1、吞噬細胞吞噬功能的檢測 一、小吞噬細胞的吞噬作用 (一) 體內法材料 (1) 動物: 豚鼠。 (2) 菌種: 金黃色葡萄球菌菌液。 (3) 無菌注射器及針頭、無菌肉湯、玻片、瑞氏染液。方法 (1) 第1天注射無菌肉湯10 ml 于豚鼠腹腔，隔24 h 同法注射肉湯5 ml。20 min 后，再注射金黃色葡萄球菌菌液Iml 于上述部位。 (2) 注射完畢，每隔20 min 用注射器抽取腹腔液，并做推片，待其自千后，用瑞氏染色法染色，鏡檢時見金黃色葡萄球菌被小吞噬細胞吞入胞漿時為宜。 (3) 瑞氏染色方法如下: 將瑞氏染液滴加數滴于涂片上。加入等量的蒸餾水，輕輕混勻，染5 -10 min。用蒸餾水

2、(或自來水) 沖洗。待干或輕輕用吸水紙將涂片吸干，油鏡檢查。 結果 染色后，可見小吞噬細胞的核及被吞噬的細菌呈深紫藍色，而小吞噬細胞的胞漿為紫色。(二) 體外法 目的 1.生疏檢測白細胞吞噬作用的原理與試驗方法。 2.通過吞噬細胞的吞噬功能檢測了解機體的非特異性免疫功能。3.把握顯微鏡、油浸鏡的使用與愛護方法。原理 中性粒細胞具有在噬殺菌功能，當與顆粒物質(如金黃色葡萄球菌、白色葡萄球菌等)混合后，孵育肯定時間，顆粒物質被中性粒細胞吞噬。依據吞噬率和吞噬指數可反映該細胞的吞噬功能，但不能反映其殺傷功能。 材料 (1) 3.8% 枸櫞酸鈉。 (2) 碘伏、無菌注射器及針頭、吸管、試管、載玻片、溫

3、箱等。(3)瑞氏染液(4) 葡萄球菌懸液: 取白色葡萄球菌在瓊脂斜面上生長24 h的培育物，用無菌生理鹽水刮洗下菌苔，用PBS洗滌2次，最終用比濁法將菌液調整至5 x10 7ml 懸液，100加熱15min，置4冰箱備用。 方法(1) 自靜脈采血0.2 m,放于含3.8% 枸櫞酸鈉0.2 ml的小試管中，混勻，防止凝血(或由一人抽血10 ml 抗凝，供全小班使用)。(2) 取葡萄球菌懸液0.2 ml,加于上述血液中混勻。(3) 37 C溫箱孵育30min,每10 min取出振搖1次，再連續靜置孵育，于30 min 時取出。(4) 用毛細管從白細胞層(即沉淀紅細胞的表層) 吸取白細胞1滴，滴在載

4、玻片上，推成薄片，自然干燥。留意: 推制厚薄適宜的血膜片，血膜應呈舌狀，頭、體、尾清楚可分; 推制好的血膜應在空氣中晃動，以促進快干; 天氣寒冷或潮濕時，應于37 C溫箱中保溫促干，以免細胞變形縮小。(5) 瑞氏染液染色可用30 s快速單一染色法: 將染液鋪滿血膜，30 s以后用自來水沖洗。切勿先將染液傾去再沖洗，以免染液中的細小顆粒附著于玻片上使標本觀看不清楚。(6) 干燥后油鏡檢查，查找白細胞，計數。 留意應選擇涂片的體尾交界處染色良好的區域進行計數，由血膜邊緣向中心依次上、下呈曲線運動，以免重復計數(圖2-2)。 結果染色正確時，可見細胞核及被吞噬的細菌染成紫色，而白細胞的細胞漿則染成紅

5、色。計數200 個中性粒細胞，登記吞噬細菌的細胞數，以及每個中性粒細胞吞入的細菌數，分別求出吞噬百分率以及吞噬指數。其計算公式為: 200個中性粒細胞中吞噬細菌的細胞數吞噬率(%)= 100%200 200個中性粒細胞吞噬細菌的總數吞噬指數(%)= 100%200二、大吞噬細胞的吞噬作用 材料(1)動物: 豚鼠。(2) 10%雞紅細胞懸液、2% 無菌可溶性淀粉溶液。(3)無菌注射器及針頭、玻片、瑞氏染液。 方法(1) 注射2% 可溶性淀粉液10 m于豚鼠腹腔內。(2) 次日重復腹腔注入2%可溶性淀粉溶液5 ml，1h后再腹腔注人10% 雞紅細胞懸液3ml。(3) 雞紅細胞懸液注入后，每隔20mn用空注射器抽取豚鼠腹腔液至1h，并做推片，待其自干（