1、HPLC法測定胃力片中大黃酸、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚的含量第24卷第7期2007年7月沈陽藥科大學JournalofShenyangPharmaceuticalUniversityV01.24No.7Ju1.2007P.417文章編號:10062858(2007)07-041704HPLC法測定胃力片中大黃酸,大黃素,大黃酚和大黃素甲醚的含量張紅霞,金藝,許海燕,趙懷清(沈陽藥科大學藥學院,遼寧沈陽110016)摘要:目的建立胃力片中大黃酸,大黃素,大黃酚,大黃素甲醚的含量測定方法.方法采用HPLC法,色譜柱:DiamonsilC18(4.6mm×200mm,5m),以甲醇一體積

2、分數為0.1%的磷酸水溶液(體積比為82:18)為流動相,流速:1.0mL?min,柱溫:35,檢測波長:254nm.結果大黃酸,大黃素,大黃酚,大黃素甲醚分別在1.4212.79,2.O218.14,1.2811.52,0.768.36mg?L-1內呈良好的線性關系,相關系數分別為0.9991,0.9994,0.9990和0.9996,平均回收率分別為102.7%(RSD=1.0%,=9),101.2%(RSD=2.7%,=9),99.4%(RSD=1.6%,n=9)和97.9%(RSD=2.8%,n=9).結論本方法可作為胃力片質量控制方法之一.關鍵詞:胃力片;大黃酸;大黃素;大黃酚;大黃

3、素甲醚;高效液相色譜法中圖分類號:R917文獻標志碼:A胃力片原載于中藥部頒標準,是根據清代太和醫室秘方"膽胃通降丹"研制而成,由半夏,龍膽,枳實,大黃,木香5位藥材組成,用于飲食不節,食欲不振,大便秘結,急性胃炎膽囊炎癥狀者.處方中大黃含有蒽醌類,多糖類,鞣質類等多種生理活性物質,其中蒽醌衍生物是主要有效成分,具有破氣除脹,消積導滯,和胃利膽等藥效.但現行質量標準中未規定有效成分含量,為了更好地控制藥品質量,本文作者采用HPLC法【2測定大黃酸,大黃素,大黃酚,大黃素甲醚4種蒽醌類化合物的含量,為胃力片的質量控制提供參考依據.l儀器與試劑L10ATvP泵(日本Shimaz

4、du公司),SPD-10AVP檢測器(日本Shimazdu公司),KQ一50B型超聲儀(昆山市超聲儀器有限公司).大黃素對照品,大黃酸對照品,大黃酚對照品,大黃素甲醚對照品(中國藥品生物制品檢定所),甲醇為色譜純(天津市康科德科技有限公司),水為自制重蒸水.2方法與結果2.1色譜條件色譜柱:DiamonsilC18(200mm×4.6mm,5肚m),流動相:甲醇一體積分數為0.1%的磷酸水溶液(體積比為82:18),流速:1.0mL?min,檢測波長:254nm,柱溫:35,進樣量:20肚L.2.2對照品儲備液的制備取大黃酸,大黃素,大黃酚,大黃素甲醚對照品適量,精密稱定,用甲醇溶解

5、,配制成質量濃度分別為48,40,56,38mg?LI1的大黃酸,大黃素,大黃酚,大黃素甲醚儲備液.取對照品儲備液適量稀釋,制成質量濃度分別為7.10,6.40,10.10,4.56mg?L-1昆合對照品溶液.2.3供試品溶液的制備取胃力片,去除包衣研成細粉.稱取約0.2g細粉,精密稱定,精密加入25mL甲醇,加熱回流0.5h,放冷,過濾,濾液減壓回收溶劑至于,殘渣加15mL體積分數為8%的鹽酸溶液溶解,再加20mL氯仿,水浴回流1h,放冷,置分液漏斗中,用少量氯仿洗滌容器,并入分液漏斗中,分取氯仿層,酸液再用氯仿提取3次,每次20mI,合并氯仿液.減壓回收溶劑至于.殘渣加甲醇溶解,轉移至25

6、mL量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,濾過,取續濾液,即得.2.4陰性對照溶液的制備收稿日期:20061211作者簡介:張洪霞(1965一),女(漢族),遼寧沈陽人,碩士研究生,Emailyijj44;趙懷清(1955一),男(漢族),遼寧錦州人,教授,主要從事藥物分析學研究,Te1.02423986268,Emallzhaohq1955.418沈陽藥科大學第24卷按處方比例稱取除大黃以外的其余藥材,按制備工藝制成缺大黃的陰性樣品,按"2.3"條方法制得陰性對照溶液.在上述色譜條件下,精密吸取20L進樣,觀察樣品峰的保留時間處是否有雜質峰.測得結果表明:被測組分色譜峰處無干擾.3

7、2.5系統適用性試驗取供試品溶液,在上述色譜條件下進樣分析,大黃酸,大黃素,大黃酚,大黃素甲醚峰,與相鄰色譜峰的分離度均大于1.5.理論塔板數按大黃素計算不低于3000.陰性對照對樣品測定無干擾,色譜圖見圖I.05lOl52O253OO5lOl52O253OO5lOl52O253Of/mint/minf/minA-Standard;B-Blanksample;C-Sample;1-Rhein;2-Emodin;3-Chrysophanol;4-RheoehrysidinFig.1HPLCChronmtogrmns2.6線性關系試驗取對照品儲備液,按照不同比例稀釋,得大黃酸質量濃度分別為1.42

8、,4.26,7.10,9.94,12.79mg?L,大黃素質量濃度分別為1.28,3.84,6.40,8.96,11.52mg?L,大黃酚質量濃度分別為2.02,6.05,10.08,14.11,18.14mg?L_.,大黃素甲醚質量濃度分別為0.76,2.66,4.56,6.46,8.36mg?LI1的混合對照品溶液.分別取上述溶液各20L進樣分析,以對照品質量濃度p為橫坐標,峰面積Y為縱坐標,繪制標準曲線并進行回歸計算,回歸方程分別為:y=5.077X10'P一2.145X10'(r=0.9991);Y=4.7580.9994);Y=7.0120.9992);Y=3.322

9、0.9996).X10'P一2.080X10'(r=X10'P一4.150X10'(r=X10'P+1.452X10(r=結果表明:大黃酸,大黃素,大黃酚,大黃素甲醚質量濃度分別在1.4212.79,2.0218.14,1.28-11.52,0.76-8.36mg?LI1內呈良好的線性關系.2.7精密度試驗取同一對照品溶液,按上述色譜條件,重復進樣5次,計算大黃酸,大黃素,大黃酚,大黃素甲醚色譜峰面積的RSD分別為I.0%,0.9%,0.9%,I.6%(竹=5).2.8重復性試驗取同一批號的樣品,按"2.3"條方法平行制備5份樣品按上

10、述色譜條件進樣分析,計算大黃酸,大黃素,大黃酚,大黃素甲醚含量的RSD分別為2.3%,I.8%,2.2%,I.5%(竹=5),結果見表3.2.9穩定性試驗取同一供試品溶液,分別于0,2,4,6,8,12h注入液相色譜儀,依法測定.計算大黃酸,大黃素,大黃酚,大黃素甲醚色譜峰面積的RSD分別為I.I%,I.0%,0.9%,1.8%(竹=6).結果表明樣品溶液在12h內比較穩定,結果見表4.2.10回收率試驗取已知含量的供試品粉末9份,分別精密加入高,中,低質量濃度的對照品適量,每一質量濃度3份,按上述方法測定分析,大黃酸,大黃素,大黃酚,大黃素甲醚平均回收率分別為102.7%(RSD=1.0%,

11、竹=9),101.2%(RSD=2.7%,竹=9),99.4%(RSD=I.6%,竹=9)和97.9%第7期張紅霞等:I-IPLC法測定胃力片中大黃酸,大黃素,大黃酚和大黃素甲醚的含量4192.11含量測定按樣品溶液制備方法操作.按上述色譜條件測定,外標一點法計算大黃酸,大黃素,大黃酚,大黃素甲醚的含量.結果見表2.Table2Contentsofrhein-emodin-chrysophanolandrheochrysidininWeilitablet(,l3)3討論a.色譜條件的選擇曾用不同比例的甲醇一體積分數為0.1%的磷酸水溶液,乙腈一體積分數為0.1%的磷酸水溶液,甲醇一體積分數為0

12、.1%的冰醋酸水溶液,甲醇一乙腈一體積分數為0.1%的磷酸水溶液,甲醇一乙腈一體積分數為0.1%的冰醋酸水溶液,蘆薈大黃素峰處始終有干擾,故只測定了大黃酸,大黃素,大黃酚,大黃素甲醚4種蒽醌類組分.b.檢測波長的選擇參照<中華人民共和國藥典)2005年版大黃項下,選擇測定波長為254nm.c.提取純化方法的選擇胃力片處方中,大黃三分之二以原粉入藥,故提取純化方法參照(中華人民共和國藥典)2005年版大黃項下進行.經考察,甲醇回流提取時間在0.5,1.0,1.5h內結果無明顯差異.故提取時間為0.5h.d.試驗對胃力片中大黃酸,大黃素,大黃酚,大黃素甲醚提取純化后,采用RPHPLC

13、法進行含量測定,本法可作為胃力片質量控制方法.參考文獻:1徐翔,酈柏平,張慧芬.大黃的研究進展J.上海中醫藥雜志.2003,37(4):5659.2國家藥典委員會.中華人民共和國藥典z.北京:化學工業出版社,2005:17.3蔣曄,郝曉花,劉紅菊.非水反相液相色譜法測定三黃片中大黃酸,大黃素,大黃酚和大黃素甲醚的含量J.中草藥,2005,36(3):378380.4范國榮,張正行,安登魁.大黃藥材,浸膏及其清胃顆粒劑質量的RPHPLC分析J.中國野生植物資源,2001,20(5):4244.Determinationofrhein,emodin,chrys0phan0landrhe0chrys

14、idininWeilitabletbyHPLC420沈陽藥科大學第24卷ZHANGHongxia,JINYi,XUHaiyan,ZHAOHuaiqing(SchoolofPharmacy.ShenyangPharmaceuticalUniversity,Shenyang110016,China)Abstract:ObjectiveTodevelopflHPLCmethodfordetemfinationofrhein.odin.chrysophanolandrheoehrysidininWdlitablet(traditionalChinesemedicines).MethodsTheanal

15、ysisWaScarriedoutwithflDianonsil8(4.6mm×200mm.5tan)columnandflmobilephaseofmethaml一0.1%phosphoricacidsolution(V:V=82:18).TheflowratewaS1.0mL?min-1andcolumntemperaturewas35.Thedetectionwavelengthwassetat254nrn.RemlbThecalibrationCUlWewaslinearwithintherapgeof1.4212.79mg?L一,2.0218.14mg?L一,1.2811.

16、52mg?L一and0.768.36mg?L-1forrhein,e_rl'Kn,chrysophanolandrheochrysidin,respectively.Theaveragerecoverieswere102.7%,101.2%.99.4%and97.9%forrhein.odin,chrysophanolandrheochrysidin,respectively.Conclusion11Smethodisconvenient,accurateandreproduciblefordeterminationofrhein.em.din,chrysophanolandrheoe

17、hrysidininWdlitablet.Keywords:Weilitablet(traditionalChinesemedicines);rhein;emodin;chrysophanol;rheochrysidin;HPIC(上接第392頁)(SchoolofPharmacy,ShenyangPharmaceuticalUniversity,Shenyang110016,China)Abstract:ObjectiveToinvestigatetheentrapmentofcyclosporinAinratskinbyelectroporation.MethodsAsuspensiono

18、f0.5%()cyclosporinA.whichwaspreparedfromnormalsalinecontaining40%ethanol,wasappliedontotheratskin.ThedrugconcentrationsintheskinandreceivermediumweredeterminedbyHPLC.ResultsWithanincreaseofpulsevoltage,thedrugdepositedinthedeeperskinwasmoderateenhanced.Asthepulsetimeincreased,thedrugretainedinthedeeperskinwasslightlyaugmented.Thepulserateof3timesperminwaschosenandthehigherpermeationofthedrugintothedeeperskinwasobtained.Atthesametime,the