1、試驗(yàn)十一、抗心肌缺血藥物作用研究 1一、目的了解抗心肌缺血新藥的評(píng)價(jià)原則。學(xué)習(xí)心肌缺血?jiǎng)游锬Ｐ徒⒎椒霸u(píng)價(jià)指標(biāo)。觀察受試化合物對(duì)心肌缺血大鼠的影響，判斷其是否具有抗大鼠心肌失常的作用。 2二、與試驗(yàn)相關(guān)的理論知識(shí)要點(diǎn) 心肌缺血觀察指標(biāo)與方法 心肌缺血，是指心臟的血液灌注減少，導(dǎo)致心臟的供氧減少，心肌能量代謝不正常，不能支持心臟正常工作的一種病理狀態(tài)。（1）心電圖指標(biāo)觀察： 皮下放置心電圖肢體導(dǎo)聯(lián)電極，測(cè)標(biāo)準(zhǔn)導(dǎo)心電圖觀察藥物對(duì)S-T段、T波幅度的影響。3（2）形態(tài)學(xué)觀察：1.摘取心臟，用生理鹽水沖洗，除去血污，剔除血管脂肪等非心肌組織，用吸水紙吸去水分，稱全心濕重。2.沿冠狀溝切除右心房和右心

2、室，留下室間隔和左心室，稱重。順?lè)渴覝蠌男募獾叫幕科叫袑⒐沸氖仪谐?cm厚的心肌片，用生理鹽水沖洗干凈。43.將心肌片放在1%的氯化三苯基四氮唑（TTC,用pH7.47.8的0.2mol/L PBS配制）溶液中，在37溫孵7min染色,染色過(guò)程中不時(shí)攪拌染色液使之與心肌有充分接觸。4.染色后立即用生理鹽水沖洗多余的染料。 梗死區(qū)不著色，非梗死區(qū)被TTC染為紅色。5.剪去各心肌片被染色的非梗死區(qū)心肌，把未染色的梗死心肌稱重，除以左心室重即得梗死范圍占左心室重的%。5（3）酶學(xué)測(cè)定： 測(cè)定血液、心肌組織中的肌酸激酶（CK）、乳酸脫氫酶（LDH）、脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（S

3、OD）等指標(biāo)反應(yīng)心肌缺血情況。6（4）心臟功能及血流動(dòng)力學(xué)試驗(yàn) 觀測(cè)指標(biāo)應(yīng)包括冠脈流量，心輸出量、左室作功左室內(nèi)壓、左室舒張末期壓、左室內(nèi)壓最大變化速率、動(dòng)脈血壓、外周阻力等，進(jìn)行連續(xù)動(dòng)態(tài)觀測(cè)。7（5）心肌耗氧量試驗(yàn) 心肌代謝、特別是氧的供需矛盾，是冠心病的重要病理生理變化，而多數(shù)中藥常通過(guò)降低心肌耗氧量、改善心肌代謝而達(dá)到治療目的。因此，新藥對(duì)心肌耗氧量的影響，應(yīng)列為必做項(xiàng)目。可供選擇的試驗(yàn)方法如下 1.直接測(cè)定：心肌耗氧量測(cè)定，心肌組織氧分壓 測(cè)定（可多部位、多層次測(cè)定），離體心臟、心肌片或心肌細(xì)胞耗氧量測(cè)定。 2.間接測(cè)定：張力時(shí)間指數(shù)，心肌耗氧指數(shù)，正性肌力作用。 3.耐缺氧試驗(yàn)：離體

4、心臟或心肺灌流耐缺氧試驗(yàn)，心肌細(xì)胞培養(yǎng)耐缺氧試驗(yàn)及其他。 8三、教學(xué)試驗(yàn)安排及內(nèi)容（一）教學(xué)分組 在一個(gè)教學(xué)單元內(nèi)，根據(jù)學(xué)生人數(shù)，將學(xué)生分為8組，每組25人，并分成上下兩班，4組/班。（二）試驗(yàn)方案全班均采用異丙腎上腺素造模；上半班采用A受試物，建議受試物為丹參酮A磺酸鈉；下半班采用B受試物，建議受試物為丹參注射液。9四、試驗(yàn)方法及步驟（一）試驗(yàn)材料試驗(yàn)藥品：烏拉坦（Urethane），生理鹽水配制成20%溶液； 0.5%異丙腎上腺素（Isoprenaline）；生理鹽水，5%葡萄糖注射液。陽(yáng)性藥：0.2%維拉帕米。受試物：丹參酮A磺酸鈉，配制成1%、0.2%溶液； 丹參注射液，50%葡萄糖配

5、制成含生藥 1.5g/ml、0.3g%溶液。試驗(yàn)儀器：生物機(jī)能試驗(yàn)系統(tǒng)、紫外、動(dòng)物秤、大鼠手術(shù)臺(tái)、眼科鑷、1ml、5ml注射器、4#、6#針頭。10（二）試驗(yàn)方法取大鼠，稱體重；腹腔注射烏拉坦12g/kg（20%烏拉坦，56ml/kg）麻醉；仰臥位固定于手術(shù)臺(tái)上,針型電極插入大鼠皮下，打開(kāi)生物機(jī)能試驗(yàn)系統(tǒng)，待心電圖穩(wěn)定后開(kāi)始試驗(yàn)，先記錄一段正常的大鼠心電圖；分組及給藥方案如下：11上、下半班：第1組、第5組：靜脈注射生理鹽水1ml/kg；第2組、第6組：靜脈注射0.2%維拉帕米1ml/kg；第3組：靜脈注射0.2%丹參酮A磺酸鈉；第7組：靜脈注射0.3g/ml丹參注射液1ml/kg，第4組：靜

6、脈注射1%丹參酮A磺酸鈉；第8組：靜脈注射1.5g/ml丹參注射液1ml/kg， 5min后，靜脈快速注射0.5%異丙腎上腺素溶液1ml/kg， 記錄大鼠心電圖。12注射異丙腎上腺素后，以心電圖出現(xiàn)S-T段改變或T波變化為缺血標(biāo)志。每次給完一種藥后，觀察并記錄正常、給Iso前和給Iso后1min、3min、5min、10min、15min、20min、30min和60min的T波和S-T段偏移。將試驗(yàn)結(jié)果記錄與表格中。13（三）試驗(yàn)結(jié)果的原始記錄 表1 受試化合物對(duì)大鼠T波幅度的影響14表2 受試化合物對(duì)大鼠S-T波幅度的影響15表3 受試化合物對(duì)大鼠心率的影響 16（四）結(jié)果分析與討論綜合8

7、個(gè)組的試驗(yàn)結(jié)果，判斷受試物是否具有抗心肌缺血的作用 ；分析中藥單體與復(fù)方中藥在抗心肌缺血中的特點(diǎn)。（五）試驗(yàn)報(bào)告內(nèi)容及格式要求試驗(yàn)報(bào)告內(nèi)容及格式同前，試驗(yàn)題目由學(xué)生自定。17注意事項(xiàng)動(dòng)物個(gè)體較小，固定大鼠時(shí)尤其兩前肢不宜過(guò)緊，以免影響呼吸；心電圖機(jī)的針型電極應(yīng)向心插入皮下，不可插入肌肉內(nèi)，以免肌電干擾，另外動(dòng)物周圍不要放置金屬制品，以免干擾 。18附：大鼠急性心肌缺血模型 （1）將動(dòng)物注射20%烏拉坦（0.50.6ml/100g）麻醉后 固定在手術(shù)臺(tái)上（2）用筆型靜脈置留針進(jìn)行氣管插管(或切開(kāi)氣管插管)，連接動(dòng)物呼吸機(jī)，參數(shù)為：呼吸頻率85；呼吸比1：1；潮氣量為18ml。 19剪開(kāi)氣管插管 筆型靜脈置留針氣管插管 20（3）在胸部左側(cè)3-4肋間剪開(kāi)皮膚21 （4）分離肌肉露出肋骨 22（5）在第三根肋骨下用止血鉗將肌肉分離開(kāi)，然后左手用止血鉗挑住肋骨，右手持剪刀剪開(kāi)第三根肋骨 23