1、加校正因子的主成分自身對照法一、定義及適用范圍加校正因子的主成分自身對照法，即以主成分作為對照的內標法，校正因子可以在檢測時測定，但需提供雜質對照品，也可在建立方法時將測得的校正因子載入質量標準，供以后常規(guī)檢驗使用，無需長期提供雜質對照品，但也僅適用于已知雜質的控制。建議：校正因子在0.8-1.2時可不予校正。校正因子計算公式：f= 式中：f校正因子； As雜質對照品峰面積或峰高； Cs雜質對照品濃度； Ar待測成分對照品峰面積或峰高； Cr待測成分對照品濃度。二、校正因子的測定在校正因子的研究和使用中，標準物質、色譜條件、溶劑、檢測波長等均是重要的影響因素，研究中需要予以關注。 2.1校正因

2、子的測定需要用到特定雜質及主成分的標準物質，這些標準物質應具備量值準確的特點，符合標準物質（對照品）的相關要求；其次，確定校正因子的分析方法應與最終確定的質量標準方法一致，色譜條件等需經篩選優(yōu)化后確定，如有變更，需考慮對校正因子的影響，必要時重新確定；第三，要關注影響待測物UV吸收的各種因素，如溶液制備所用溶劑最好與最終確定的流動相相同，檢測波長最好在特定雜質及主成分UV曲線的峰或谷處，避開吸收值急劇變化波段，以保證測定方法具有較好的耐用性，并保持測定結果的恒定。 2.2一般情況下，校正因子可視具體情況通過如下幾種方法確定：（1）單濃度點測定：制備適當濃度的特定雜質對照品溶液和主成分對照品溶液

3、，分別進樣測定，照上式計算，得到校正因子。（2）多濃度點測定：制備適當?shù)母摺⒅小⒌腿綕舛鹊奶囟s質對照品溶液和主成分對照品溶液（涵蓋定量限、標準限度），分別進樣測定，照上式計算各校正因子，計算RSD，求平均值，得到校正因子。（3）標準曲線法測定：精密稱取雜質對照品和主成分對照品，分別制備系列溶液（涵蓋定量限、標準限度），分別進樣后，按最小二乘法以進樣量對響應值（峰面積等）進行線性回歸，求得兩條標準曲線，兩曲線斜率之比即為校正因子。（4）吸收系數(shù)比值法：對于UV檢測器來講，兩物質的相對校正因子實際上也是兩物質以流動相為溶劑，在檢測波長處的紫外吸收系數(shù)E1%1cm之比，故可按吸收系數(shù)法測定法的

4、相關技術要求測定各自吸收系數(shù)，如對照品級別的標準物質、高中低三水平濃度測定、吸收度介于0.30.8之間、至少5臺不同型號的UV分光光度計、2份供試液同時平行制備測定、同臺儀器2份供試液的平行測定結果不超過0.5%等。測定兩物質的吸收系數(shù)后，經統(tǒng)計分析確定兩物質吸收系數(shù)，計算比值，求得校正因子。2 / 8 上述各方法中，（1）和（2）法較為簡捷，可以快捷地量化特定雜質與主成分紫外吸收特征的差異，多用于評估采用主成分自身對照法定量雜質時是否需要校正。但如采用加校正因子的主成分自身對照法定量雜質，需將標準物質賦值信息轉化為校正因子固化在質量標準中，那么校正因子的準確性非常關鍵，校正因子的準確計算應符

5、合更為嚴格的要求，需要考慮并控制求算校正因子過程中的各種誤差因素，以及儀器通用性和色譜系統(tǒng)的耐用性等因素，以便使求得的常數(shù)更為準確并具代表性，此時采用（3）、（4）法更為適宜，如能考慮到測定人員、不同試驗室因素的影響，會更加符合常數(shù)求算的基本要求。三、方法驗證校正因子的測定屬于有關物質方法驗證中的一個項目，一般采用有關物質的測定方法，雜質對照品和主成分對照品線性濃度從定量限至限度的120%或150%，一般取5-6個點，使用3臺不同的儀器測定，按照上述方法（3），計算平均校正因子。有關物質方法學驗證主要包括：系統(tǒng)適用性、方法專屬性、精密度（儀器精密度、方法精密度和中間精密度）、線性、準確度（已知

6、雜質的回收試驗）、檢測限和定量限、溶液穩(wěn)定性和耐用性。試驗內容概念溶液配制份數(shù)進樣針數(shù)評定標準系統(tǒng)適用性系統(tǒng)適用性是對分析設備、電子儀器與實驗操作、測試樣品等整個系統(tǒng)進行評估的指標空白溶液1份供試液1份進1針進6針雜質峰峰面積RSD2.0%，保留時間RSD1.0%；雜質峰的拖尾因子2.0%，理論塔板數(shù)應符合質量標準的規(guī)定方法專屬性1專屬性系指在其他成分（如雜質、降解物、輔料等）可能存在下，采用的分析方法能夠正確鑒定檢出被分析物質的特性空白對照1份輔料溶液（或起始原料、中間體）1份供試液1份每份各1針空白對照無干擾；主峰與相鄰雜質峰的分離度2.0方法專屬性2未破壞樣品、光濕熱10天破壞樣品和酸堿

7、氧化破壞樣品各1份每份供試液進1針；空白溶液、酸堿空白及氧化空白各1針降解雜質峰與主峰的分離度2.0精密度在規(guī)定的測試條件下，同一均質供試品，經多次取樣進行一系列檢測所得結果之間的接近程度（離散程度）儀器精密度在同樣的操作條件下，在較短時間間隔內，由同一分析人員測定所得結果的精密度1%對照液儀器精密度進6針峰面積RSD2.0%供試液儀器精密度進6針（同系統(tǒng)適用性）峰面積RSD2.0%，保留時間RSD1.0%方法精密度供試液6份每份1針雜質含量RSD15%中間精密度同一實驗室，由于實驗室內部條件改變，如時間、分析人員、儀器設備、測定結果的精密度換儀器，換人6份供試液每份1針12份供試液響應因子R

8、SD20%線性在設計的測定范圍內，檢測結果與供試品中被分析物的濃度（量）直接呈線性關系的程度1%對照線性溶液5份每份1針相關系數(shù)（R）0.990，Y軸截距應在100%響應值的25%以內，響應因子RSD10%已知雜質的線性溶液5份準確度用該方法測定的結果與真實或認可的參考值之間的接近程度對照液1份；本底供試液1份；供試液3份每份2針；每份2針；每份3針平均回收率均應在80%-120%之間，9個回收率RSD10%檢測限與定量限均指試樣中的被分析物能夠被檢測到的最低量；檢測限不一定要準確定量；定量限測定結果應具有一定的準確度和精密度1%對照檢測限、定量限基線1針；檢測限2針；定量限6針應不小于3應不小于10雜質峰保留時間2.0%，峰面積5.0%已知雜質對照液檢測限、定量限溶液穩(wěn)定性供試液經X小時放置，含量的變化供試液1份0，1，2，4，6X小時各進1針主成分的含量變化的絕對值2.0%，雜質含量的絕對值在0.1%以內，并不得出現(xiàn)新的大于報告限度的雜質耐用性測定條件發(fā)生小的變動時