1、大鼠急性肝損傷中一氧化氮及自由基的變化用TAA誘發大鼠急性肝損傷，觀察肝損傷大鼠內NO與自由基的產生及其對肝損傷的影響。材料與方法一、實驗動物：Wistar大鼠，雄性，體重200300克。二、主要藥品：TAA、L-Arg、L-NNA、鱟試劑盒、ALT與AST試劑盒三、實驗方法：實驗(一) 急性肝損傷大鼠NO產生的動態觀察：大鼠24只，隨機平均分為四組，一組為正常組，其余三組為肝損傷組。肝損傷組動物皮下注射單劑量TAA600mg/kg，24小時、48小時、72小時各取動物六只，乙醚麻醉下腹主動脈采血，測定內毒素含量及NO穩定終產物硝酸鹽/亞硝酸鹽(NO3-/NO2-)含量。測定ALT、AST。取

2、肝右葉凍存于-70，兩周內制備肝組織勻漿，測定蛋白含量、脂質過氧化物岐化酶(SOD)活性，谷胱甘肽過氧化物酶(GSHPX)活性。另取肝右中葉組織，10%福爾馬林固定，石蠟包埋，6mm切片，做HE染色，觀察肝組織學變化。實驗(二) NO對大鼠急性肝損傷的影響：取大鼠32只，隨機均分為四組。A組為正常組，其余三組動物皮下注射單劑量TAA600mg/kg致急性肝損傷，同時給予B組生理鹽水，C組7.5%L-Arg300mg/kg，D組2.5%L-NNA10mg/kg。24小時后重復注射一次。于注射TAA后48小時按實驗(一)方法取血、肝組織，測定有關指標。B、C、D各組均取五張HE染色肝組織切片，觀察

3、肝組織變化。四、測定項目及方法：ALT、血漿內毒素、NO3-/NO2-(鎘還原柱層析法)。肝組織勻漿自由基測定：取肝組織克，制成10%組織勻漿，離心，取上清液，測定蛋白含量，LOP含量，SOD活性，GSHPX活性及肝組織光鏡下觀察肝組織病理變化。五、統計分析：實驗數據以s表示。用方差齊性檢驗，顯著性水平取。結 果實驗(一)急性肝損傷大鼠NO產生的內毒素轉氨酶及自由基動態觀察見表1。肝臟組織學檢查：TAA所致的肝損傷24小時、48小時逐漸加重，72小時有肝細胞再生。實驗(二)NO對大鼠急性肝損傷內毒素轉氨酶及自由基動態觀察見表2。肝臟組織學檢查顯示C組壞死面積小于B組，D組病變重于B組，表明使用

4、L-Arg可減輕肝損傷，而L-NNA可加重肝損傷。討 論體內NO生物合成是由L-Arg經NO合成酶(NOS)催化合成NO與瓜氨酸。NOS有兩種類型即結構型和誘生型。肝細胞存在誘生型，在內毒素或細胞因子刺激下可產生NO1。在肝病過程中，腸源性內毒素增加，肝臟功能受損，形成腸源性內毒素血癥，使NO的合成在612小時達高峰2，由于肝細胞數量大，其自發產生NO的量明顯高于其它細胞。NO可滅活白細胞產生的氧自由基而起到保護細胞的作用3，提示NO可通過清除自由基而起到保護肝臟的作用。本實驗表明TAA致急性肝損傷大鼠注射L-Arg、NO的合成增多，轉氨酶及肝損傷程度明顯降低；注射L-NNA組大鼠損傷程度明顯

5、加重，表明NO對TAA誘發的肝損傷有保護作用，對肝組織自由基的測定表明抑制肝損傷大鼠NO的合成，肝組織LPO含量增高而SOD、GSHPx活性降低，SOD、GSHPx協同作用可清除體內自由基4。總之，抑制NO的生物合成、自由基水平增高，從而加重了肝損傷，與文獻結論一致。作者單位：030001山西醫科大學第二醫院消化內科（習玲為研究生，現在山西醫科大學第一醫院工作）參 考 文 獻1 Billiar TR, Curran RD, Stuehr DJ, et al. Inducible cytosolic enxyme activity for the production of nitrogen o

6、xides from L-arginine in hepatocytes. Biochem Biophys Res Commun, 1990, 168: 1034-1040.2 Debra LL, Marina R, Diane EH, et al. Hepatic nitric oxide production following acute endotoxemia in rats is mediated by increased inducible nitric oxide synthase gene expression. Hepatlogy, 1995, 22: 223-234.3 R

7、ubanyi GM, Ho EH, Cantor EH, et al. Cytoprotective function of nitric oxide: inactivation of superoxide redicals produced by human leukocytes. Biochem biophys Res Commun, 1991, 181, 1392.4 Liu Ms. Activation of phospholipases A1 and A1 in heart, liver and blood during endotoxin shock. J Surgical Res

8、, 1988, 45: 472.表1四組動物內毒素轉氨酶及自由基動態變化組 別正常組24h48h72h例 數6666內毒素與NO3-/NO2-內毒素含量(Eu/ml)aababcNO3-/NO2-(mol/L)aaba轉氨酶ATL(U)aabacAST(U)abac肝組織勻漿自由基LPO(mmol/mg)aabacSOD(Eu/mg)GSHPx(Eu/mg)aababa 與正常組比P0.05, b 與24hr組比P0.05, c 與48hr組比 表2不同處理組內毒素轉氨酶及自由基動態觀察組 別A(正常組)B(TAA+N, S)C(TAA+L-Arg)D(TAA+L-NNA)例 數8888內毒素與NO3-/NO2-內毒素含量(Eu/ml)aaaNO3-/NO2-(mol/L)aababc轉氨酶ATL(U)aabacAST(U)aabac