1、關于乳酸菌檢驗操作規范培訓第一張，PPT共三十七頁，創作于2022年6月目錄一、乳酸菌二、儀器設備三、 培養基四、無菌室準備五、接種培養六、菌落計數七、乳酸菌在改良MC培養基上菌落特征八、過氧化氫酶試驗第二張，PPT共三十七頁，創作于2022年6月一、乳酸菌1、乳酸菌的概念乳酸菌一詞并非生物分類學名詞，而是指能夠利用發酵性糖類產生大量乳酸的一類微生物的統稱。通常將乳酸細菌之類群稱為乳酸菌。第三張，PPT共三十七頁，創作于2022年6月2、乳酸菌主要分布乳桿菌屬（Lactobacillus） 鏈球菌屬（Streptococcus）明串珠菌屬（Leuconostoc）片球菌屬（Pediococcu

2、s）雙歧桿菌屬（Bifidobacterium）第四張，PPT共三十七頁，創作于2022年6月（一）乳桿菌屬（Lactobacillus）1乳桿菌屬的形態特征 細胞呈桿狀，多為長桿狀、短桿狀及棒桿狀，一般成短鏈排列。革蘭氏染色陽性，通常不運動，無芽孢。第五張，PPT共三十七頁，創作于2022年6月2乳桿菌屬的生物學特點 化能異養型，營養要求嚴格，生長繁殖需要多種氨基酸、維生素、肽、核酸衍生物。 厭氧、耐氧性厭氧或兼性厭氧 生長最適pH為5.56.2，在pH5的環境中可生長，而中性或初始堿性條件下生長速率降低。生長溫度范圍，253，最適生長溫度3040。 第六張，PPT共三十七頁，創作于2022

3、年6月3乳桿菌屬的代表種 3.1保加利亞乳桿菌（L.bulgaricus）細胞形態長桿狀，兩端鈍圓。固體培養基生長的菌落呈棉花狀，易與其它乳酸菌區別。能利用葡萄糖、果糖、乳糖進行同型乳酸發酵產生D型乳酸（有酸澀味，適口性差），不能利用蔗糖。第七張，PPT共三十七頁，創作于2022年6月該菌是乳酸菌中產酸能力最強的菌種。蛋白質分解力較弱，發酵乳中可產生香味物質乙醛。最適生長溫度3745，溫度高于50或低于20不生長。常作為發酵酸奶的生產菌。 第八張，PPT共三十七頁，創作于2022年6月3.2嗜酸乳桿菌（L.acidophilus） 細胞形態比保加利亞乳桿菌小，呈細長桿狀，能利用葡萄糖、果糖、乳

4、糖、蔗糖進行同型乳酸發酵產生乳酸。最適生長溫度37，20以下不生長，耐熱性差。蛋白質分解力較弱。 第九張，PPT共三十七頁，創作于2022年6月最適生長pH 5.56.0，耐酸性強，能在其它乳酸菌不能生長的酸性環境中生長繁殖。嗜酸乳桿菌是能夠在人體腸道定殖的少數有益微生物菌群之一，其代謝產物有機酸和抗菌物質乳桿菌素可抑制病原菌和腐敗菌的生長。 第十張，PPT共三十七頁，創作于2022年6月（二）鏈球菌屬（Streptococcus）1鏈球菌屬的形態特征 細胞呈球形或卵圓形，成對或成鏈排列。革蘭氏染色陽性，無芽孢，一般不運動，不產生色素。第十一張，PPT共三十七頁，創作于2022年6月2鏈球菌屬

5、的生物學特點 化能異養型，同型乳酸發酵產生右旋乳酸；兼性厭氧型，接觸酶反應陰性，厭氧培養生長良好。 第十二張，PPT共三十七頁，創作于2022年6月3鏈球菌屬的代表種 嗜熱鏈球菌（St.thermophilus） 細胞形態呈鏈球狀。能利用葡萄糖、果糖、乳糖和蔗糖進行發酵產生乳酸 。第十三張，PPT共三十七頁，創作于2022年6月蛋白質分解力較弱，在發酵乳中可產生香味物質雙乙酰。 該菌主要特征是能在高溫條件下產酸，最適生長溫度4045，溫度低于20不產酸。耐熱性強，能耐6568的高溫。第十四張，PPT共三十七頁，創作于2022年6月（三）明串珠菌屬（Leuconostoc） 菌落一般小于1.0m

6、m，光滑、圓形、灰白色 細胞球形或豆狀，成對或成鏈排列 。革蘭氏染色陽性，不運動，無芽孢。第十五張，PPT共三十七頁，創作于2022年6月（四）雙歧桿菌屬（Bifidobacterium） 1雙歧桿菌屬的形態特征 細胞呈多樣形態：Y字型、V字型、彎曲狀、勺型，典型形態為分叉桿菌 革蘭氏染色陽性，亞甲基蘭染色菌體著色不規則。無芽孢和鞭毛，不運動。 第十六張，PPT共三十七頁，創作于2022年6月2雙歧桿菌屬的生物學特點 化能異養型，對營養要求苛刻，生長繁殖需要多種雙歧因子 。能利用葡萄糖、果糖、乳糖和半乳糖，生成乳酸和乙酸及少量的甲酸和琥珀酸。 蛋白質分解力微弱。第十七張，PPT共三十七頁，創作

7、于2022年6月專性厭氧，但不同菌種或菌株對氧的敏感性存在差異，多次傳代培養后，菌株的耐氧性增強。生長溫度范圍2545，最適生長溫度37。生長pH值范圍4.58.5，最適生長起始pH值6.57.0，不耐酸，酸性環境（pH5.5）對菌體存活不利。 第十八張，PPT共三十七頁，創作于2022年6月3、代表種 人體腸道中共有8種，其中數量最多的5種為：兩歧雙歧桿菌（B.bifidum）嬰兒雙歧桿菌（B.infantis）青春雙歧桿菌（B.adolescentis）長雙歧桿菌（B.longum）短雙歧桿菌(B.breve)第十九張，PPT共三十七頁，創作于2022年6月4、雙歧桿菌功能是人體腸道有益菌

8、群，它可定殖在宿主的腸粘膜上形成生物學屏障 具有拮抗致病菌、改善微生態平衡、合成多種微生素、提供營養、抗腫瘤、降低內毒素、提高免疫力、保護造血器官、降低膽固醇水平等重要生理功能，其促進人體健康的有益作用，遠遠超過其它乳酸菌。 第二十張，PPT共三十七頁，創作于2022年6月二、檢測儀器設備 冰箱：04恒溫培養箱：361恒溫水浴鍋：461微生物顯微鏡架盤藥物天平：0g500g，精確至0.5g三角瓶：500ml滅菌刻度吸管：1ml、10ml 滅菌平皿：直徑90mm第二十一張，PPT共三十七頁，創作于2022年6月三、 培養基 1、改良MC培養基 成分：大豆蛋白胨，5g；牛肉浸膏，5g;酵母浸膏，5

9、g；葡萄糖，20g；乳糖， 20g；碳酸鈣， 10g；瓊脂，15g；蒸餾水，1000mL；1的中性紅溶液，5mL；硫酸多粘菌素B，10萬IU。 11515分鐘高壓滅菌備用。第二十二張，PPT共三十七頁，創作于2022年6月2、培養基的準備使用前，將滅菌培養基用微波爐或水浴鍋加熱溶解，在4045水浴中保溫待用。第二十三張，PPT共三十七頁，創作于2022年6月四、無菌室準備無菌室使用前后，用紫外燈照射3040min。將工作服、工作帽和工作鞋放入無菌室進行滅菌，進入無菌室前換上工作服、工作帽和工作鞋。第二十四張，PPT共三十七頁，創作于2022年6月超凈工作臺面，使用前用75%酒精擦拭消毒后，用紫

10、外燈照射4045min；操作結束后，用潔凈抹布將操作臺面擦拭干凈后，用75%的酒精棉球進行擦拭，開啟紫外燈照射4045min。第二十五張，PPT共三十七頁，創作于2022年6月五、接種培養 以無菌操作，用1ml滅菌刻度吸管吸取1ml樣品原液，注入含有滅菌生理鹽水的試管內，充分振搖，制成1:10的稀釋液。注意：刻度吸管尖端不要觸及試管內生理鹽水。第二十六張，PPT共三十七頁，創作于2022年6月用1ml滅菌刻度吸管吸取1ml1:10的稀釋液，注入含有滅菌生理鹽水的試管內，振搖試管，混合均勻。注意：吸取稀釋液前，用刻度吸管吹打，使稀 釋混合均勻。刻度吸管尖端不要觸及管內稀釋液。第二十七張，PPT共

11、三十七頁，創作于2022年6月另取1ml滅菌刻度吸管，按上述操作順序，做10倍遞增稀釋液，如此每遞增一次，即換用1支1ml滅菌刻度吸管。第二十八張，PPT共三十七頁，創作于2022年6月在無菌操作條件下，用1ml滅菌刻度吸管吸取選定的樣品稀釋液或原液至滅菌平皿內。 同上對同一樣品重復操作，即每個選定的適當的樣品稀釋液做兩個平皿。 第二十九張，PPT共三十七頁，創作于2022年6月按以上步驟，以1ml滅菌生理鹽水作為空白操作對照。 在無菌操作條件下，將約15ml的改良MC培養基傾入樣品平皿中，將平皿置于操作臺面上輕輕轉動，使樣品和培養基混合均勻。 第三十張，PPT共三十七頁，創作于2022年6月

12、接種培養操作錄像檢測乳酸菌檢測.MPG第三十一張，PPT共三十七頁，創作于2022年6月討論錄像中存在細節問題：1、拿平板前先消毒手2、倒培養基前要對培養基的瓶進行消毒，可以酒精棉球消毒和酒精燈外焰消毒。第三十二張，PPT共三十七頁，創作于2022年6月待培養基凝固后，將平皿翻轉，即有培養基的一面向上。 將所有平皿置于361培養箱中，培養723h，觀察乳酸菌菌落特征。 第三十三張，PPT共三十七頁，創作于2022年6月六、菌落計數 選取菌落數在30300之間的平皿進行計數。 計數后，隨機挑取五個菌落進行革蘭氏染色，顯微鏡檢查并做過氧化氫酶試驗。 革蘭氏陽性，過氧化氫酶陰性，無芽孢的球菌或桿菌可定為乳酸菌。第三十四張，PPT共三十七頁，創作于2022年6月根據證實為乳酸菌菌落計算出該皿內的乳酸菌數，乘以其稀釋倍數即得每毫升樣品中乳酸菌數。例如檢樣10-4的稀釋液在改良MC平板上，生成可疑菌落為35個，取五個鑒定，證實為乳酸菌的是四個，則1ml樣品中乳酸菌數為：35*4/