1、 第十六章第十六章 細胞因子與黏附分子檢測細胞因子與黏附分子檢測醫學技術學院免疫教研室醫學技術學院免疫教研室齊齊哈爾醫學院免疫復復 習習1.1.T T細胞增殖試驗的原理、刺激物？細胞增殖試驗的原理、刺激物？2.T2.T細胞增殖試驗的主要細胞增殖試驗的主要方法？方法？3.T3.T細胞介導的細胞毒試驗主要方法？細胞介導的細胞毒試驗主要方法？掌握：掌握：細胞因子、粘附分子概念；細胞因子、粘附分子概念； 臨床常用的測定方法臨床常用的測定方法熟悉：熟悉：細胞因子的特性與功能；細胞因子的特性與功能；了解：了解：其他其他齊齊哈爾醫學院免疫第一節第一節 概述概述第二節第二節 臨床常用的測定方法臨床常用的測定方

2、法第三節第三節 細胞因子與黏附分子測定的臨床細胞因子與黏附分子測定的臨床應用應用齊齊哈爾醫學院免疫第一節第一節 概概 述述 細胞因子細胞因子(cytokine)(cytokine) 是由免疫細胞及組織細胞表達并分是由免疫細胞及組織細胞表達并分泌，通過結合細胞表面的相應受體，在泌，通過結合細胞表面的相應受體，在細胞間發揮相互調控作用的一類小分子細胞間發揮相互調控作用的一類小分子蛋白質或多肽。蛋白質或多肽。齊齊哈爾醫學院免疫掌握掌握1.細胞因子的種類 白細胞介素（IL） 干擾素（IFN） 集落刺激因子（CSF） 腫瘤壞死因子（TNF） 生長因子（GF） 趨化因子一、細胞因子及其受體的特性與功能一、

3、細胞因子及其受體的特性與功能齊齊哈爾醫學院免疫熟悉熟悉自分泌自分泌內分泌內分泌血液循環血液循環遠距離作用遠距離作用旁分泌旁分泌作用于比鄰細胞作用于比鄰細胞細胞因子發揮作用的三種方式細胞因子發揮作用的三種方式作用于分泌細胞自身作用于分泌細胞自身2.細胞因子的共同特性與生物學功能細胞因子的共同特性與生物學功能齊齊哈爾醫學院免疫熟悉熟悉高效性、多效性、重疊性、網絡性、高效性、多效性、重疊性、網絡性、協同性、拮抗性協同性、拮抗性迅速迅速高效性高效性非特異性非特異性 2.細胞因子的共同特性齊齊哈爾醫學院免疫熟悉熟悉肥大細胞肥大細胞胸腺細胞胸腺細胞B BIL-4活化、增殖、分化活化、增殖、分化增殖增殖 增

4、殖增殖 多效性多效性齊齊哈爾醫學院免疫IL-2、 IL-4、 IL-5IL-4 + IL-5IL-4IFN- 拮抗性拮抗性重疊性重疊性協同性協同性均有刺激均有刺激B B細胞增細胞增殖的功能殖的功能更有效地誘導更有效地誘導IgEIgE類別轉換類別轉換IL-4 IL-4 阻斷阻斷IFN-IFN- 誘導類別轉化誘導類別轉化的作用的作用BBB齊齊哈爾醫學院免疫2.2.細胞因子的生物學功能細胞因子的生物學功能l參與調控免疫細胞的發育、分化和功能l參與調控免疫應答l抗感染l抗腫瘤l誘導細胞凋亡齊齊哈爾醫學院免疫了解了解 3、細胞因子受體的共同特性、細胞因子受體的共同特性l細胞因子發揮作用：細胞因子發揮作用

5、： 細胞因子細胞因子與與靶細胞表面特異性受體靶細胞表面特異性受體結合結合l細胞因子受體結構：細胞因子受體結構： 胞膜外區、跨膜區和胞質區組成胞膜外區、跨膜區和胞質區組成l細胞因子家族：細胞因子家族：型細胞因子受體家族、型細胞因子受體家族、 型細胞因子受體家族、腫瘤型細胞因子受體家族、腫瘤壞死因子受體超家族、免疫球蛋白受體超家族、趨化壞死因子受體超家族、免疫球蛋白受體超家族、趨化因子受體家族。因子受體家族。齊齊哈爾醫學院免疫了解了解齊齊哈爾醫學院免疫二、 黏附分子的特性與功能黏附分子（AM） 是介導細胞間或細胞與細胞外基質間相互結合的分子。齊齊哈爾醫學院免疫掌握掌握1.黏附分子的特性黏附分子的特

6、性 黏附分子均為跨膜糖蛋白，由胞膜外區、跨膜區和胞質區三部分組成，根據其結構特點可分為免疫球蛋白超家族、整合素家族、選擇素家族和鈣黏蛋白家族。齊齊哈爾醫學院免疫了解了解2.黏附分子的主要生物學功能黏附分子的主要生物學功能l參與細胞的信號轉導與活化、細胞分化參與細胞的信號轉導與活化、細胞分化及發育及發育 l參與免疫應答和炎癥反應、淋巴細胞歸參與免疫應答和炎癥反應、淋巴細胞歸巢、傷口愈合與血栓形成、調節細胞凋巢、傷口愈合與血栓形成、調節細胞凋亡等功能亡等功能齊齊哈爾醫學院免疫了解了解B細胞與Th細胞間信號轉導的細胞粘附分子齊齊哈爾醫學院免疫第二節第二節 臨床常用的測定方法臨床常用的測定方法一、酶聯

7、免疫吸附試驗方法二、化學發光酶免疫試驗三、流式細胞分析法四、酶聯免疫斑點試驗五、免疫學測定方法學評價齊齊哈爾醫學院免疫l 基因水平：基因水平：PCRPCR技術。技術。l檢測水平檢測水平 生物活性測定生物活性測定 l 蛋白水平蛋白水平l 免疫學測定免疫學測定 第二節第二節 臨床常用的測定方法臨床常用的測定方法掌握掌握齊齊哈爾醫學院免疫 生物活性測定：生物活性測定：測測活性活性。靈敏。靈敏 性高性高, ,特異性低特異性低蛋白水平蛋白水平 ELISA ELISA 免疫學測定免疫學測定 化學發光酶免疫試驗化學發光酶免疫試驗 （ 含量含量） 流式細胞術流式細胞術 酶聯免疫斑點試驗酶聯免疫斑點試驗 第二節

8、第二節 臨床常用的測定方法臨床常用的測定方法掌握掌握齊齊哈爾醫學院免疫一、酶聯免疫吸附試驗一、酶聯免疫吸附試驗（一）基本方法（一）基本方法1.1.直接法直接法-雙抗體夾心法雙抗體夾心法 （測（測CKCK最常用方法）最常用方法）2.2.間接法間接法3.3.抗原競爭法抗原競爭法齊齊哈爾醫學院免疫熟悉熟悉敏感性偏低不能區分細胞因子的生物學活性（二）方法學評價（二）方法學評價特異、簡便成本低、易于推廣和標準化等優點可同時檢測大量標本且試驗廢棄物便于處理細胞因子測定的首選方法缺點缺點優點優點齊齊哈爾醫學院免疫了解了解二、化學發光酶免疫試驗二、化學發光酶免疫試驗l是以發光劑作為酶免疫測定的底物，通過發光反

9、應增強測定的靈敏度。（一）基本方法l雙抗體夾心法（二）方法學評價特異性好、靈敏度高、線性范圍寬、試劑穩定、可自動化檢測齊齊哈爾醫學院免疫了解了解三、流式細胞術三、流式細胞術（flow cytometry, FCM)分離和分離和培養培養待檢細胞待檢細胞 細胞破膜與固定細胞破膜與固定 封閉非特異性結合位點封閉非特異性結合位點 染色與分析染色與分析 基本方法基本方法了解了解方法學評價方法學評價l優點：特異、高效、靈敏.l應用: 對單個細胞水平CK或AM檢測； 檢測細胞內CK；膜上AM、CK受體同一細胞內兩種以上細胞因子表達 齊齊哈爾醫學院免疫熟悉熟悉四、酶聯免疫斑點試驗四、酶聯免疫斑點試驗(ELIS

10、POT)(ELISPOT) 包被有待測細胞因子抗體的微孔板 分泌相應細胞因子的待測細胞 有或無刺激物培養細胞因子被板上的特異性抗體捕獲后續的反應如同ELISA 一個斑點一個斑點代表一個細胞因子代表一個細胞因子分泌細胞分泌細胞，斑點的顏，斑點的顏色深淺程度與細胞分泌的細胞因子量相關色深淺程度與細胞分泌的細胞因子量相關 基本原理+ +了解了解齊齊哈爾醫學院免疫方法學評價方法學評價比常規比常規ELISAELISA法的靈敏度提法的靈敏度提高高200200倍倍應用應用：檢測分泌特定細胞因子的：檢測分泌特定細胞因子的細胞細胞熟悉熟悉五、免疫學測定方法學評價五、免疫學測定方法學評價優點：優點： 特異性高 操

11、作簡便、快速，無需依賴細胞株 影響因素較少且易控制，重復性好，方法容易標準化。缺點：缺點： 所測定含量，與其生物活性不一定呈正比 結果與所用的抗體來源及親和力有很大的關系 敏感性相對較低標本中可溶性受體，會影響特異性抗體對細胞因子結合熟悉熟悉第第三節三節 細胞因子與黏附分子細胞因子與黏附分子測定的臨床應用測定的臨床應用1.1.特定疾病的輔助診斷特定疾病的輔助診斷2.2.機體免疫狀態的評估機體免疫狀態的評估3.3.臨床疾病治療效果的監測和指導用藥臨床疾病治療效果的監測和指導用藥4.4.疾病預防的應用疾病預防的應用熟悉熟悉一、臨床應用原則一、臨床應用原則 方法選擇和結果判斷作出綜合考慮: 異質性

12、功能交叉性和多樣性 來源的復雜性 組織細胞的非特異性細胞因子和粘附分子細胞因子和粘附分子 全身免疫或炎癥狀態血漿、血清炎癥局部細胞因子的水平局部分泌液細胞分泌細胞因子的特性外周單個核細胞細胞表面細胞因子受體或黏附分子定位檢測疾病療效觀察和預后判斷1.標本的適當選取敏感性高-特異性低，廢棄物難處理活性測定-不能精確蛋白定量基因分析-操作繁瑣，有助于疾病分析多種方法綜合分析正確評價 2.方法的聯合應用意義： 細胞因子具有網絡狀調節的特點 級聯效應或相互抑制作用的網絡系統 有助于提供有效的疾病診斷和機體免疫狀態信息舉例：免疫細胞分泌：IL-1、 IL-2、IFN-和GM-CSFTh1/Th2細胞平衡

13、狀態：IL-2、IL-4、IL-10和IFN-3.細胞因子的聯合檢測二、特定疾病的輔助診斷（一）細胞因子與疾病1.細胞因子風暴IL-1IL-1、IL-2IL-2、IL-6IL-6、IFN-IFN-等等 引發全身炎癥反應綜合征2.變態反應性疾病哮喘IL-4促進IgE合成3.自身免疫病類風濕性關節炎（TNF-、IL-1、IL-6、IL-8、MCP-1）（一）細胞因子與疾病4.免疫缺陷病IL-2R基因缺陷（重癥聯合免疫缺陷病）；IL-6（漿細胞瘤、膀胱癌）5.器官移植排斥反應TNF-、IL-1、 IL-2、IL-6、IFN-水平升高6.惡性腫瘤檢測IL-2、IL-6、IFN-水平用于療效的評估（二）

14、黏附分子與疾病1.1.動脈粥樣硬化動脈粥樣硬化ICAMICAM、P-P-選擇素選擇素 2.2.腎臟疾病腎臟疾病ICAMICAM3.3.肝臟疾病肝臟疾病- VCAM-1- VCAM-1、ICAM-1ICAM-1、IL-1IL-14.4.自身免疫病自身免疫病-SLE-SLE（E-選擇素、選擇素、ICAM-1） 類風濕關節炎（類風濕關節炎（E-E-選擇素）選擇素） 三、評估機體的免疫狀態三、評估機體的免疫狀態機體免疫應答的強弱作為觀察治療效果和判斷預后的重要指標對保證治療效果具有指導意義四、疾病療效檢測及指導用藥 根據患者相關細胞因子水平或免疫狀態的檢測結果選擇細胞因子的種類和劑量。 細胞因子水平過

15、表達/可溶性黏附分子增高使用相應的細胞因子拮抗劑或抗體1 1細胞因子和細胞粘附分子的概念？細胞因子可分細胞因子和細胞粘附分子的概念？細胞因子可分為幾類？為幾類？2 2臨床檢測中常用細胞因子與細胞黏附分子的免疫臨床檢測中常用細胞因子與細胞黏附分子的免疫學檢測方法有哪些？學檢測方法有哪些？3 3細胞因子及黏附分子檢測的臨床意義是什么？細胞因子及黏附分子檢測的臨床意義是什么？思考題思考題1.1.細胞外可溶性黏附分子主要測定法是細胞外可溶性黏附分子主要測定法是( )( ) A.ELISA B.A.ELISA B.酶免疫組化法酶免疫組化法C.C.熒光免疫法熒光免疫法 D.D.流式細胞儀測定法流式細胞儀測

16、定法E.E.時間分辨熒光免疫法時間分辨熒光免疫法2.2.下列對下列對FCMFCM檢測細胞因子的描述中錯誤的是檢測細胞因子的描述中錯誤的是( )( ) A. A.靈敏度高靈敏度高 B.B.可測細胞內細胞因子可測細胞內細胞因子 C.C.特異性高特異性高 D.D.單細胞水平分析單細胞水平分析 E.mRNAE.mRNA表達水平表達水平3 3用用ELISAELISA方法測定細胞因子，錯誤的是方法測定細胞因子，錯誤的是( )( )A.A.特異性高特異性高 B B. .可測活性可測活性 C.C.操作簡便操作簡便 D.D.可定量分析可定量分析 E.E.時間短時間短4.4.在檢測可溶性在檢測可溶性黏附黏附分子中

17、，分子中，ELISAELISA常用常用( )( )A.A.直接法直接法 B.B.間接法間接法 C.C.夾心法夾心法 D. D.競爭法競爭法 E.E.組化法組化法A AE EB BC C 5. 5.不屬于細胞因子特點的是不屬于細胞因子特點的是( )( )A.A.分泌型蛋白質分泌型蛋白質 B.B.自分泌自分泌 C.C.低分子量低分子量 D.D.不受不受MHCMHC限制限制 E.E.半衰期長半衰期長6.6.黏附黏附分子作用是分子作用是( )( )A.A.細胞信號傳導與活化細胞信號傳導與活化 B.B.細胞的伸展與轉移細胞的伸展與轉移C.C.細胞的生長與分化細胞的生長與分化 D.D.創傷的愈合創傷的愈合

18、E.E.以上都是以上都是7.7.慢性肝炎的急性期和活動期水平顯著升高慢性肝炎的急性期和活動期水平顯著升高, ,而穩而穩定期和恢復期有明顯下降的細胞因子定期和恢復期有明顯下降的細胞因子( )( ) A.TNF A.TNF和和IL-6 B.TNFIL-6 B.TNF和和IL-10 C.TNFIL-10 C.TNF和和EPO EPO D.GM-CSF D.GM-CSF和和EPO E. GM-CSFEPO E. GM-CSF和和IL-6 IL-6 E EE EA A8.8.細胞因子生物學測定法最重要的優點是細胞因子生物學測定法最重要的優點是( )( ) A. A.高特異性高特異性 B. B.操作簡單操作簡單 C. C.低靈敏性低靈敏性 D.D.活性測定活性測定 E. E.實驗成本低實驗成本低9.9.關于細胞因子免疫學測定關于細胞因子免疫學測定, ,錯誤者錯誤者( )( )