1、第一節(jié) 工具酶的發(fā)現(xiàn)和工具酶的發(fā)現(xiàn)和基因工程的誕生基因工程的誕生基因工程又叫基因工程又叫DNADNA重組技術，是按人重組技術，是按人們愿望，進行嚴格設計，通過體外們愿望，進行嚴格設計，通過體外DNADNA重組和轉基因技術，賦予生物以重組和轉基因技術，賦予生物以新的遺傳特性，創(chuàng)造更符合人們需要新的遺傳特性，創(chuàng)造更符合人們需要的新的生物類型與產品。的新的生物類型與產品?；蚬こ谈拍罨蚬こ谈拍?基因工程的誕生v時間：20世紀70年代v理論基礎： DNA雙螺旋結構 遺傳信息傳遞方式（中心法則）v技術基礎： 限制性核酸內切酶 DNA連接酶 質粒載體 一基因操作的工具一基因操作的工具基因的大小以納米計算

2、，要對它進行剪切、基因的大小以納米計算，要對它進行剪切、拼接等操作，沒有非常精細的工具是不行的。進拼接等操作，沒有非常精細的工具是不行的。進行基因操作最少需要以下三種工具：行基因操作最少需要以下三種工具：、基因的剪刀、基因的剪刀限制性內切酶（限制酶）限制性內切酶（限制酶）一種限制酶只能一種限制酶只能識別一種特定的核苷識別一種特定的核苷酸序列，并在特定的酸序列，并在特定的切割點上將切割點上將DNA DNA 分子分子切斷。切斷。指一類酶，非一種酶。指一類酶，非一種酶。1、限制性內切酶（3）.舉例：大腸桿菌的一種限制酶能識大腸桿菌的一種限制酶能識別別GAATTCGAATTC序列，并在序列，并在G G

3、和和A A之間切開。之間切開。（1 1）作用部位：磷酸二酯鍵）作用部位：磷酸二酯鍵（2）特點：專一性，即識別特定核苷專一性，即識別特定核苷酸序列，切割特定切點。酸序列，切割特定切點。（5）作用結果：形成）作用結果：形成DNA片段末端片段末端v平末端：平切（相同部位）平末端：平切（相同部位）v黏性末端：錯位切（不同部位）黏性末端：錯位切（不同部位）DNADNA被限制酶切斷后有兩個反向互補的被限制酶切斷后有兩個反向互補的“黏黏性末端性末端”。被同一種限制酶切斷的幾個。被同一種限制酶切斷的幾個DNADNA具有具有相同的黏性末端，能夠通過互補進行配對。相同的黏性末端，能夠通過互補進行配對。、基因的針線

4、、基因的針線DNADNA連接酶連接酶（1）連接的部位：）連接的部位：DNA雙鏈片段間的雙鏈片段間的磷酸二酯鍵，不是氫鍵。磷酸二酯鍵，不是氫鍵。（2）常用種類：vE.coliDNA連接酶連接酶：來源：大腸桿菌來源：大腸桿菌作用：連接黏性末端作用：連接黏性末端T T4 4DNADNA連接酶：連接酶：來源：來源：T T4 4噬菌體噬菌體作用：連接黏性末端、作用：連接黏性末端、平末端平末端（3）DNA連接酶與DNA聚合酶的比較DNADNA聚合酶聚合酶DNADNA連接酶連接酶化學本質化學本質作用部位作用部位模板模板3 3、基因的運輸工具、基因的運輸工具運載體運載體3.3.種類：種類：質粒、噬菌體和動植物病毒。質粒、噬菌體和動植物病毒。1.1.作用：作用：將外源基因送入受體細胞。將外源基因送入受體細胞。2.2.條件：條件：1)1)能在宿主細胞內復制并穩(wěn)定地保存。能在宿主細胞內復制并穩(wěn)定地保存。2)2)具有一個至多個限制酶切點，使外源基具有一個至多個限制酶切點，使外源基因插入其中。因插入其中。3)3)具有某些標記基因，以便進行篩選。具有