1、前列腺組織二氫睪酮結合蛋白與性激素作用的研究【摘要】目的測定前列腺組織中DHT結合蛋白的DHT結合容量，研究睪酮、雌二醇、孕酮對DHT結合容量的影響，初步分析DHT結合蛋白與性激素作用的性質。方法20例正常前列腺組織，制備組織胞漿提取液，乙醚萃取去除提取液中所有的內源性類固醇激素，參加3H-DHT測定結合容量，并以等量和10倍量的T、E2、P與3H-DHT競爭DHT結合容量。結果前列腺組織胞漿單純DHT結合容量是(0.01430.0022)nl/g濕組織，T、E2與DHT競爭結合蛋白的作用較強，降低DHT結合容量的作用比擬明顯，P的結合作用較弱，對結合容量的影響較校結論前列腺組織胞漿中的DHT

2、結合蛋白組成復雜，性質各異，有很強的結合DHT才能，與T、E2、P互相作用，共同影響前列腺組織中DHT的狀態。【關鍵詞】前列腺雄激素雌激素孕激素雄激素結合蛋白【Abstrat】bjetivesThisexperientistquantifythettalDHT(Dihydrteststerne)-bindingabilityfDHT-bindingprtEinsinprstatebyassayingtheDHT-bindingapaity,andtstudythehangefDHT-bindingapaityausingbythebinatinfTTeststerne,E2(Estrdil),

3、P(Prgeststerne)andDHT-bindingprtein,andtanalyzepreliinarilytheeffetsfsexhrnenDHT-bindingprteinfprstate.ethdTbtainytslifrainsfr20nraltissuestakenfraident-deathrpsesithutseriusdiseases,andthentrevealltheendgenushrnefrtheytslifrainsbyetherstripping.Tassaythententfthebund3HDHT.TaddthesaedsefT、E2、Ptpetea

4、gainst3HDHTfrDHTprtein,andthentadd10tiesdsefT、E2、Ptpeteith3HDHTfrDHTprtein.ResultsThealneDHT-bindingapaityftheytslifratinsinprstateis(0.01430.0022)nl/gettissue.TandE2haverebviuseffetnreduingtheDHT-bindingapaityftheytslifratinhilePhaslesseffetnreduingtheDHT-bindingapaity.nlusinsThereareanykindsfDHT-b

5、indingprteinsintheytslifratininprstatetissuesandtheirehanissaredifferent.TheprteinshavestrngDHT-bindingapaity,andtheyinteratithT、E2、PtaffettheDHTstateintheprstatetissues.【Keyrds】PrstateAndrgenEstrgenPrgeststerneAndrgen-bindingprtein前列腺組織中存在多種二氫睪酮Dihydrteststerne，DHT結合蛋白，這些蛋白的性質和生理作用尚不十清楚確。作者自2001年2月

6、至2022年5月實驗設計測定DHT結合容量來描繪這些結合蛋白總的DHT結合才能，并以睪酮(T)、雌二醇(E2)、孕酮(P)與DHT競爭結合蛋白的作用研究正常前列腺DHT結合容量的變化，并初步分析DHT結合蛋白與性激素作用的性質。1材料和方法1.1前列腺組織標本20例正常前列腺組織取自無嚴重疾患的安康男性尸體，年齡2244歲，平均35.7歲。組織塊獲取距臨床診斷死亡時間15in。所有組織均經病理證實。組織獲取后以冰生理鹽水洗凈血跡，保存腺體本質部分，濾紙吸干，置入液氮中凍結，然后轉放-70冰箱存放待用。1.2試劑3H-DHT購自中國科學院上海核技術開發公司1.2.4.53H-DHT，放射性比強度

7、：50i/l，放化純度：95%，放射性濃度：1i/l，檢測儀器為BEKAN公司LS-6500型液態閃爍記數儀。E2、T、P為SIGA公司產品。1.3實驗方法(1)胞漿提取液準備：制備胞漿提取液，去除胞漿提取液內源性類固醇激素，將胞漿提取液參加2倍體積的乙醚萃取類固醇激素，均勻而柔和震蕩2in，靜置6h，1000g離心1in，去除上層乙醚，重復1次，去乙醚后，靜置過夜，以揮發剩余乙醚，汲取所需量的下層樣品。(2)3H-DHT結合和測定：3H-DHT溶液準備：0.4l3H-DHT試劑參加1.2l99%乙醇混勻，取50l溶于4950l甘油磷酸鹽緩沖液1n磷酸二氫鉀(KH2P4)，氫氧化鈉(NaH)微

8、調至pH7.4，含10%甘油(Glyerl)(v/v)，3H-DHT終濃度為50n。T、E2、P溶液：先配置5pH激素濃度的異丙醇溶液，用99%乙醇稀釋10倍，再以上述甘油磷酸鹽緩沖液稀釋1000倍，此濃度500n，為3H-DHT溶液濃度的10倍，留取一部分備用；另一部分繼續甘油磷酸鹽緩沖液稀釋10倍，濃度50n，等同于3H-DHT溶液濃度，備用。另配不含任何激素的空白對照溶液，過程同。閃爍液：PP6g、PPP0.3g、萘50g溶于甲苯1000l。操作步驟：取已去除內源類固醇激素的樣品，每一樣品分為4份，每份350l，分別參加20l空白對照溶液、50n的T溶液、50n的E2溶液、50n的P溶液

9、，然后所有樣品溶液均參加3H-DHT溶液20l，混勻，靜置孵育18h。參加2倍體積的乙醚，均勻而柔和震蕩2in萃取未結合的3H-DHT，1000g離心1in，去除上層乙醚，汲取200l下層樣品。實驗同時以2份350lPGB緩沖液各參加20l3H-DHT溶液分別作為空白對照記數步驟同前和總記數略去乙醚萃取步驟，其余同前。以上全部操作在4進展。將汲取的200l樣品參加蛋白酶K終濃度100g/l、SDS終濃度0.5%，37過夜，參加5l閃爍液，細微震蕩2h做液閃記數。以上為等量激素的競爭結合實驗，再用500n的T溶液、E2溶液、P溶液交換相應的激素溶液，其余步驟同，做10倍激素的競爭結合實驗。根據3

10、H-DHT含量的計數：總記數p-空白對照p，和待測樣品的計數：樣品p-空白對照p計算樣品結合3H-DHT含量。實驗為同一樣品不同處理的自身配對設計，統計分析為t檢驗。2結果2.1前列腺組織胞漿單純DHT結合容量是(0.01430.0022)nl/g濕組織，均數相當于4.2ng/g濕組織。2.2與DHT等量性激素對胞漿DHT結合容量的影響，見表1。參加T或E2的DHT結合容量低于單純DHT結合容量，有顯著性差異P0.05，P的作用無顯著性差異P0.05。等量時T和E2作用的DHT結合容量低于P，有顯著性差異P0.05，但T和E2作用無顯著性差異P0.05。2.310倍于DHT量性激素對胞漿DHT

11、結合容量的影響見表1，不但T或E2作用的DHT結合容量低于單純DHT結合容量，P作用下的結合容量也低于單純DHT結合容量，均有顯著性差異P0.05。表120例標本性激素對DHT結合容量的影響nl/g濕組織3討論二氫睪酮(DHT)是影響前列腺生理和引起前列腺組織增生最重要的雄激素，前列腺組織中有高濃度的DHT，含量到達500ng/100g濕組織，而血漿DHT含量僅有5620ng/100l(每100g前列腺濕組織的體積約等于100l)，其中游離DHT極微量，由于DHT是甾體激素，其游離狀態易于依濃度梯度擴散進入/逸出組織細胞，有研究說明，前列腺組織中除外雄激素受體，還有多種DHT結合蛋白，其中有高

12、親和力的性激素結合球蛋白，組織中這些蛋白的存在可能起到類似血漿中白蛋白和性激素結合球蛋白的對雄激素的結合聚積作用，在組織中的游離DHT環境結合大量DHT形成“DHT庫，同時，蛋白與DHT的結合減少了部分游離DHT的濃度，有利于產生血漿游離DHT被動擴散進入組織的濃度梯度，易于前列腺利用外源的DHT，更促使組織中DHT的富積，便于其發揮生理作用。然而這些蛋白的作用和性質還知之甚少。胞漿是DHT產生和貯存的主要場所，而胞核是DHT-雄激素受體啟動轉錄的部位，因此實驗設計主要研究胞漿中的DHT結合蛋白的作用性質。實驗結果，前列腺組織胞漿的DHT結合容量為(0.01430.0022)nl/g濕組織，均

13、數大約為4.2ng/g濕組織，比擬血漿中DHT含量僅有(0.560.20)ng/l其中游離DHT極微量，提示前列腺組織胞漿有很強的DHT結合才能，利于部分攝取和貯存DHT包括胞漿部分產生和血漿來源，最終有利于DHT進入胞核與受體作用。T、E2、P對胞漿DHT結合容量的影響，DHT結合容量只是反映結合DHT的量，由于結合蛋白的非特異性如前列腺組織中的性激素結合球蛋白，在生理條件下實際結合DHT可能會受到其他激素如雄激素、雌、孕激素的影響，因此，從DHT結合蛋白與多種性激素的作用初步分析這些蛋白與激素的作用。等量T、E2、P與DHT的競爭作用：與單純DHT結合容量相比擬，在同DHT等量存在的T、E

14、2競爭作用下，結合容量顯著降低，P雖然降低了結合容量，但無顯著性差異。說明T、E2具有明顯的與DHT競爭結合蛋白的作用，提示在DHT結合蛋白中存在著與E2親和力較高的蛋白性激素結合球蛋白即是其一，由于雌激素以協同DHT誘導前列腺組織的生長，因此E2參與競爭結合胞漿DHT結合蛋白的作用可能是一種雌雄激素協調機制，有關與E2結合的這類蛋白的性質和作用機制值得研究。而比擬這T、E2與DHT競爭結合蛋白的作用結果，E2作用的DHT結合容量略低于T的作用，無顯著性差異。DHT結合蛋白與T、E2、P具有親和力的性質，提示了蛋白組成的復雜性以及同類固醇激素作用的廣泛性；同時，T、E2、P與DHT結合蛋白的競

15、爭結合將影響到部分游離DHT的含量，可能會對DHT的生理作用產生影響。【參考文獻】1江洪濤,陳昭典.前列腺組織性激素結合球蛋白的研究.中華男科學雜志,2022,10(6)：443448.2江洪濤,陳昭典.前列腺組織雙氫睪酮結合容量與年齡的關系及意義.中國男科學雜志,2022,211：3234.3HeraekJ,RihardH,artinH,etal.Tissueandserulevelsfprinipalandrgensinbenignprstatihyperplasiaandprstateaner.sterids,2022,72(4):375380.4PartinA,RdriguezR.TheleularBilgy,Endrinlgy,andPhysilgyfthePrstateandSeinalVesiles.In:alshP,editr-in-hief.apbellsUrlgy.8thed.Philadelph