1、分子生物學復習題第三章1. 基因的三種主要功能是什么？儲存信息(轉錄，翻譯);復制;突變第四章1. cDNA、基因克隆與核酸內切酶的概念（概念）（1） cDNA指與RNA鏈互補的單鏈DNA，以其RNA為模板，在適當引物的存在下，由RNA與DNA進行一定條件下合成的DNA。（2）基因克隆一般指將外源基因導入宿主細胞中，分離含有外源基因的單細胞，然后由一個單細胞生長起來的都是含有外源基因的相同的細胞系。 （3）核酸內切酶是在核酸水解酶中，水解DNA分子鏈內部磷酸二酯鍵生成寡聚核苷酸的酶。2. 載體至少需要幾個篩選標記各起什么作用？答：載體至少需要3個篩選標記。作用分別為：1：指示自主復制的起點。2

2、：指示載體進入宿主細胞。3：指示目的基因進入宿主細胞。3. cosmid、質粒與噬菌體載體的區別？Cosmid噬菌體質粒宿主Bacteria大腸桿菌BacteriaBacteria插入片段的大小Up to 50kb 12-20 kb 1-8 kb進入細胞的方式Transfection轉染Infection感染Transformation轉化轉入效率高效高效一般第五章1. 雜交的概念，Northern blot與Southern blot 的異同點（簡答）答：一條核酸單鏈在適宜條件下與另一條與之互補的核酸單鏈在適宜的條件下形成雙鏈螺旋的現象叫做雜交。異同點：Southern blot 是分析DN

3、A的雜交技術，Northern blot是分析RNA的 Southern 和Northern原理基本相同，都是利用DNA或RNA的復性過程，但過程上也有區別，主要是： Southern是先電泳后變性，而Northern是先變性后電泳； Southern是堿變性，而Northern采用甲醛、乙二醛、二甲基亞砜等變性，因為采用堿變性會導致RNA水解。第六章1. 轉錄、啟動子、下降突變、上升突變？(概念 選擇)答：（1）轉錄是指拷貝出一條與DNA鏈序列完全相同（除了TU之外）的RNA單鏈的過程，是基因表達的核心步驟。（2）啟動子（promoter）：一段RNA聚合酶轉錄起始時結合的DNA序列。（3）

4、下降突變：破壞與保守序列的匹配率，使啟動子的轉錄活性減弱的突變。（4）上升突變：使啟動子的序列更接近保守序列而使啟動子功能增強的突變。2. 原核生物啟動子的基本結構？鄭煒鵬答：原核生物啟動子在轉錄起始位點上游存在-10和-35兩個區域中心。大寫字母僅指在給定的位置該堿基的出現有較高的概率。小寫字母相應的堿基在所給定的位置出現的頻率較大寫字母在其位置上的概率要低。3. E.coli RNA聚合酶核心酶與全酶的區別？鄭煒鵬答：大腸桿菌的RNA聚合酶全酶由5個亞基組成（2，），沒有基的酶叫核心酶。核心酶只能使已開始合成的RNA鏈延長，但不具有起始合成RNA的能力，必須加入基才表現出全部聚合酶的活性。

5、4. E.coli終止子的類型、結構特點與作用機制。鄭煒鵬答：大腸桿菌細胞內含有兩種終止子。一種是沒有其它蛋白幫助下的內在終止子。第二種是依賴輔助因子的終止子，叫做依賴型終止子。 <1>內在的終止子結構 ： 大腸桿菌色氨酸（trp）操縱子含有一個導致提前轉錄終止的衰減序列。trp 衰減子具有兩個元件（1）反向重復序列（2）非模板鏈富含一連串T的序列 <2> 因子非依賴型終止子：因子非依賴型或內在的終止依賴于終止子的兩個元件：（1）富含GC的反向重復序列（2）基因非模板鏈緊隨的富含T的序列。因子非依賴型終止子允許在轉錄末端形成發夾結構的反向重復序列；非模板鏈一連串的T使得

6、rU-dA堿基對作用很弱。第七章1. 操縱元、結構基因、操縱子、調控基因、終止子、效應物 正/負調控、弱化子（衰減子）鄭煒鵬答：操縱元：結構基因：負責編碼細胞代謝途徑中組成型蛋白質的基因。其所編碼的蛋白質一般不作為調節因子。操縱子：操縱子是指能被調控蛋白特異性結合的一段DNA序列，常與啟動子鄰近或與啟動子序列重疊，當調控蛋白結合在操縱子序列上，會影響其下游基因轉錄的強弱。調控基因：調控基因是編碼能與操縱序列結合的調控蛋白的基因。終止子：終止子是給予RNA聚合酶轉錄終止信號的DNA序列。效應物：所謂效應物是指直接產生效應的物質,通常是酶,如腺苷酸環化酶、磷酸脂酶等,它們是信號轉導途徑中的催化單位

7、。效應物通常也是跨膜糖蛋白。正/負調控：負調控保證了乳糖操縱子在乳糖不存在時，處于關閉狀態，而正調控保證了乳糖操縱子在葡萄糖存在時處于關閉狀態，甚至在乳糖和葡萄糖一起存在時也處于關閉狀態。 弱化子（衰減子）：RNA合成終止時，起終止轉錄信號作用的那段DNA序列。2. （1）根據圖示請寫出乳糖操縱子各部分的名稱和功能。并簡述乳糖操縱子的正、負調節機制。（論述題，詳細過程）許玉慶、丁俊祥1、結構圖：I：阻遏蛋白基因序列。C:CAP binding site 代謝激活蛋白結合位點。P:啟動子。O：操縱子。結構基因包括：Z. Y A 經過翻譯以后分別是-半乳糖苷酶，半乳糖苷透過酶，b-半乳糖苷乙酰轉移

8、酶。2、負調控機制：由于阻遏蛋白阻止RNA聚合酶對3個lac基因的轉錄，所以當阻遏蛋白結合到操縱子上時。操縱子即被關閉。當供應的葡萄糖被消耗殆盡且有乳糖可被利用時，少數的酶分子將乳糖轉化為異乳糖，異乳糖作為誘導劑與阻遏蛋白結合，引起阻遏蛋白變構，從操縱子上脫落下來，RNA聚合酶與啟動子結合而起始3個lac基因的轉錄，形成相應的酶分解利用乳糖。正調控機制：由代謝激活蛋白介導，CAP 與cAMP協同促進操縱子的轉錄。由于葡萄糖的存在會引起cAMP濃度的降低，所以葡萄糖存在可以阻止操縱子的正調控。只有當葡萄糖濃度較低且需要消耗另一種糖原時，lac操縱子被激活，CAP、cAMP通過結合在鄰近啟動子的激

9、活位點而促進lac操縱子的轉錄。第十章1（2）真核生物RNA聚合酶的種類、功能及定位。（詳細敘述）RNA聚合酶種類定位功能核仁合成大的rRNA前體核質催化合成mRNA前體hnRNA核質催化合成5srRNA tRNA及其他小分子RNA和病毒RNA.2hnRNAs, snRNAs的定義、概念，它們如何起作用？鄭煒鵬答：hnRNAs：不均一核RNA ，真核生物mRNA的前體，為存在于真核生物細胞核中的不穩定、大小不均的一組高分子RNA之總稱。占細胞全部RNA之百分之幾，在核內主要存在于核仁的外側。snRNAs：核小RNA，真核生物細胞核中的小分子RNA，鏈長為幾十到一百多核苷酸，它參與真核生物細胞核

10、中RNA的加工。作用：snRNAs和許多蛋白質結合在一起成為小核核糖核蛋白參與信使RNA前體（hnRNAs）的剪接，使后者成為成熟mRNA。3（3）RNA聚合酶II 的亞基組成，最大亞基（CTD）的磷酸化有那些作用（11章promoter clearance from initiation to elongation;14章CTD stimulate splicing in vitro; 15章 binding of the CTD of Rpb1 to mRNA-processing proteins）？（論述）許玉慶、丁俊祥答：聚合酶II原先的12個亞基歸為三組：核心亞基，它們與細菌RNA

11、聚合酶核心亞基的結構和功能相似；聚合酶II中的三種多肽，Rpb1,Rpb2和Rpb3對酶的活性是必需的。它們與大腸桿菌RNA聚合酶中的，及亞基同源。 通用亞基，至少在酵母中它們同時存在于三種聚合酶中；Rpb5,Rpb6,Rpb8,Rpb10,和Rpb12在酵母三種核聚合酶中都存在。它們在轉錄過程中起著最基本的作用。 非必須亞基，它們對酶的活性是可以被替換的。有兩個亞基Rpb4,Rpb9,在聚合酶活性中并非絕對需要。Rpb7和Rpb11不屬于以上三類中的任何一種。然而，它們是聚合酶活性所必需的，研究發現Rpb7和Rpb11的突變體沒有活性。 最大亞基（ CTD）的磷酸化有那些作用IIa亞基可以通

12、過CTD的磷酸化轉換成IIoCTD的磷酸化打破在啟動子區聚合酶與TBP的結合，開始進入轉錄延伸。CTD呈現了協助招募剪接底物以激活剪接體的作用加帽、剪接和多聚腺苷酸化的酶都直接結合到CTD上，CTD為這三個加工事件提供了一個平臺。4Enhancer and Silencer 的概念，特點及作用。答：1、增強子：無方向和位置依賴的，能夠增強基因轉錄的DNA元件。沉默子：無方向和位置依賴的，能夠抑制相關基因轉錄的DNA元件。特點：它們在基因轉錄過程中，對轉錄效率的影響無位置和方向依賴；增強子與沉默子具有組織特異性，其活性有賴于組織特異性DNA結合蛋白。第十一章1 （4）什么是TBP因子的多功能性？

13、答:分子生物學充滿了神奇 ，其中之一就是TATA結合蛋白（TBP）的多功能性。a) TBP不僅能夠與聚合酶II共同作用于含有TATA框的啟動子，而且在不含TATA框的由聚合酶II識別的啟動子上也起作用。b) 更神奇的是，它還對不含TATA框的聚合酶I和III識別的啟動子起作用。TBP對所有聚合酶和啟動子類型都起作用，它是一種通用真核轉錄因子。2 （5）什么是組裝因子？哪些因子含有TBP? 它們的功能？（詳細敘述）郭進寶1）組裝因子：結合于轉錄起始位點的上游區，識別啟動子內特定的結合位點，組裝前起始復合物的因子。2）類因子，類因子，類因子均含有TBP。3） TBP不僅能夠與聚合酶II共同作用于含

14、有TATA框的啟動子，而且在不含TATA框的由聚合酶II識別的啟動子上也起作用，它還對不含TATA框的聚合酶I和III識別的啟動子起作用。TBP對所有聚合酶和啟動子類型都起作用，它是一種通用真核轉錄因子。 （1）TBP在I類轉錄中是必需的，除了酵母外，所有類核心結合因子都是TBP。聚合酶和聚合酶的轉錄依賴于TBP和幾種TAFs組成的轉錄因子 （2）TAFIIs的特別受關注的兩個功能是：助于TBP對帶有起始子和DPEs的啟動子的轉錄。TAFIIs還具有酶活性，并且TBP結合在TATA框上并把TFIIIB錨定在上游的結合位點。（3）TBP的突變不僅影響聚合酶II的轉錄，TBP也參與到I類和III類

15、基因的轉錄，并且分別與I類和III類起始前復合物中的不同TAFs（TAFIs和TAFIIIs）結合。 有TATA框的II類啟動子（也可能是第三類），這個因子是TBP，但其它類型的啟動子有它們自己的組裝因子。在特定的啟動子中，即便TBP不是首先結合的組裝因子，但它在大多數已知的啟動子中作為起始前復合物組裝的一部分并在組建復合體的過程中發揮其組織裝配的優勢。第十二章1 轉錄激活子的結構及相應功能？翁駿超答：轉錄激活因子可以激活也可抑制RNA聚合酶II的轉錄過程。 它們至少都有兩個基本的功能域組成 ：1、DNA結合結構域（DNA-binding domain）2、轉錄激活結構域（transcript

16、ion-activating domain功能：1、細胞中的轉錄激活因子通過所謂的召集作用來提高轉錄水平； 2、真核生物的轉錄激活因子也介導RNA聚合酶全酶與啟動子結合，但不像原核生物轉錄激活因子那樣直接，真核轉錄激活因子通過刺激通用轉錄因子及RNA聚合酶全酶與啟動子結合。2 DNA-binding Domain 有幾種類型？是什么？激活結構域有幾種？翁駿超答：大多數DNA結合基序可歸為如下幾類：1.含鋅組件（Zinc-containing module） § 這類含鋅組件包括：Ø a. TFIIIA和Sp1兩種轉錄激活子中發現的鋅指結構（Zinc fingers）。

17、16; b.糖皮質激素受體和其他細胞核受體成員中發現的鋅組件。Ø c.酵母轉錄激活子GAL4和其家族成員中發現的包含兩個鋅分子和六個半胱氨酸的組件。2.同源域（Homeodomain, HD）。 § 螺旋-轉角-螺旋的DNA結合域在結構和功能上類似。3.bZIP和bHLH基序。 § 亮氨酸拉鏈（leucine zipper）和螺旋-環-螺旋結構（helix-loop-helix, HLH）二聚化域中的一個或兩個相連接。迄今為止，大多數的轉錄激活域可歸為如下三種類型：1 酸性域（acidic domain）。a) 酵母轉錄激活子GAL4是典型代表。它具有一個由49個

18、氨基酸組成的結構域，其中11個氨基酸是酸性氨基酸。2 富含谷氨酰胺的結構域。Sp1轉錄激活子有兩個這樣的結構域，谷氨酰胺占該區氨基酸總數 的25%左右。其中的一個結構域中，在143個氨基酸長度的肽段中含有39個谷氨酰胺。此外，Sp1還有兩個轉錄激活結構域不能列入這三類的任何一種。3 富含脯氨酸的結構如轉錄激活子CTF，在84個氨基酸組成的結構域中19個氨基酸是脯氨酸。3 什么是multiple enhancers? 這對細胞的調控有什么意義？翁駿超答： 復合增強子：是指對基因進行調控時，有不止一個增強子行使功能，這些增強子稱作復合增強子。 對于細胞而言復合增強子能使一個特定基因對各種激活因子的

19、不同組合產生應答，不同激活因子的組合對不同細胞中的給定基因產生不同的水平表達，同時這種布局使得細胞能夠對生物的基因在不同組織或不同的發育階段產生精細的調控。4 什么是insulator? 它的主要功能？比較enhancer, activator, insulator的本質和作用？翁駿答：絕緣子(insulator)：屏蔽一個基因的增強子的正效應或沉默子負效應的DNA元件。激活因子（activator）：于增強子（或激活因子結合區）結合的蛋白質并激活附近啟動子的轉錄。在真核生物中，它激發轉錄前起始復合體的形成。增強子（enhancer）：促進一個或多個基因轉錄的DNA元件。增強子一般存在于其調控

20、基因的上游，但他們也可以點到或在間距幾百甚至上千對堿基之外對基因起調控作用。絕緣子與增強子的本質都是DNA元件，而激活因子的本質是蛋白質。5 （6）對激活因子的調節有哪些方式？（詳述）紀蘇婷答：對激活因子的調節方式有（1）細胞核受體傳統分類法將核受體歸為三類：I型受體（type I receptors）包括類固醇激素受體，代表物是糖皮質激素受體。當激素的配體缺乏時，受體蛋白和其他蛋白偶聯存在于細胞質中；當激素配體與I型受體蛋白相結合時，釋放偶聯蛋白，以同源二聚體形式進入細胞核，結合在激素應答元件上。II類激素受體，甲狀腺激素受體是典型的II類受體，存在于細胞核中。對于型受體，由于其配體有待鑒定

21、，因此也被稱為“孤兒受體”。（2）GAL4蛋白GAL4蛋白是調控酵母半乳糖代謝基因的轉錄激活因子。每種GAL4應答元件包括一個GAL4靶位點，每個GAL4單體是包含六個半胱氨酸及兩個鋅離子的雙金屬巰基簇。GAL4單體包含一個螺旋二聚體基序，能在與其它GAL4單體相互作用時形成平行的纏繞螺旋。（3） 聚合酶全酶的召集全酶是包含一組通用轉錄因子和其他多肽的復合體。 事實上有證據表明，的確存在對全酶的召集作用。 實驗結果顯示激活因子是通過召集完整的聚合酶全酶到啟動子上，而不是在啟動子上一次一個地組裝。聚合酶全酶可做為一前體單元被召集，或以其中的一部分形式被召集到前起始復合物上。 （4）復合增強子通過

22、DNA環化，使結合在增強子上的每種轉錄激活子能與啟動子上的起始復合物相互作用。當增強子處于基因附近時，基因處于開放狀態；反之，則處于關閉狀態。多增強子具有協同作用的能力，多增強子能應答不同的轉錄激活子的組合單元。（5）轉錄激活子的泛素化RLIM蛋白通過在CLIM蛋白的賴氨酸殘基上附加多拷貝的泛素小分子蛋白，從而形成所謂的泛素化蛋白。一旦附加的泛素分子鏈足夠長時，此蛋白將被送達細胞質內的一個蛋白酶體結構內。它含有的蛋白酶可使任何被帶入蛋白酶體的泛素化蛋白降解。 泛素化對激活因子也有正效應。 （6）轉錄激活因子的SUMO修飾SUMO修飾是在目標蛋白的賴氨酸殘基上，附加一至多個101個氨基酸的SUM

23、O。SUMO修飾的激活因子蛋白不會導致降解，相反會被特異且穩定區隔在細胞核中，使其不能與靶基因序列互作。 （7）轉錄激活子的乙酰化組蛋白的賴氨酸殘基能被組蛋白乙酰轉移酶（HATs）乙酰化，從而減弱組蛋白的阻抑活性。乙酰轉移酶（HATs）可以使非組蛋白激活因子和阻抑物發生乙酰化，并對乙酰化的蛋白活性產生正向或負向調控。 （8）信號轉導途徑蛋白質的磷酸化與去磷酸化過程是生物體內普遍存在的信息傳導調節方式。信號轉導途徑通常由信號分子與細胞膜受體相互作用而激活，多引起基因表達的改變。多數信號轉導途徑，包括Ras-Raf途徑，依賴蛋白質磷酸化來傳遞信號分子，并且此信號會逐級擴大。第十四章1 什么是編碼區

24、，m RNA的組成？紀蘇婷編碼區指從起始密碼子AUG開始經一連串編碼氨基酸的密碼子直至終止密碼子的結構。mRNA是以DNA的一條鏈為模板，以堿基互補配對原則，轉錄而形成的一條單鏈。5端的結構稱為帽子結構，3端的是一串AMP稱做poly(A)2 什么是mRNA的前體？紀蘇婷定位于細胞核內的較大RNA分子被認為是mRNA前體。3 核mRNA剪接的機理。索套結構指什么？紀蘇婷從未成熟的mRNA中切除內含子，將外顯子連接在一起形成最后產物的過程叫做RNA的剪接。hnRNA的大小（比mRNA大）和定位（細胞核）與未經剪接的 mRNA前體完全一致，而且，hnRNA很快會轉化為比較穩定的小RNA，這暗示hn

25、RNA僅僅是形成穩定RNA的中間體。索套兩步模型（two-step lariat model）。第一步，索套狀中間產物的形成。當位于內含子中間的腺苷酸的2-OH攻擊第一個外顯子和該內含子開始處G之間的磷酸二酯鍵時，形成索套狀環，同時將第一個外顯子與內含子分開。第二步，完成剪接過程：第一個外顯子末端留下的3端-OH攻擊內含子與第二個外顯子之間的磷酸二酯鍵。形成外顯子-外顯子磷酸二酯鍵，同時釋放索套狀的內含子。 可變剪接能夠決定一個基因的蛋白質產物的性質，成為基因表達轉錄后水平的調控方式之一。 4 什么是可變剪接（alternative splicing）?紀蘇同一前體mRNA分子，可以在不同的剪

26、接位點發生剪接反應，生成不同的mRNA分子，最終產生不同的蛋白質分子的一種RNA剪切方式。5 什么是RNA的自我剪接？group I和group II introns 的自我剪接方式由何不同？紀蘇婷具有自我催化能力,將自身的某些部位切除的現象稱為自我剪接。根據特定的保守序列，真菌線粒體基因最初被劃分為兩類：類和類。類內含子的自剪接反應由游離的鳥嘌呤核苷酸啟動；類內含子的自剪接反應由內含子內部的腺苷酸啟動，并形成套索結構。第十五章1 什么是mRNA的帽子結構？什么是capping?蘇芳芳從真核生物到病毒來源的大多數mRNA都被甲基化了。而且，大部分甲基化都集中在mRNA的5端，在結構上稱之為帽子

27、（cap）結構。 2 帽子的功能有哪些？（詳述）蘇芳芳（1）防止mRNA的降解； （2）增強mRNA的翻譯能力；（3）增強mRNA從核內向細胞質中的轉運；（4）增強mRNA的剪接效率。3 什么是Poly(A)? 什么是polyadenylation? Poly(A)的長度和功能？蘇芳芳Poly(A)：在核內不均一RNA（hnRNA）和mRNA的3端共享一個獨特的結構，即一個被稱為poly(A)的AMP殘基長鏈。Podenylation：給RNA添加poly(A)的過程稱為多聚腺苷酸化。Poly(A)的長度是200個堿基。Poly(A)的功能:poly(A)具有保護mRNA免受降解的功能，pol

28、y(A)對它所連結的mRNA的翻譯有促進作用，還有證據表明poly(A)在mRNA的剪接及轉運出核時起一定的作用。4 RNA聚合酶II最大亞基上CTD的作用（延伸、剪接、加帽、加尾等各方面）。(詳述)丁俊祥第十六章1 什么是cis-splicing 和trans-splicing? 反式剪接的機理。王歡順式剪接：去分支酶只打開套鎖結構使之成為線形反式剪接：100nt的半個內含子在3端是開放的而不是套鎖結構的，所以去分支酶可以將它作為獨立的RNA而釋放它。2 什么是編輯？王歡是指轉錄后的RNA在編碼區發生堿基的加入，丟失或轉換等現象。它導致了DNA所編碼的遺傳信息的改變，因為經過編輯的mRNA序

29、列發生了不同于模板DNA的變化。編輯是轉錄后在mRNA的Poly（A）尾巴處發生的。編輯是按照3-5方向進行。3 什么是RNAi? 它的作用機理?王歡1、在這些生物中轉入的轉基因不是表達了，而是被該生物關閉了，被關閉的基因不僅僅是轉入的基因還包括該基因在細胞中的正常拷貝。2、 dsRNA導致胚胎中產生RNA干涉。而且，在正進行RNA干涉的胚胎中檢測到了相應的靶RNA的減少這種dsRNA必須包括外顯子區，dsRNA相應的內含子和啟動子序列不能引起RNA干涉。Dicer在RNAi 中對RNA進行切割。編碼Dicer的基因Dicer表達產生一個可將dsRNA切成22nt的小片段的蛋白質。由它制備的抗

30、體可與果蠅提取物中的一個酶結合，該酶能將dsRNA切割成小的片段。將dicer相應的dsRNA 導入到果蠅細胞中，它能部分阻斷RNAi的進行。Dicer也有RNA螺旋酶活性，因此它能將其構建的siRNA的雙連解開。但不能對靶信使RNA進行切割，由酶slicer完成此項工作，蛋白質ArgonauteRNAi的第二步（Slicer）反應中是必需的，可以作為siRNA的停泊位點，但對于切割酶的切割活性它不是必需的。第十七章1 什么是30S起始復合體？30S起始復合體是如何形成的？IF因子在其中的作用。王歡（1）核糖體解離為50s和30s亞基后，細胞就在30s亞基上建立一個復合物，包括mRNA、氨酰t

31、-RNA和幾個起始因子。（2）核糖體解離后形成50s和30s亞基IF因子緊密的結合在30s亞基上靠近16SRNA3-末端的一個位點上，一旦三個起始因子結合在一起，它們就將另外兩個關鍵的參與者mRNA和初始氨酰-tRNA吸引到復合物上，后兩者的結合順序是隨機的。（3）IF1激發核糖體的解離，IF3結合到游離的30s亞基上阻止它們與50s亞基重新結合再形成核糖體，IF2能夠結合到30s亞基上。2 真核生物中翻譯的起始有什么特點？與原核生物有什么異同點？（認真寫）王歡 第一，真核生物的起始從甲硫氨酸，而不是N-甲酰甲硫氨酸開始。但起始tRNA與將甲硫氨酸加到多肽鏈內部的tRNA是不同的（tRNAmM

32、et）。起始tRNA攜帶的是非甲酰化甲硫氨酸，不適合叫tRNAfMet，而常被稱做tRNAiMet 或者 tRNAi。第二個主要區別是，真核生物的mRNA沒有Shine-Dalgarno序列來指示核糖體從哪兒開始翻譯，大多數真核生物mRNA的5'-末端具有帽子結構（15章），以此指示起始因子結合并開始搜索起始密碼子。3 什么是SD sequence? Kozak sequence?（概念）朱燕（1）SD序列是mRNA中用于結合原核生物核糖體的序列。（2）Kozak 序列存在于真核生物mRNA的一段序列，其在翻譯的起始中有重要作用。核糖 體能夠識別mRNA上的這段序列，并把它作為翻譯起始

33、位點。第十八章1 mRNA的閱讀方向？多肽的合成方向？朱燕答：已知蛋白質的合成方向是從氨基端至羧基端，那么很容易證明mRNA是按532 什么是genetic code? 標準遺傳代碼有多少個？遺傳代碼有什么特點？朱燕答：遺傳密碼：核酸中的核苷酸殘疾序列與蛋白質中的氨基酸殘基序列之間的對應關系。標準遺傳代碼有64個。遺傳代碼的特點：§ 每個密碼子三聯體決定一種氨基酸。§ 兩種密碼子之間無任何核苷酸或其他成分加以分離，即密碼子無逗號。§ 密碼子具有方向性。§ 密碼子有簡并性，一種氨基酸的現象稱為密碼子的簡并性。§ 共有64個密碼子。§ 密

34、碼子有通用性，即無論是病毒、原核生物還是真核生物密碼子的含義都是相同的。3 密碼子和反義密碼子的不尋常堿基配對指什么？通常發生在什么位置？陳凱答：一種方式可能是對同一個氨基酸具有多個tRNA（同工tRNA），每個都專一性地對應不同的密碼子。確定的生物體中含有約60種tRNA。但理論上，比這個簡單假設所預計的要少得多的tRNA就可以解決問題。 他假設密碼子的前兩位堿基必須按照Watson-Crick 堿基配對原則與反密碼子嚴格配對，但是最后一位堿基則會從其正常位置發生“擺動”與反密碼子形成反常的堿基配對。這個假說被稱之為擺動假說。4 （7）什么是G protein? 有什么特點？哪些因子屬于G

35、proteins？（選擇 概念 填空）曹靖答：G蛋白是具有GTP酶活性，在細胞信號通路中起信號轉換器或分子開關作用的蛋白質大多數G蛋白都具有以下特點 ：(1)G蛋白是GDP-和GTP-結合蛋白。G蛋白的“G”來自于“鳥嘌呤核苷酸”。(2)G蛋白在三種構象之間循環，取決于是否結合GDP、GTP，或不結合核苷酸，并且這些構象狀態決定它們的活性。(3)G蛋白與GTP結合后才被活化執行功能。(4)G蛋白具有內在的GTP酶活性。(5)G蛋白的GTP酶活性被GTP酶活化蛋白激發。(6)當GAP激發G蛋白的GTP酶活性時，G蛋白將自己所結合的GTP降解成GDP，并使自身失活。（7）G蛋白被鳥嘌呤核苷酸交換蛋

36、白重新激活，該因子從失活的G蛋白上除去GDP，允許另一分子GTP結合。 屬于G proteins因子有RF3、起始因子EF-G、延伸因子EF-Tu5 （8）什么是翻譯的終止？有哪些終止密碼？（選擇。）陳凱答：延伸循環不斷重復，每次就會在多肽鏈上加入一個新的氨基酸。最后，核糖體遇到終止密碼子，獲得信號，該是翻譯終止。mRNA分子中的琥珀、赭石和蛋白石突變分別產生UAG、 UAA和UGA三個終止密碼子，因此造成肽鏈翻譯的提前終止。這三個密碼子也是mRNAs編碼區末端的正常終止信號。6 有哪些釋放因子？它們是如何分工的？陳凱答：原核細胞的釋放因子：a) 釋放因子（RF1）與終止密碼子UAA和UAG合

37、作，引起fMet的釋放，而另一個釋放因子（RF2）與UAA和UGA合作。 b) 第三個釋放因子（RF3）是一個核糖體依賴的GTPase，結合GTP并幫助其它兩個釋放因子結合到核糖體上。 那么真核生物的釋放因子又是怎樣的呢？a) 1971年通過與Nirenberg相同的方法，發現了第一個真核釋放因子（eRF）。 b) eRF能識別全部3個終止密碼子，而不像原核細胞的兩種釋放因子都只能識別2個。 c) eRF也像原核細胞RF1和RF2一樣，與G蛋白協作d) 真核細胞中包含兩種釋放因子，eRF（重命名為eRF1）和eRF3。e) eRF1具有與RF1和RF2相同的作用，eRF3與細菌RF3的作用相同

38、。 第十九章1 核糖體的主要活性位點有哪些？陳凱答：根據核糖體的位點和功能，我們可以區分出核糖體的幾種活性。30S亞基結合mRNA和起始-tRNA起始因子復合體。然后它們結合50S亞基。70S核糖體可能具有供tRNA結合的兩個功能位點：A位點和P位點。肽轉移酶的中心在50S亞基上，EF-G結合位點以及負責移位的位點都在50S大亞基上。2 （9）tRNA三葉草結構名稱及功能。（簡答）曹靖答：tRNA的二級結構為三葉草結構。其結構特征為：tRNA的二級結構由四臂、四環組成。已配對的片斷稱為臂，未配對的片斷稱為環。(1)葉柄是氨基酸臂。其上含有CCA-OH3，此結構是接受氨基酸的位置。(2)氨基酸臂

39、對面是反密碼子環。在它的中部含有三個相鄰堿基組成的反密碼子，可與mRNA上的密碼子相互識別。(3)左環是二氫尿嘧啶環(D環)，它與氨基酰-tRNA合成酶的結合有關。(4)右環是假尿嘧啶環(TC環)，它與核糖體的結合有關。(5)在反密碼子與假尿嘧啶環之間的是可變環，它的大小決定著tRNA分子大小tRNA的二級結構為三葉草結構。具五臂四環結構1.受體臂： 此臂負責攜帶特異的氨基酸。2.反密碼子臂：負責對密碼子的識別與配對。3. D臂：負責和氨基酰tRNA合成酶結合;4. TC臂：此臂負責和核糖體上的rRNA識別結合；5.額外環：其功能是在tRNA的L型三維結構中負責連接兩個區域。第二十章1. 什么

40、是Semiconservative Replication、conservative replication、dispersive replication？魏珍珍答：半保留復制(Semiconservative Replication) ，是由于每一個子代雙鏈都是由一條母鏈和一條新鏈組成，換言之，在每一個子代雙鏈中“保留”其中一條母鏈。 保留復制(conservative replication)，按這種復制機制，兩條母鏈始終在一起，然后以某種方式產生另一個由兩條全新鏈組成的子代DNA雙鏈。 彌散復制（或稱散亂復制，dispersive replication），按這種復制機制， DNA先片段

41、化，復制后，新合成的和原有的DNA共存于同一條鏈中。2. 什么是Semidiscontinuous Replication？魏珍珍答：自然界中所有復制機器的DNA合成部件（DNA 聚合酶）只能沿53一個方向合成DNA，當復制叉打開，露出一段新的DNA區域待復制時，滯后鏈沿卻沿“錯誤的”方向伸長，離開了復制叉。復制這一新暴露區域的唯一辦法是在已經復制的DNA片段后面，從復制叉處重新啟始DNA合成。這種DNA合成的啟始和再啟始一遍一遍地反復進行，所產生的DNA片段必須以某種方式連接到一起形成連續的鏈，成為DNA復制的最終產物。這樣的復制機制叫半不連續復制3. 什么是Okazaki fragment

42、s？魏珍珍DNA復制的最初產物，被稱為岡崎片段（Okazaki fragments）4. （10）什么是復制子（replicon）？真核與原核replicon的數目有何不同？原因？曹靖答：復制子：在一個復制原點控制下的DNA被稱為復制子，盡管它可能有兩個復制叉。原核生物一般來說只有一個復制起點，整個DNA都由這個起點開始的復制叉完成，所以它們的DNA是“單復制子”的。真核細胞是多個復制起點，每個起點開始各自完成一個片段最終相連完成整體復制，所以是“多復制子”的。原核生物的染色體和質粒、真核生物的細胞器DNA都是環狀雙鏈分子，它們都是單復制子，都在一個固定的起點開始復制，復制方向大多數是雙向的，

43、少數是單向復制。多數是對稱復制，少數是不對稱復制（一條鏈復制后才進行另一條鏈的復制）。原核基因組中只含有一個復制子，所以復制的單位就是分離的單位。5. 復制的方向6. 什么是解鏈酶（Helicase）有什么作用？楊春答：復制子：在一個復制原點控制下的DNA被稱為復制子，盡管它可能有兩個復制叉。原核生物一般來說只有一個復制起點，整個DNA都由這個起點開始的復制叉完成，所以它們的DNA是“單復制子”的。真核細胞是多個復制起點，每個起點開始各自完成一個片段最終相連完成整體復制，所以是“多復制子”的。原核生物的染色體和質粒、真核生物的細胞器DNA都是環狀雙鏈分子，它們都是單復制子，都在一個固定的起點開

44、始復制，復制方向大多數是雙向的，少數是單向復制。多數是對稱復制，少數是不對稱復制（一條鏈復制后才進行另一條鏈的復制）。原核基因組中只含有一個復制子，所以復制的單位就是分離的單位。7. 什么是單鏈DNA結合蛋白（SSBs）有什么作用？楊春答：在DNA復制時參與解離DNA鏈的蛋白稱為單鏈DNA結合蛋白（SSBsDNA結合蛋白SSB可增強解鏈酶活性。DnaG 和SSB單獨或兩者一起均沒有任何DNA解鏈酶活性。 單鏈DNA結合蛋白（SSBs），這些蛋白并不能象解旋酶那樣催化DNA鏈解離，而是一旦單鏈DNA形成，這些蛋白就選擇性地與之結合，包裹在單鏈DNA上使其不能退火重新形成雙螺旋。單鏈DNA結合蛋白使DNA保持單鏈狀態，還能增強同源DNA聚合酶的活性。在真核生物中并沒有發現具有相似重要性的SSB。病毒基因編碼的SSB在某些真核生物病毒DNA復制過程中發揮主要作用，包括腺病毒和皰疹病毒的DNA復制。8. 三種E.coli DNA Polymerases的功能有何差異？楊春答：Pol I修復有關的酶并非真正的 DNA復制酶