1、任務二水中大腸菌群數的測定水中總大腸菌群的測定檢驗依據：方法：多管發酵法總大腸菌群總大腸菌群37、發酵乳糖、需氧和兼性厭氧、革蘭氏陰性、無芽孢桿菌 糞大腸菌群耐熱-總大腸菌群 非糞大腸菌群EC肉湯士0.5總大腸菌群MPN most probable number最可能數或最近似數總大腸菌群MPN100mL水樣中所含的總大腸菌群的最近似數或最可能數指示菌總大腸菌群指示菌應具有的條件和腸道致病菌的來源一樣在外界環境中的生存時間長檢驗方法比較簡便實驗目標掌握生活飲用水總大腸菌群的測定方法掌握水源水總大腸菌群的測定方法判定水被腸道致病菌污染的程度和水的衛生質量實驗內容1乳糖發酵試驗4證實試驗5結果分析

2、與報告1培養基制備2乳糖發酵試驗3別離培養實驗器材水樣生活飲用水、水源水培養基乳糖蛋白胨培養液、伊紅美蘭培養基試劑革蘭氏染色液、稀釋劑等實驗器材其他無菌工作臺、酒精燈、稀釋液、滅菌吸管、滅菌試管、小倒管、試管架、接種環、恒溫培養箱、高壓蒸汽滅菌器、載玻片、香柏油、平皿、天平、電爐等培養基制備乳糖發酵管雙料管單料管伊紅美蘭平板放置小倒管并排氣檢驗程序生活飲用水接種乳糖發酵試驗別離培養證實試驗結果報告水源水稀釋與接種一、乳糖發酵初發酵試驗自來水直接接種10mL水樣于雙料培養基，每個水樣共接種5管水源水加大稀釋度，每個稀釋度接種5管，每個水樣共接種15管 各10ml1ml各1ml水樣1:10稀釋水各

3、1ml乳糖發酵試驗一、乳糖發酵初發酵試驗培養36士l24h士2h觀察產酸產氣情況不產酸產氣產酸產氣第二天二、別離培養產酸產氣的發酵管分別轉種EMB平板分區劃線36士l24h士2h第三天三、證實試驗復發酵試驗觀察EMB平板菌落形態深紫黑色、具有金屬光澤的菌落紫黑色、不帶或略帶金屬光澤的菌落淡紫紅色、中心較深的菌落一半進展涂片、染色、鏡檢另一半進展接種證實試驗用三、證實試驗復發酵試驗只有染色鏡檢為革蘭氏陰性無芽孢桿菌才接種乳糖蛋白胨管36士l24h士2h第四天四、結果報告觀察乳糖發酵管產氣情況產酸產氣者，即證實有總大腸菌群存在查MPN 檢索表根據證實為總大腸菌群陽性的管數報告每100ml水樣中的總

4、大腸菌群最可能數MPN四、結果報告5管法結果見表1，15管法結果見表2四、結果報告表1 用5份10mL水樣時各種陽性和陰性結果組合時的最可能數MPN )5個10mL管中陽性管數 最可能數（MPN） 016.0四、結果報告表2 總大腸菌群MPN檢索表(局部總接種量，其中5份10mL水樣，5份1mL水樣，5份水樣接種量/ mL總大腸菌群/(MPN/100mL) 接種量/ mL總大腸菌群/(MPN/100mL)10ml管1ml管0.1ml管10ml管1ml管0.1ml管00021002001210140024102600351038004710410005910512四、結果報告稀釋樣品查表后所得結

5、果應乘稀釋倍數表2采用3個稀釋度10mL、1mL 和0.1mL),每個稀釋度5管表2內所列接種量如改用100mL、10mL和1mL時，表內數字應相應降低10倍；如改為1mL、和 時,那么表內數字應相應增加10倍。其余可類推。四、結果報告所有乳糖發酵管均陰性，可報告總大腸菌群未檢出。本卷須知1.無菌操作。2.每遞增稀釋一次，即換一支1mL滅菌吸管。3.培養基使用前應先檢查培養基內小倒管中有無氣泡。4.接種量在1ml及以下時用單料培養基，接種量超過1ml時用雙料培養基。5.檢樣從開場稀釋到接種所用時間不宜超過15min。習題作業 1.判斷食品是否被腸道致病菌所污染及其污染程度時，常用總大腸菌群作為指示菌來表示，該指示菌應具備的條件有哪些。 2.總大腸菌群和糞大腸菌群有什么區別？如何區分糞大腸菌群和非糞大腸菌群。習題作業 3.檢樣從開場稀釋到接種所用時間不