第二節 自動化免疫比濁分析一、主流免疫比濁設備概況1.測定原理散射免疫比濁法第25頁 系統由

8、分析儀、計算機、條碼讀取器、打印機四個別組成，其中分析儀是主要組成個別，包含散射測濁儀、自動加樣系統、運輸裝置和比色杯裝置。 2.儀器基礎組成散射免疫比濁法第26頁BN100、BN特種蛋白分析分析系統散射免疫比濁法第27頁本系統屬于速率散射比濁分析法，在抗體過量前提下，光束經過抗原抗體復合物時所產生散射光速率改變大小與抗原濃度成正比。速率峰值經過電腦處理系統轉換成待測抗原濃度。1.測定原理（二）ARRAY分析系統散射免疫比濁法第28頁 ARRAY系統由分析儀、電腦處理系統、打印機組成，其主要組成個別為分析儀，由加液系統、散射測濁儀、40孔樣本轉盤、20孔試劑轉盤、軟盤驅動器等組成。2.儀器基礎組成散射免疫比濁法第29頁Array360、IMMAGE特種蛋白分析分析系統散射免疫比濁法第30頁二、免疫比濁分析主要影響原因1抗原抗體百分比 抗原抗體百分比要適當。2抗體純度與效價 診療試劑應盡可能選擇高純度與高效價抗體。3免疫復合物大小及穩定性 溶液中免疫復合物顆粒分散度盡可能相同，顆粒應該不輕易相互聚集。散射免疫比濁法第31頁4增聚劑 利用增聚劑破壞抗原抗體水化層，促進反應進行。5. 離子強度 PBS是很好反應液 。 返回章目錄散射免疫比濁法第32頁小 結 經典免疫沉淀反應通常是在抗原抗體反應終點進行結果判斷，存在操作繁