1、微生物限度檢測方法驗證試驗報告目的：確認供試品的抑菌活性及測定方法的可靠性。2、 內容：細菌、霉菌及酵母菌數測定(即：對五株陽性對照實菌株的回收逐一進行驗證)。3、 菌種：枯草芽抱桿菌【CMCCB) 63501】、金黃色葡萄球菌【CMCCB) 26003】、大腸埃希菌【CMC C F) 44102】、白色念珠菌【CMCC F) 98001】、 黑曲霉菌【CMCCF) 98003】。4、 方法： 常規法()；培養基稀釋法()；薄膜法()；綜合法()。依據中國藥典 2005年版二部微生物限度檢查方法驗證實驗。五、方法驗證：細菌、霉菌及酵母菌數測定，進行三次獨立實驗，每次平行實驗回收率為 70刈上。

2、六、實 驗：(1)菌液 組 測定所加的試驗菌數。(2)供試品對照組取1m供試液注入平皿中，立即傾入營養瓊脂培養基，做兩個平板，按平板菌落計數方法測定其菌落數。(3)試驗 組平皿法計數，取供試品10g (ml),加入PH7.0無菌氯化鈉-蛋白月東緩沖液至100ml (1:10),作為供試液。取1ml供試液、1ml試驗菌液(50100cfu/ml )分別注入平皿中，立即傾入營養瓊脂培養基，每株菌做兩個平板，按平板菌落計數方法 測定其菌落數。(4)稀釋劑對照組試驗時，可用相應的稀釋劑替代供試品，加入1ml試驗菌(50100cfu/ml ),立即傾入營養瓊脂培養基，每株菌做兩個平板，按平板菌落計數方法

3、測定其菌落數。七、結 論：通過方法學驗證實驗證明， 采用常規法()；培養基稀釋法()；薄膜法()；綜合法()，對5株陽性代表菌株回收率均為70%±o該方法適用于 微生物限度檢查試驗人:復核人：試驗記錄（1）批號：驗證日期：試驗組及 接種量（1）菌（菌液液1ml / 皿）組（2）供試品（稀釋 劑）對照組（1ml / 皿）（3）試 驗【供試液（稀釋劑）組1ml 十菌液1ml /皿】驗證菌 及稀釋 倍數大腸埃何困io-金黃色 葡萄球 菌io-枯草芽 抱桿菌10-白色念珠菌10-黑曲霉菌10-細菌霉 菌大腸埃何困10-金黃色 葡萄球 菌10-枯草芽 抱桿菌10-白色念珠菌10-黑曲霉菌10-

4、培養時 間及溫 度C小時C小時C小時C小時C小時C小時C小時C小時C小時C小時C小時C小時菌落數A、試驗組回收率：（3）B、稀釋劑對照組回收率：(2)】+ ( 1) X 100%(3) + ( 1) X 100%ABABABABAB批號:驗證日期:試 驗記 錄（1）年 月 日試驗組及 接種量（1）菌（菌液液1ml / 皿）組（2）供試品（稀釋 劑）對照組（1ml / 皿）（3）試 驗【供試液（稀釋劑）組1ml 十菌液1ml /皿】驗證菌 及稀釋 倍數大腸埃何困io-金黃色 葡萄球 菌io-枯草芽 抱桿菌10-白色念珠菌10-黑曲霉菌10-細菌霉 菌大腸埃何困10-金黃色 葡萄球 菌10-枯草芽

5、 抱桿菌10-白色念珠菌10-黑曲霉菌10-培養時 間及溫 度C小時C小時C小時C小時C小時C小時C小時C小時C小時C小時C小時C小時菌落數（供）（稀）（供）（稀）A、試驗組回收率：（3）B、稀釋劑對照組回收率：(2)】+ ( 1) X 100%(3) + ( 1) X 100%ABABABABAB試 驗 記 錄生批號:驗證日期：年 月日試驗組及 接種量（1）菌（菌液液1ml / 皿）組（2）供試品（稀釋 劑）對照組（1ml / 皿）（3）試 驗【供試液（稀釋劑）組1ml 十菌液1ml /皿】驗證菌 及稀釋 倍數大腸埃何困io-金黃色 葡萄球 菌io-枯草芽 抱桿菌10-白色念珠菌10-黑曲霉

6、菌10-細菌霉 菌大腸埃何困10-金黃色 葡萄球 菌10-枯草芽 抱桿菌10-白色念珠菌10-黑曲霉菌10-培養時 間及溫 度C小時C小時C小時C小時C小時C小時C小時C小時C小時C小時C小時C小時菌落數（供）（稀）（供）（稀）A、試驗組回收率：（3）B、稀釋劑對照組回收率：(2)】+ ( 1) X 100%(3) + ( 1) X 100%ABABABABAB實驗記錄 （3）試驗組及接種量（1）菌（菌液液1ml / 皿）組（2）供試品（稀釋 劑）對照組（1ml / 皿）（3）試 驗【供試液（稀釋劑）組1ml 十菌液1ml /皿】驗證菌 及稀釋 倍數大腸埃何困10-金黃色 葡萄球 菌10-枯草芽 抱桿菌10-白色念珠菌10-黑曲霉菌10-細菌霉 菌大腸埃何困10-金黃色 葡萄球 菌10-枯草芽 抱桿菌10-白色念珠菌10-黑曲霉菌10-培養時 間及溫 度C小時C小時C小時C小時C小時C小時C小時C小時C小時C小時C小時C小時菌落數（供）（稀）（供）（稀）A、試驗組回收率：（3）B、稀釋劑對照組回收率：(2)】+ ( 1) X 100%