1、 三聚氰胺（MEL）ELISA檢測試劑盒說明書產品編號：HE09037/HE12003一、概要 三聚氰胺(melamine)是一種低毒、無味的純白色單斜棱晶體，形似蛋白粉，屬于三嗪類含氮雜環有機化合物，廣泛應用于塑料、染料、化肥的生產和紡織行業。由于三聚氰胺分子含氮量很高，只要添加到食品中就可在檢測中造成蛋白質含量較高的假象。目前在飼料、牛奶、奶粉、餅干、奶糖等相關產品均發現有三聚氰胺殘留現象。動物實驗結果表明，三聚氰胺的攝入可能會導致繁殖障礙、膀胱炎、慢性腎炎、腎結石、甚至膀胱癌。現有的檢測三聚氰胺方法如液相色譜-質譜聯用法、質譜電噴射離子技術其樣品前處理復雜、所需儀器昂貴、操作復雜、耗費時

2、間。而使用三聚氰胺ELISA試劑盒能夠既快速又準確的分析樣本中三聚氰胺殘留。 本試劑盒是應用ELISA技術研發而成的檢測產品，與儀器分析技術相比具有快速、簡便、準確和靈敏度高等優點，操作時間為45min，能最大限度地減少操作誤差和工作強度。二、實驗原理本試劑盒采用間接競爭ELISA方法，在酶標板微孔上預包被三聚氰胺抗原，樣本殘留的三聚氰胺和微孔上預包被的抗原競爭三聚氰胺抗體（抗試劑），同時加入酶標二抗（酶標物）反應，再加入TMB底物顯色，樣本吸光值與其殘留物三聚氰胺成負相關，與標準曲線比較再乘以其對應的稀釋倍數，即可得出樣本中三聚氰胺的含量。三、適用范圍可定性、定量檢測奶粉、牛奶、酸奶等乳制品

3、、雞蛋及飼料樣本中三聚氰胺的殘留量。四、交叉反應率三聚氰胺100五、使用單位需自備的設備及試劑設備：微孔板酶標儀450/630nm渦旋儀天平：感量0.01g聚苯乙烯離心管微量移液器：單道 10L100L、100L1000L、多道 30L300L試劑：-去離子水-乙腈（分析純）-氫氧化鈉（分析純）-三氯乙酸-濃鹽酸（分析純）六、提供的材料與試劑組份名稱96T裝量48T裝量酶標板96T48T標準品×6瓶*1 mL 0.5 mL 高濃度標準品(10 ppm)1 mL 0.5 mL 三聚氰胺酶標物6 mL3 mL三聚氰胺抗試劑6 mL3 mL底物液A液6 mL3 mL底物液B液6 mL3 m

4、L終止液6 mL3 mL濃縮洗滌液（10×）40 mL×2瓶40 mL三聚氰胺濃縮樣本稀釋液12mL6 mL試劑盒說明書1份1份檢測報告1份1份蓋板膜2個1個*注：標準品濃度為0 ppb, 1 ppb, 3 ppb, 9 ppb, 27 ppb, 81 ppb。七、溶液的配制配液1：樣本稀釋液I用去離子水將濃縮樣本稀釋液按1 : 15體積比進行稀釋，即1份濃縮樣本稀釋液加15份去離子水；用于酸奶、生鮮奶、成品純牛奶樣本的稀釋，樣本稀釋液I在4 環境可保存一個月。配液2：樣本稀釋液II用去離子水將濃縮樣本稀釋液按1 : 7體積比進行稀釋，即1份濃縮樣本稀釋液加7份去離子水；用

5、于乳飲料、雞蛋樣本、飼料樣本的稀釋，樣本稀釋液II在4 環境可保存一個月。配液3：飼料提取液 量取86L鹽酸，加入100mL去離子水中。配液4：雞蛋提取液稱取3g三氯乙酸，加蒸餾水溶解并定容至100 mL。配液5：洗滌液用去離子水將濃縮洗滌液（10×）按1 : 9體積比進行稀釋，即1份濃縮洗滌液（10×）加9份去離子水；用于酶標板的洗滌，以及奶粉樣本的稀釋，洗滌液在4 環境可保存一個月。配液6：1M NaOH溶液（現配現用）稱取4g NaOH，加入蒸餾水100 mL，攪拌溶解即可。8、 樣本前處理步驟 樣本處理前須知 處理任何樣本時，都必須注意：(a) 實驗中必須使用一次性

6、吸頭，在吸取不同的試劑時需更換 吸頭。(b) 實驗之前須檢查各種實驗器具是否潔凈，必須使用潔 凈實驗器具，以避免污染干擾實驗結果。(c) 未處理的生鮮奶樣本需冷凍環境保存,牛奶等樣本需要 冷藏環境保存。(d) 處理好的樣本應立即用于檢測。（一）奶粉-稱取1.0g奶粉樣本，加4.5 mL洗滌液（配 液5），充分渦動1min，至樣本充分溶解；-取100L奶粉溶液，加入900L洗滌液（配 液5），渦動1min混勻；-取50L用于分析。稀釋倍數：50（二）生鮮奶、成品純牛奶：-移取1mL牛奶樣本，加入1mL 去離子水，渦動1min 混勻；-取40L樣本溶液，加入960L樣本稀釋液I（配液1）， 渦動1

7、min混勻；-取50L用于分析。稀釋倍數：50（三）液態酸奶-稱取1.0g酸奶樣本，加入1 mL去離子水，渦動1min混勻，4000r/min離心5min；-取200L上清，加入800L樣本稀釋液I（配液1）， 渦動1min混勻；-取50L用于分析。稀釋倍數：10（四）乳飲料-移取50L乳飲料樣本，加入950L 樣本稀釋液II(配液2)，渦動1min混勻；-取50L用于分析稀釋倍數：20（五）飼料-用均質器均質飼料樣本；-稱取1.0 g均質的樣本于50 mL離心管中， 加5 mL 飼料提取液（配液3）,再加入5mL乙腈，充分振蕩5min，4000r/min離心5min。-取200L上清液加到8

8、00L的樣本稀釋液II（配液2），混勻后取50L用于分析。稀釋倍數：50（六）雞蛋-稱取2.0g均質后的雞蛋樣本于50mL離心管中， 加4mL 雞蛋提取液（配液4），充分振蕩5min，4000r/min離心5min。-取150L上清液，再加入350L 樣本稀釋液II（配液2）混勻，用1M NaOH溶液（ 配液6） 調pH至 6.0-8.0（約510L） ，混勻取50L分析。稀釋倍數：10九、檢測步驟 1、將所需試劑從冷藏環境中取出，置于室溫（2025 ）平衡30 min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。2、取出需要數量的微孔板，將不用的微孔放入自封袋，保存于28 。3、洗滌液在使用前也需回

9、溫。4、編號：將樣本和標準品對應微孔按序編號，每個樣本和標準品做2孔平行，并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。5、加標準品/樣本：加標準品/樣本50L到對應的微孔中，再加入酶標物50L /孔，再加入抗試劑50L /孔輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置室溫25避光環境中反應30 min。6、洗板：小心揭開蓋板膜，將孔內液體甩干，用洗滌液300L /孔，充分洗滌5次，每次間隔10 s，用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用未使用過的槍頭戳破）。7、顯色：加入底物液A液50L /孔，再加底物液B液50L /孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置室溫25避光環境反應15min。8、測定：加入終止液50L /孔，輕

10、輕振蕩混勻，設定酶標儀于450nm處（建議用雙波長450/630 nm檢測，請在5 min內讀完數據），測定每孔OD值。（若無酶標儀，則不加終止液用目測法可進行判定）。十、 結果判定結果判定有兩種方法，定性判定可用第1種方法，而定量判定用第2種方法。注意樣本吸光值與其所含三聚氰胺成負相關。1、 定性分析 用樣本的平均吸光度值與標準值比較即可得出其濃度范圍（ppb）。假設樣本1的吸光度值為0.569，樣本2的吸光度值為1.325，標準液吸光度值分別是：0 ppb為1.85；1 ppb為1.483；3 ppb為1.112；9 ppb為0. 746；27 ppb為0.367;81ppb為0.018。

11、則樣本1的濃度范圍是927 ppb；樣本2的濃度范圍是13 ppb。再乘以其對應的稀釋倍數即可得出樣本中三聚氰胺的濃度范圍。2、定量分析（1）百分吸光率的計算，標準品或樣本的百分吸光率等于標準品或樣本的吸光度值的平均值（雙孔）除以第一個標準（0標準）的吸光度值，再乘以100%，即百分吸光率（%）B×100%B0B標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值B00（ppb）標準溶液的平均吸光度值（2）標準曲線的繪制與計算以標準品百分吸光率為縱坐標，以三聚氰胺標準品濃度（ppb）的對數為橫坐標，繪制標準曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標準曲線中，從標準曲線上讀出樣本所對應的濃度，乘以其對應的稀釋倍數即

12、為樣本中三聚氰胺實際殘留量。若利用試劑盒專業分析軟件進行計算，更便于大量樣本的準確、快速分析。（歡迎來電索?。┦弧⒃噭┖袇翟噭┖徐`敏度：1 ppb樣本最低檢測限：奶粉50ppb酸奶10ppb純牛奶、生鮮奶50ppb乳飲料20ppb飼料50ppb雞蛋10ppb回收率：奶粉100±20%酸奶100±20%純牛奶、生鮮奶100 ± 20%飼料100±20%雞蛋100±20%精密度：試劑盒的變異系數均小于10%十二、注意事項1、室溫低于20或試劑及樣本沒有回到室溫（2025）會導致所有標準的OD值偏低。2、在洗板過程中如果出現板孔干燥的情況，則會出

13、現標準曲線不成線性，重復性不好的現象。所以洗板拍干后應立即進行下一步操作。3、每加一種試劑前需將其搖勻。4、反應終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。5、不要使用過了有效日期的試劑盒；也不要使用過了有效期的試劑盒中的任何試劑，摻雜使用過了有效期的試劑盒會引起靈敏度的降低；不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。6、儲存條件 保存試劑盒于28，不要冷凍，將不用的酶標板放進自封袋重新密封。標準物質和無色的發色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。7、試劑變質的跡象發色試劑有任何顏色表明發色劑變質，應當棄之。0標準的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm<0.5）時，表示試劑可能變質。8、 在加入底物液A液和底物液B液后，一般顯色時間為15min即可。若顏色較淺，可延長反應時間到20min，但不得超過20min。反之，則減短反應時間。9、 濃縮洗滌液如有結晶屬正?，F象，請加熱溶解后使用。10、該試劑盒最佳反應溫度為25，溫度過高或過低將導致檢測吸光度值和靈敏度發生變化。十三、貯藏條件及保存期 貯藏條件：保存試劑盒于28。保存期：該產品有效期為12個月。14、 本公司其他檢測產品檢測類別檢測產品檢測類別檢測產品真菌毒素黃曲霉毒素總量4項抗生素氯霉素黃曲霉毒素總量6項甲砜霉素黃曲