1、1 學習指南學習指南觀察思考觀察思考課外閱讀課外閱讀復習自測復習自測退出本章退出本章演示文稿演示文稿本章目錄本章目錄遼農職院遼農職院 工程系工程系 質檢中心質檢中心2n目的要求目的要求 樣品前處理在色譜分析過程中是一個既耗時又極易引進誤差的步驟，樣品處理的好壞直接影響色譜分析的最終結果，因此，為了提高分析測定效率，改善和優化色譜分析樣品制備方法和技術是一個重要問題。 通過本章的學習，目的是使學生掌握溶劑萃取、固相萃取、超臨界流體萃取、微波萃取以及衍生化技術等色譜分析用樣品的前處理方法，了解有關樣品前處理儀器的一些相關知識。 n學習要點學習要點溶劑萃取技術；蒸餾及精餾技術；固相萃取技術；氣體萃取

2、技術；超臨界流體萃取技術； 微波萃取技術；衍生化技術 n技能要點技能要點溶劑萃取技術；蒸餾及精餾技術；固相萃取技術；超臨界流體萃取技術；波萃取技術學習目標學習目標本節首頁本節首頁退出本章退出本章3一、超臨界萃取技術一、超臨界萃取技術 二、微波萃取技術二、微波萃取技術 三、超聲波輔助萃取三、超聲波輔助萃取本節首頁本節首頁退出本章退出本章四、衍生化技術四、衍生化技術 五五 、生物大分子的細胞破碎與蛋白質的去除、生物大分子的細胞破碎與蛋白質的去除4本節首頁本節首頁退出本章退出本章5 本節首頁本節首頁退出本章退出本章6本節首頁本節首頁退出本章退出本章臨界點：液、氣兩相呈平衡狀態的點。臨界溫度：在臨界點

3、時的溫度。 臨界壓力：在臨界點時的壓力。 7 本節首頁本節首頁退出本章退出本章物體處于其臨界溫度和臨界壓力以上時的狀態。氣體：粘稠度、表面張力低，溶解能力強，萃取功能高。壓力，溶解能力。液體：體積小。8流體名稱流體名稱分子式分子式臨界壓力臨界壓力(bar)(bar)臨界溫度臨界溫度()()臨界密度臨界密度(g/cm(g/cm3 3) )二氧化碳二氧化碳COCO2 272.972.931.231.20.4330.433水水H H2 2O O217.6217.6374.2374.20.3320.332氨氨NHNH3 3112.5112.5132.4132.40.2350.235乙烷乙烷C C2 2

4、H H6 648.148.132.232.20.2030.203氧化二氮氧化二氮N N2 2O O71.771.736.536.50.4500.4509本節首頁本節首頁退出本章退出本章 在3540下提取 干凈的提取方法 CO2是一種不活潑的氣體。 循環使用，降低成本。 參數可以調節10流動相流動相11本節首頁本節首頁退出本章退出本章12本節首頁本節首頁退出本章退出本章13本節首頁本節首頁退出本章退出本章14本節首頁本節首頁退出本章退出本章頻率：300300 000MHz的電磁波。穿透：玻璃、塑料、陶瓷等絕緣體。當微波作用于水和酸性物質時，將被極性分子所吸收，因而物質很快被加熱。15本節首頁本節

5、首頁退出本章退出本章吸收微波細胞內部溫度，細胞內部壓力超過細胞壁膨脹承受能力細胞破裂有效成分自由流出。16本節首頁本節首頁退出本章退出本章 萃取溫度的影響 萃取溶劑的影響 樣品杯：聚四氟乙烯17本節首頁本節首頁退出本章退出本章能量外部向內部傳遞。超聲波使溶液形成氣泡（空化效應）爆裂溫度和壓力，增強化學反應能力。18本節首頁本節首頁退出本章退出本章優點：價廉快速，簡便安全，批量處理樣品。19本節首頁本節首頁退出本章退出本章化學反應定量生成適于分析。20本節首頁本節首頁退出本章退出本章 靈敏度與選擇性 改善色譜分離： 揮發性、降低與色譜材料的相互作用 理化穩定性21本節首頁本節首頁退出本章退出本章

6、柱柱前前衍生化：為了分離衍生化：為了分離柱柱后后衍生化：為了檢測衍生化：為了檢測22本節首頁本節首頁退出本章退出本章（1 1）硅烷化衍生化方法）硅烷化衍生化方法（2 2）酯化衍生化方法）酯化衍生化方法（3 3）鹵化衍生化方法）鹵化衍生化方法（4 4）酚化衍生化方法）酚化衍生化方法方法方法23本節首頁本節首頁退出本章退出本章利用醇，酚，酸，胺等與硅烷化試劑反利用醇，酚，酸，胺等與硅烷化試劑反應，形成揮發性的硅烷衍生物應，形成揮發性的硅烷衍生物R R3 3SiX + SiX + HRHRR R3 3SiRSiR + HX + HX24本節首頁本節首頁退出本章退出本章大多數有機酸有機酸揮發性、熱穩定

7、性差。在GC分析之前衍生為相應的酯。 甲醇法 重氮甲烷法 三氟乙酸配法 25本節首頁本節首頁退出本章退出本章甲醇法 有機酸與甲醇在催化劑的存在下加熱，可以發生酯化反應，生成有機酸的甲酯RCOOH + RCOOH + CHCH3 3OHOH催化劑催化劑RCOO CHRCOO CH3 3 + H + H2 2 O O26本節首頁本節首頁退出本章退出本章與有機酸反應，生成有機酸的甲酯，重氮甲烷不穩定，有爆炸性，有毒。 RCOOH + RCOOH + CHCH2 2N N2 2RCOO CHRCOO CH3 3 + N + N2 227本節首頁本節首頁退出本章退出本章引入鹵原子ECD檢測器也改善揮發性

8、和穩定性。 鹵素的作用是加成加成或取代取代 28本節首頁本節首頁退出本章退出本章1. 1. 紫外衍生化反應紫外衍生化反應2 2熒光衍生化反應熒光衍生化反應 3 3電化學衍生化反應電化學衍生化反應29本節首頁本節首頁退出本章退出本章苯甲酰氯 + 胺、醇、酚苯甲酸酯類衍生物（ ）30本節首頁本節首頁退出本章退出本章在目標化合物上接上能發出熒光的生色基團，如熒光素。31本節首頁本節首頁退出本章退出本章32本節首頁本節首頁退出本章退出本章（一）、生物樣品（一）、生物樣品植物：植物：營養成分、農藥殘留等動物：動物：體內的藥物及代謝產物、 糖類、維生素、氨基酸等微生物：微生物：33本節首頁本節首頁退出本章

9、退出本章體液或細胞外：體液或細胞外：采用萃取方法。也可將干擾組分（如蛋白質、DNA、多糖等等）沉淀除去。生物細胞內：生物細胞內：首先將細胞破碎，再采用萃取或沉淀等方法。34本節首頁本節首頁退出本章退出本章（二）、細胞的破碎（二）、細胞的破碎目的：目的：就是為了破壞細胞的外殼，使細胞內含物有效地釋放出來，獲得有效的提取。35本節首頁本節首頁退出本章退出本章1 1、細胞的破碎方法、細胞的破碎方法 組織較柔軟：勻漿器研磨 組織較韌：鉸碎勻漿 纖維組織：搗碎器破碎或加砂研磨。 微生物堅韌的細胞壁：用自溶、冷熱交 替、加砂研磨、超聲波和加壓處理。361、細胞的破碎方法、細胞的破碎方法37本節首頁本節首頁

10、退出本章退出本章2 2、機械法（機械切力）、機械法（機械切力） 高速組織搗碎機： 20000rmin。 對象：動植物組織 勻漿器：鉸碎組織。對生物大分 子破壞較少。 研磨 ：玻璃砂。38本節首頁本節首頁退出本章退出本章3 3、物理法（物理作用）、物理法（物理作用） 反復凍融法：反復凍融法： -15-20。 冷熱交替法：冷熱交替法： 90維持數分鐘，立即置維持數分鐘，立即置于冰浴中冷卻。于冰浴中冷卻。 超聲波處理法：用于微生物。超聲波處理法：用于微生物。 加壓破碎法：加壓破碎法： 加氣壓或水壓，可使加氣壓或水壓，可使90以上細胞被壓碎。以上細胞被壓碎。39本節首頁本節首頁退出本章退出本章4 4、

11、化學及生物化學法、化學及生物化學法（化學試劑或酶）（化學試劑或酶） 自溶法： 在一定條件（pH、溫度）， 利用自身的酶系將細胞破壞。 溶菌酶處理： 具有專一地破壞細菌細胞壁的功能。40本節首頁本節首頁退出本章退出本章例：溶菌酶處理例：溶菌酶處理41本節首頁本節首頁退出本章退出本章（三）、蛋白質的去除（三）、蛋白質的去除目的：目的：蛋白質的存在，常常嚴重干擾分析1、加熱法 2、鹽析法3、膜分離法 4、高速離心5、有機溶劑沉淀法42本節首頁本節首頁退出本章退出本章1 1、 加熱法加熱法欲測組分熱穩定性好時采用。加熱到90。蛋白沉淀后可用離心或過濾除去，能除去熱變性蛋白。 43本節首頁本節首頁退出本章退出本章2 2、鹽析法、鹽析法原理：原理：利用不同蛋白質在高濃度的鹽溶液中溶解度不同程度的降低來沉淀除去蛋白質。在低鹽濃度下，蛋白質溶解度隨著鹽濃度升高而增加，稱為鹽溶作用鹽溶作用。 當鹽濃度不斷升高時，不同蛋白質的溶解度又以不同程度下降，并先后析出沉淀，稱為鹽析作用鹽析作用。44本節首頁本節首頁退出本章退出本章3 3、膜分離法、膜分離法超濾：靠薄膜兩側壓力差作為推動力來分離不同分子量的物質。將欲測小分子化合物和