1、核酸結構、功能和核苷酸代謝l核酸的研究歷程： 1868年 Fridrich Miescher從膿細胞中提取“核素” 1944年 Avery等人證實DNA是遺傳物質 1953年 Watson和Crick發現DNA的雙螺旋結構 1968年 Nirenberg發現遺傳密碼 1975年 Temin和Baltimore發現逆轉錄酶 1981年 Gilbert和Sanger建立DNA 測序方法 1985年 Mullis發明PCR 技術 1990年 美國啟動人類基因組計劃(HGP) 2003年 美、英等國完成人類基因組計劃l核 酸(nucleic acid)：以核苷酸為基本組成單位的生物大分子，攜帶和傳遞遺

2、傳信息。u脫氧核糖核酸(deoxyribonucleic acid, DNA)： 90%以上分布于細胞核，其余分布于核外如線粒體，葉綠體，質粒等。 攜帶遺傳信息，決定細胞和個體的基因型(genotype)。u核糖核酸(ribonucleic acid, RNA)： 分布于細胞核、細胞液。 參與細胞內DNA遺傳信息的表達。某些病毒RNA也可作為遺傳信息的載體。一、核酸的元素組成：C、H、O、N、P（910%）二、核酸的分子組成核酸的基本組成單位是核苷酸 (nucleotide)。1、堿基：l嘌呤(purine)l嘧啶(pyrimidine)l五種堿基都能形成酮式-烯醇式或氨基-亞氨基的互變異構。

3、這兩種異構體的平衡關系受酸堿環境的影響。2、戊糖3、核苷：堿基 + 戊糖 嘌呤環上的N-9或嘧啶環上的N-1與戊糖的C-1以N-糖苷鍵相連。4、核苷酸：核苷 + 磷酸 糖環上的C-5與磷酸酯化成磷酸酯鍵。l體內重要的游離核苷酸及其衍生物u多磷酸核苷酸：NMP，NDP，NTPu環化核苷酸：cAMP，cGMPu含核苷酸的生物活性物質： NAD+、NADP+、CoA-SH、 FAD 等都含有 AMP一、DNA的一級結構1、概念： DNA分子中核苷酸的排列順序，即堿基排列順序。2、連接鍵：3,5-磷酸二酯鍵 即第一個核苷酸糖環上的C-3羥基與第二個核苷酸C-5磷酸形成3,5-磷酸二酯鍵。3、DNA鏈的

4、方向： 5 34、書寫方法：結構式、線條式、文字縮寫二、DNA的二級結構雙螺旋結構1、研究歷程l Oswald Avery (1877-1955)肺炎雙球菌感染實驗lErwin Chargaff (1905-2002)uDNA堿基組成有物種差異，且物種親緣關系越遠，差異越大；u相同物種，不同組織中DNA堿基組成相同，而且不因年齡、環境及營養而改變；uDNA分子中四種堿基的摩爾百分比具有一定的規律性，即A=T、G=C、A+G=C+T。這一規律被稱為Chargaff規則。lLinus Pauling (1901-1994)進行堿基的理化數據分析，認為A-T、G-C以氫鍵配對較合理，并提出DNA可能

5、是三股螺旋。lRosalind Franklin (1920-1958)和Maurice Wilkins (1916- )發現了DNA晶體的X-衍射圖譜中存在兩種周期性反射，并證明DNA是一種螺旋構象。lJames Watson (1928- )和Francis Crick (1916-2004)提出DNA的雙螺旋模型，和Maurice Wilkins 一起獲得1962年的nobel生理醫學獎2、DNA雙螺旋模型要點兩條單鏈反向平行，圍繞同一中心軸構成右手雙螺旋 (double helix)。螺旋直徑，表面有大溝和小溝。l磷酸-脫氧核糖骨架位于螺旋外側，堿基垂直于螺旋軸伸入內側。每圈螺旋含10

6、個堿基對 (bp)，螺距為。l兩條鏈通過堿基間的氫鍵相連，A=T，GC。l維持雙螺旋穩定的因素：橫向為氫鍵，縱向為堿基間的堆積力。3、DNA雙螺旋結構的多樣性目前已知DNA雙螺旋結構可分為：A、B、C、D（右手螺旋）；Z型（左手螺旋）三、DNA的超級結構lDNA超級結構的主要形式是超螺旋結構，由DNA雙螺旋進一步扭曲盤旋而成，原核生物DNA超螺旋結構就是其最高級結構。超螺旋結構可分為正超螺旋和負超螺旋兩類，它們在拓撲異構酶作用下或特殊情況下可相互轉變。lDNA超螺旋結構形成的意義：u使DNA形成高度致密狀態從而得以裝入細胞中；u推動DNA結構的轉化以滿足功能上的需要。如負超螺旋分子所受張力會引

7、起互補鏈分開導致局部變性，利于復制和轉錄。四、DNA在真核生物細胞核內的組裝真核生物染色體的基本單位是核小體(nucleosome)。核小體：由H2A、H2B、H3、H4 組蛋白各兩分子構成八聚體核心，大約146bp DNA在核心上盤繞圈，形成核心顆粒，核心顆粒之間由一個H1組蛋白和連接DNA（約54bp）構成的連接區連接。DNA(2nm)DNA(2nm) 7 7倍倍核小體核小體(10nm)(10nm) 6 6倍倍螺線管螺線管( (纖絲，纖絲，30nm)30nm) 7 7倍倍染色質絆環染色質絆環(300nm) (300nm) 6 6倍倍 常染色質常染色質(700nm)(700nm) 5 5倍倍

8、分裂中期染色體分裂中期染色體(1400nm)(1400nm)五、DNA的功能DNA的基本功能是作為遺傳信息的載體，為生物遺傳信息復制以及基因信息的轉錄提供模板。一、RNA的種類、分布、功能二、mRNA的結構與功能1、mRNA成熟過程：2、mRNA結構特點大多數真核mRNA的5末端均在轉錄后加上一個7-甲基鳥苷，同時第一個核苷酸的C2甲基化，形成帽子結構：m7GpppNm-。大多數真核mRNA的3末端有一個多聚腺苷酸(polyA)結構，稱為多聚A尾。l帽子結構和多聚A尾的功能u幫助mRNA由核內向胞質的轉位u維系mRNA的穩定性u調控翻譯的起始3、mRNA的功能：作為蛋白質合成的模板。三、tRN

9、A的結構與功能1、tRNA的一級結構特點含 1020% 稀有堿基，如 DHU3末端為 CCA5末端大多數為G具有 TC 2、tRNA的二級結構三葉草形氨基酸臂，DHU環，反密碼環，TC環，額外環3、tRNA的三級結構倒L形4、tRNA的功能：活化、搬運氨基酸到核糖體，參與蛋白質的翻譯。四、rRNA的結構與功能1、rRNA的結構2、rRNA的功能：參與組成核蛋白體，作為蛋白質生物合成的場所。3、rRNA的種類（根據沉降系數）五、其它RNAl細胞的不同部位存在的一些堿基數小于300的小分子RNA，統稱為非信使小RNA（snmRNA），包括核內小RNA(snRNA)，核仁小RNA(snoRNA)，胞

10、質小RNA (scRNA)，催化性小RNA，小干擾RNA(siRNA)，微小RNA（miRNA）。l參與hnRNA和rRNA的轉錄后加工、轉運以及基因表達調控等。lRNA組學 (RNomics)：研究細胞中snmRNAs的種類、結構和功能的科學。同一生物體內不同種類的細胞、同一細胞在不同時間、不同狀態下snmRNAs的表達具有時間和空間特異性。l核酶(Ribozyme)：具有催化作用的RNA。一、核酸的一般性質lDNA的酸堿度及溶解度：uDNA有磷酸基及堿基，為兩性大分子，但偏酸性，生理條件下帶負電。u可與金屬離子成鹽，不溶于乙醇或異丙醇lDNA的高分子性質：線性高分子，粘度極大 粘度： DN

11、A RNA dsDNA ssDNAlDNA的紫外吸收：最大吸收波長為260nm，常用作核酸的定性、定量分析。uOD260=1.0 相當于 50g/ml雙鏈DNA 40g/ml單鏈DNA（或RNA） 20g/ml寡核苷酸u判斷核酸樣品的純度： DNA純品：OD260/OD280 = 1.8 RNA純品：OD260/OD280 二、DNA的變性(denaturation)1、概念：在某些理化因素作用下，DNA雙鏈解開成兩條單鏈的過程。2、方法：過量酸，堿，加熱，變性試劑如尿素、酰胺等。3、本質：雙鏈間氫鍵的斷裂。4、DNA變性后的性質改變：l增色效應：DNA變性后對260nm紫外光的吸收度增加的現

12、象；l旋光性下降；l粘度降低；l生物學功能喪失或改變。5、DNA熱變性的解鏈曲線：如果在連續加熱DNA的過程中以溫度對A260（absorbance，A，A260代表溶液在260nm處的吸光率）值作圖，所得的曲線稱為解鏈曲線。融解溫度（melting temperature, Tm）：加熱DNA溶液，使DNA解鏈，對260nm紫外光的吸收度達到最大值一半時的溫度。Tm的高低與DNA分子中G+C的含量有關，G+C的含量越高，則Tm越高。三、DNA的復性(renaturation)1、概念：在適當條件下，變性DNA的兩條互補鏈可恢復天然的雙螺旋構象。 熱變性的DNA經緩慢冷卻后即可復性，這一過程稱

13、為退火(annealing) 。2、DNA復性后，一系列性質將得到恢復，但是生物活性一般只能得到部分的恢復，具有減色效應（ DNA復性時，其溶液OD260降低）。3、影響因素 DNA濃度，DNA大小，DNA復雜性（重復序列數目），溶液離子強度。 4、核酸的分子雜交(hybridization)l概念：在DNA復性過程中，如果把不同單鏈DNA或單鏈DNA與RNA放在同一溶液中，只要在DNA或RNA的單鏈分子之間有一定的堿基配對關系，就可以形成局部或全部雙鏈。l應用u研究DNA分子中某一種基因的位置u確定兩種核酸分子間的序列相似性u檢測某些專一序列在待檢樣品中存在與否u是基因芯片技術的基礎 四、兩

14、種重要的生物大分子比較l核酸的消化l核酸的吸收及生物學功能核苷酸、核苷、磷酸、戊糖、堿基均可在小腸吸收。核苷酸、核苷吸收進入腸粘膜細胞后可再繼續水解。磷酸、戊糖可被機體利用，堿基很少利用、分解后排出。一、嘌呤核苷酸的代謝1、嘌呤核苷酸的合成代謝l從頭合成途徑（主要途徑）：利用5-磷酸核糖，氨基酸，一碳單位和CO2等原料，逐步合成嘌呤核苷酸的過程。這一途徑在肝（主要部位）、小腸和胸腺的胞液中進行。u嘌呤合成的元素來源：“竹竿”(Gly)立中央，“谷子”(Gln)下面長， CO2“天”(Asp)上飄，“假仙”(甲酰)在兩旁。u合成過程：1）次黃苷酸（IMP）的合成2）腺苷酸（AMP）與鳥苷酸（GM

15、P）的生成3）三磷酸嘌呤核苷的合成：u嘌呤核苷酸從頭合成特點嘌呤核苷酸是在磷酸核糖分子上逐步合成的，先合成咪唑環，后合成嘧啶環。先合成 IMP，消耗5個ATP(6個高能磷酸鍵)，再轉變成 AMP或GMP，又需要1個ATP。u嘌呤核苷酸從頭合成的調節調節方式：反饋調節和交叉調節l補救合成途徑：利用體內游離的嘌呤或嘌呤核苷，經過簡單的反應，合成嘌呤核苷酸的過程。u參與補救合成的酶：腺嘌呤磷酸核糖轉移酶(APRT)次黃嘌呤-鳥嘌呤磷酸核糖轉移酶(HGPRT)腺苷激酶(adenosine kinase)u補救合成的生理意義節省從頭合成時的能量和一些氨基酸的消耗。大部分組織細胞都能進行補救合成途徑，但體

16、內某些組織器官，如腦、骨髓等只能進行補救合成。u自毀容貌癥一種X-連鎖隱性遺傳病，多見于男性。由于遺傳缺陷導致次黃嘌呤-鳥嘌呤磷酸核糖轉移酶（HGPRT）缺失，患者表現為尿酸增高及神經異常。癥狀為腦發育不全、智力低下、攻擊和破壞性行為、常咬傷自己的嘴唇、手和足趾，故稱自毀容貌癥。l嘌呤核苷酸的抗代謝物是一些嘌呤、氨基酸或葉酸等的類似物，主要以競爭性抑制干擾或阻斷嘌呤核苷酸的合成代謝，從而進一步阻止核酸以及蛋白質的生物合成。2、嘌呤核苷酸的分解代謝l痛風癥的治療機制嘌呤代謝紊亂使尿酸鹽晶體積聚，導致痛風、關節炎、尿路結石及腎病，臨床上用別嘌呤醇治療。二、嘧啶核苷酸的代謝1、嘧啶核苷酸的合成代謝l從頭合成途徑：利用磷酸核糖、氨基酸、一碳單位及二氧化碳等簡單物質為原料，經過一系列酶促反應，合成嘧啶核苷酸。主要在肝細胞胞液合成。u嘧啶合成的元素來源：u合成過程：