1、中國藥典每五年修訂一次， 2020 版中國藥典是第十一版藥典，現在已經發布并將于 2020 年 12 月 1 日正式實施。針對 2020 版中國藥典的更新，作為醫療器械企業關注 的純化水、無菌檢查和微生物計數，我們對比了 2015 版和 2020 版中國藥典中關于純化 水、無菌檢查和微生物計數的項目供大家參考。1. 2015 版和 2020 版中國藥典中純化水、注射用水、滅菌注射用水的對比2015 版和 2020 版中國藥典 中對于純化水、 注射用水、 滅菌注射用水的要求沒有變化， 企業可根據原有的質量管理體系文件規定繼續執行。2.2015 版和 2020 版中國藥典中無菌檢查和微生物計數法的

2、對比.2015 版和 2020 版中國藥典 中對于無菌檢查和微生物計數法的主要變化詳見后文附表， 對于此次的變化我們將其分為： 【一般變更】 （企業需根據變化修改內部的檢驗文件）和 【重 要變更】 （企業除了需根據變化修改內部的檢驗文件外，需更多的關注實際操作的變化），具 體內容如下：a. “醫療器具”改為“醫療器械”： 中國藥典對于醫療器械的適用性；【一般變更】 “監控”改為“監測”： 除了對潔凈環境進行日常監測外，無菌檢查時還應對潔凈工作臺的 沉降菌進行監測；【一般變更】b. 制備好的培養基“密閉容器”保存改為“無菌密閉容器”，保存時間由“一般可在一年內使用” 改為“經驗證的保存期內使用”

3、：企業可根據保存需要對制備好的培養基的保存期進行驗證，經驗 證后方能按驗證的保存期對制備好的培養基進行保存使用；【重要變更】c. “ 1/5 ”改為“ 1/3 ”：在供試品接種前，需檢查硫乙醇酸鹽流體培養基氧化層的高度，確保氧化 層的高度不得超過培養基深度的 1/3 ；【重要變更】d. 新增“馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基”：用于黑曲霉的培養；【重要變更】e. 增加“和確認”：采購的菌種應采用適宜的菌種保藏技術進行保存，定期轉種傳代，并對其純 度、特性等進行確認，以保證試其生物學特性；【重要變更】f. 白色念珠菌的新鮮培養物培養時間 “24? 48小時”改為“ 2? 3 天”：增加培養時間更利于白色

4、念珠菌的生長，獲取所需的菌種新鮮培養物；【重要變更】“每 1ml 含菌數小于 100cfu （菌落形成單位）的菌懸液”改為“適宜濃度菌懸液”：企業可根據 實際菌懸液的濃度進行操作， 不再強制要求 1ml 菌懸液的含菌數小于 100cfu ；【一般變更】 “20? 25培養5? 7天”改為“ 20? 25培養5? 7天或直到獲得豐富的孢子”；“ 3? 5ml”改 為“適量”： 不再強制要求黑曲霉洗脫液的容量和增加培養時間都為了確保最終能獲取足夠的黑曲 霉孢子 ；【重要變更】“ 0.9%無菌氯化鈉溶液”改為“含 0.05% (ml/ml) 聚山梨酯 80的 0.9%無菌氯化鈉溶液”：更利于 黑曲霉

5、孢子的洗脫；【重要變更】“每 1ml 含孢子數小于 100cfu 的孢子懸液”改為“適宜濃度的孢子懸液”：企業可根據實際孢子 懸液的濃度進行操作， 不再強制要求 1ml 孢子懸液的含孢子數小于 100cfu ；【一般變更】g. “每管裝量為 12ml”“每管裝量為 9ml”改為“適宜裝量”： 不再強制要求培養基的每管裝 量；【一般變更】“小于 100cfu ”改為“不大于 100cfu ”：不再強制要求接種的菌種數量小于 100cfu ；【一般變更】培養時間 “3天”“5 天”改為“接種細菌的培養管培養時間不超過3天，接種真菌的培養管培養時間不得超過 5 天”：企業可根據實際細菌和真菌的生長情

6、況選擇培養 時間；【重要變更】h. “濾清”改為“必要時濾過使澄清”：企業可根據需求選擇是否需要濾過澄清；【一般變更】i. “小于 100cfu ”改為“不大于 100cfu ”：不再強制要求加入的試驗菌數量小于 100cfu ；【一 般變更】j. “加硫乙醇酸鹽流體培養基或胰酪大豆胨液體培養基至濾筒內”改為“加培養基至濾筒內，接 種金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、生孢梭菌的濾筒內加硫乙醇酸鹽流體培養基；接種枯草芽孢桿 菌、白色念珠菌、黑曲霉的濾筒內加胰酪大豆胨液體培養基”：明確接種不同菌種對應的培養基， 更利于企業實際操作；【一般變更】k. “培養 72小時”改為“培養不超過 5 天”：增加陽性

7、對照菌的培養時間，確保某些生長較慢陽 性菌的生長，更利于陽性對照結果的判斷；【重要變更】 l. “消毒液”改為“方法”：不再強制要 求用消毒液對供試品容器表面進行消毒，企業可選擇適用于實際的消毒方法對供試品容器表面進行 消毒；【一般變更】m.增加“若使用其他尺寸的濾膜，應對稀釋液和沖洗液體積進行調整，并重新驗證”：企業可選 擇其他尺寸的濾膜，但需對稀釋液和沖洗液體積進行調整，并重新進行方法驗證；【一般變更】 “總沖洗量不得超過 1000ml”改為“總沖洗量一般不超過 500ml，最高不得超過 1000ml”：減 少了每張濾膜的總沖洗量，但也考慮到產品的差異性，給定了最高沖洗量的限定；【重要變更

8、】n.“溫度不得超過 44°C”改為“加熱溫度一般不超過 40，最高不得超過 44”：降低了溶于 十四烷酸異丙酯的膏劑和黏性油劑供試品的加熱溫度，但也給定了最高加熱溫度的限定；【一般變 更】增加“或其他適宜的滅菌方法”：除了薄膜過濾法過濾除菌，企業可選擇其他滅菌方法制備十四 烷酸異丙酯；【一般變更】o.增加“采用專用設備將供試品轉移至封閉式薄膜過濾器中”、“迅速消毒供試品開啟部位或閥 門，正置容器，用無菌鋼錐或針樣設備以無菌操作迅速在與容器閥門結構相匹配的適宜位置鉆一小 孔，鉆孔后應無明顯拋射劑拋出，輕輕轉動容器，使拋射劑緩緩釋出”和“必要時用沖洗液沖洗容 器內壁”：增加具體的操作細

9、節，更利于企業實際操作；【一般變更】p.“同時應采用適宜的方法進行包裝中所配帶的無菌針頭的無菌檢查”改為“同時應采用適宜的方 法對包裝中所配帶的針頭等要求無菌的部件進行無菌檢查”：增加了供試品中其他的無菌部件的無 菌檢查要求；【一般變更】q.“同時應采用直接接種法進行包裝中所配帶的針頭的無菌檢査”改為“同時應采用適宜的方法對 包裝中所配帶的針頭等要求無菌的部件進行無菌檢查”：增加了供試品中其他的無菌部件的無菌檢 查要求，不再強制要求用直接接種法進行無菌部件的無菌檢查；【一般變更】r.“培養 14天”改為“培養不少于 14天” “培養 3天”改為“將原始培養物和新接種的培養基 繼續培養不少于 4

10、 天”：根據藥典要求，如在加入供試品后或在培養過程中，培養基出現渾濁，培 養 14 天后，不能從外觀上判斷有無微生物生長，可取該培養液不少于 1ml 轉種至同種新鮮培養基 中，將原始培養物和新接種的培養基繼續培養不少于 4 天，因此原始培養物的培養改為不少于 14天 更合適；【重要變更】 “逐日觀察”改為“定期觀察”：不再強制要求逐日觀察，企業可根據實際需求確定觀察周期； 【一般變更】s.刪除“陽性對照管應生長良好，陰性對照管不得有菌生長。否則，試驗無效”，增加“在陰性對 照中觀察到微生物生長”：刪除陽性對照管的生長情況，將“在陰性對照中觀察到微生物生長”增 加在試驗無效的判定條件內?！疽话阕?/p>

11、更】附表： 2015版和 2020版中國藥典中對于無菌檢查和微生物計數法的主要變化由于內容較多，以下只顯示有變化的項目）? 無菌檢查項目2015 版中國藥典2020 版中國藥典對比說明/無菌檢查法系用于檢査藥典要求無菌的藥品、無菌檢查法系用于檢査藥典要求無菌1. “醫療器生物制品、 醫療器具 、原料、輔料及其他品種是否無的的藥品、生物制品、 醫療器械 、原料、輔料及具”改為一種方法。若供試品符合無菌檢查法的規定，僅表明了其他品種是否無的一種方法。若供試品符合無“醫療器供試品在該檢驗條件下未發現微生物污染。菌檢查法的規定，僅表明了供試品在該檢驗條械”；無菌檢查應在無菌條件下進行，試驗環境必須件下

12、未發現微生物污染。2. “環達到無菌檢査的要求，檢驗全過程應嚴格遵守無菌操無菌檢查應在無菌條件下進行，試境”改為作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影響供試品驗環境必須達到無菌檢査的要求，檢驗全過程“受控環中微生物的檢出。 單向流空氣區 、工作臺面及 環境 應定應嚴格遵守無菌操作，防止微生物污染，防止境”；期按醫藥工業潔凈室（區）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌污染的措施不得影響供試品中微生物的檢出。3. “監的測試方法的現行國家標準進行潔凈度確認。隔離系統單向流空氣區域 、工作臺面及 受控環境 應定期控”改為應定期按相關的要求進行驗證，其內部環境的潔凈度須按醫藥工業潔凈室（區）懸浮粒子、浮游菌和“

13、監測”。符合無菌檢查的要求。日常檢驗還需對試驗環境進行監沉降菌的測試方法的現行國家標準進行潔凈度控。確認。隔離系統應定期按相關的要求進行驗證，其內部環境的潔凈度須符合無菌檢查的要求。日常檢驗還需對試驗環境進行監 測 。培養培養基可按以下處方制備，亦可使用按培養基可按以下處方制備，1. “成品培基的該處方生產的符合規定的脫水培養基或 成品培養基 。配亦可使用按該處方生產的符合規定的脫水培養養基”改為制備制后應采用驗證合格的滅菌程序滅菌。 制備好的培養基基或 商品化的預制培養基 。配制后應采用驗證“商品化的及培養條件應保存在 2? 25° C、避光的環境，若保存于非密閉容器 中，一般在

14、3 周內使用；若保存于密閉容器中，一般可 在一年內使用。合格的滅菌程序滅菌。 制備好的培養基若不及 時使用，應置于無菌密閉容器中，在 2? 25° C、避光的環境下保存，并在經驗證的保存期 內使用。預制培養 基”；2. 制備好 的培養基刪 除非密閉容 器的保存條 件；3. 制備好 的培養基 “密閉容 器”保存改 為“無菌密 閉容器”， 保存時間由 “一般可在 一年內使用”改為“經驗證的 保存期內使 用”。硫乙 酵酸 鹽流 體培 養基氯化 胰酪 增加葡萄糖 胨 15.0g 氯 選項 化鈉 2.5g酵母浸出粉 5.0g新配制的 0.1%刃天青溶 1.0ml葡萄糖 / 無水葡萄糖 5.5g

15、/ 5.0gL- 胱氨酸 0.5g 瓊胰酪胨 15.0g鈉 2.5g酵母浸出粉 5.0g新配制的 0.1%刃天青溶液 1.0ml無水葡萄糖 5.0gL- 胱氨酸 0.5g 瓊脂 0.75g 硫乙醇酸鈉 0.5g 水 1000ml（ 或硫乙醇酸）（ 0.3ml ）除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分混合， 微溫溶解，調節 pH 為弱堿性，煮沸，濾清，加入葡萄糖 和刃天青溶液，搖勻，調節 pH , 使滅菌后在 25的 pH 值為 7.1 ±0.2 。分裝至適宜的容器中，其裝量與容器高 度的比例應符合培養結束后培養基氧化層（粉紅色 ） 不超 過培養基深度的 1/2 。滅菌。在供試品接種前，培

16、 養基氧 化層的高度不得超過培養基深度的 1/5 ，否則，須經 100水浴加熱至粉紅色消失（不超過20 分鐘），迅速冷卻，只限加熱一次，并防止被污染。脂 0.75g硫乙醇酸鈉 0.5g水1000ml（ 或硫乙醇酸）（ 0.3ml ） 除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成“ 1/5 ”改分混合，微溫溶解，調節 pH為弱堿性，煮為“1/3 ”沸，濾清，加入葡萄糖和刃天青溶液，搖勻， 調節 pH , 使滅菌后在 25的 pH值為 7.1 ± 0.2 。分裝至適宜的容器中，其裝量與容器高 度的比例應符合培養結束后培養基氧化層（粉 紅色）不超過培養基深度的 1/2 。滅菌。在供 試品接種前，培養基

17、氧化層的高度不得超過培 養基深度的 1/3 ，否則，須經 100水浴加熱 至粉紅色消失（不超過 20 分鐘），迅速冷除另有規定外，硫乙醇酸鹽流體培養基置 30? 35培養。卻，只限加熱一次，并防止被污染。除另有規定外，硫乙醇酸鹽流體培養基置 30? 35培養。中和 或滅 活用 培養 基按上述硫乙醇酸鹽流體培養基或胰酪大豆胨液 體培養基的處方及制法，在培養基滅菌或使用前加入適 宜的中和劑、滅活劑或表面活性劑，其用量同方法適用 性試驗。按上述硫乙醇酸鹽流體培養基或胰酪 大豆胨液體培養基的處方及制法，在培養基滅 菌前 或使用前加入適宜的中和劑、滅活劑或表 面活性劑，其用量同方法適用性試驗?！皽缇备?/p>

18、 為“滅菌 前”馬鈴 薯葡 萄糖 瓊脂 培養 基/新增“馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基”培養基的適用無菌性檢查：每批培養基隨機取不少于 5 支（ 瓶），置各 培養基規定的溫度培養 14 天，應無菌生長。無菌性檢查：每批培養基 一般 隨機取不少于 5 支 （ 瓶），置各培養基規定的溫度培養 14 天，應 無菌生長。增加“一般”性檢 靈敏度檢査 - 菌種：靈敏度檢査 - 菌種：增加“和確認”培養基靈敏度檢查所用的菌株傳代次數不得超過 5 代（從菌種保存中心獲得的干燥菌種為第 0 代）， 并采用適宜的菌種保藏技術進行保存，以保證試驗菌株 的生物學特性。培養基靈敏度檢查所用的菌株傳代 次數不得超過 5 代（從

19、菌種保存中心獲得的干 燥菌種為第 0 代），并采用適宜的菌種保藏技 術進行保存 和確認 ，以保證試驗菌株的生物學 特性。加入 3? 5ml 含 0.05%1. 白色念珠 菌的新鮮培 養物培養時 間“ 24? 48 小時”改為 “ 2? 3 天”；2. “每 1ml 含菌數 小于 100cfu （菌 落形成單 位）的菌懸 液”改為靈敏度檢査 - 菌液制備： 接種金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽 孢桿菌的新鮮培養物至胰酪大豆胨液體培養基中或胰酪 大豆胨瓊脂培養基上，接種生孢梭菌的新鮮培養物至硫 乙醇酸鹽流體培養基中， 30? 35°C 培養 18? 24 小時； 接種白色念珠菌的新鮮

20、培養物至沙氏葡萄糖液體培養基 中或沙氏葡萄糖瓊脂培養基上， 20? 25°C 培養 24? 48 小時 ，上述培養物用 pH7.0 無菌氯化鈉 - 蛋白胨緩沖液或 0.9%無菌氯化鈉溶液制成 每 1ml 含菌數小于 100cfu （菌 落形成單位）的菌懸液 。接種黑曲霉的新鮮培養物至 沙 氏葡萄糖瓊脂斜面培 養基 上， 20? 25培養 5? 7 天 ，(ml/ml) 聚山梨酯 80 的 pH7.0 無菌氯化鈉 - 蛋白胨緩沖液或 0.9%無菌氯化鈉溶液 ，將孢子靈敏度檢査 - 菌液制備： 接種金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞 菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養物至胰酪大豆胨 液體培養基中或胰酪大

21、豆胨瓊脂培養基上，接 種生孢梭菌的新鮮培養物至硫乙醇酸鹽流體培 養基中， 30? 35°C 培養 18? 24 小時；接種 白色念珠菌的新鮮培養物至沙氏葡萄糖液體培 養基中或沙氏葡萄糖瓊脂培養基上， 20? 25 C培養 2? 3 天 ，上述培養物用 pH7.0 無菌氯 化鈉 - 蛋白胨緩沖液或 0.9%無菌氯化鈉溶液制 成適宜濃度菌懸液 。接種黑曲霉的新鮮培養物 至沙氏葡萄糖瓊脂斜面培養基或馬鈴薯葡萄糖 瓊脂培養基 上 ，20? 25培養 5? 7 天或直洗脫。然后，采用適宜的方法吸出孢子懸液至無菌試管 內，用含 0.05% (ml/ml) 聚山梨醋 80 的 pH7.0 無菌氯化

22、 鈉 - 蛋白胨緩沖液或 0.9%無菌氯化鈉溶液 制成 每 1ml 含孢 子數小于 100cfu 的孢子懸液 。菌懸液若在室溫下放置，應在 2 小時內使用； 若保存在 2? 8°C可在 24 小時內使用。黑曲霉孢子懸液 可保存在 2? 8° C，在驗證過的貯存期內使用。到獲得豐富的孢子 ，加入 適量 含0.05% (ml/ml) 聚山梨酯 80 的 pH7.0 無菌氯 化鈉 - 蛋白胨緩沖液或 含 0.05% (ml/ml) 聚山 梨酯 80 的 0.9%無菌氯化鈉溶液 ，將孢子洗 脫。然后，采用適宜的方法吸出孢子懸液至無 菌試管內，用含 0.05% (ml/ml) 聚山梨

23、醋 80 的 pH7.0 無菌氯化鈉 - 蛋白胨緩沖液或 含 0.05% (ml/ml) 聚山梨酯 80 的 0.9%無菌氯 化鈉溶液 制成 適宜濃度的孢子懸液 。菌懸液若在室溫下放置， 一般 應在 2 小時內使用；若保存在 2? 8°C可在 24 小 時內使用。黑曲霉孢子懸液可保存在2? 8°C，在驗證過的貯存期內使用。適宜濃度菌懸液”；3. “沙氏葡萄糖瓊脂斜面培養基”改為沙氏葡萄糖瓊脂斜面培養基或馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基”；4. “25培養 5? 7 天”改為“ 20? 25培養 5 ? 7 天或 直到獲得豐 富的孢子”；5. “ 3?5ml ”改為6. “ 0.9%

24、無菌氯化鈉 溶液”改為 “含 0.05% (ml/ml) 聚 山梨酯 80 的 0.9% 無 菌氯化鈉溶 液”；7. “每 1ml 含孢子 數小于 100cfu 的 孢子懸液” 改為“適宜 濃度的孢子 懸液”；8. “應在培養 5 100cfu 的枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲 霉各 2 支，另 1 支不接種作為空白對照。 接種 細菌的培養管培養時間不超過 3 天，接種真菌 的培養管培養時間不得超過 5 天。2 小時內 使用”改為 “一般應在2 小時內 使用”。1. “每管裝 量為 12ml”“每 管裝量為 9ml ”改為 “適宜裝 量”；2. “小于 100cfu ”改 為“不大于 100

25、cfu ”；3. 培養時 間“ 3 天” “ 5 天”改 為“接種細培養基接種：取 每管裝量為 12ml 的硫乙醇酸鹽流體培養基 支，分別接種 小于 100cfu 的金黃色葡萄球菌、銅綠假單 胞菌、生孢梭菌各 2 支，另 1 支不接種作為空白對照， 培養 3天；取每管裝量為 9ml 的胰酪大豆胨液體培養基 支，分別接種 小于 l00cfu 的枯草芽孢桿菌、白色念珠 菌、黑曲霉各 2 支，另 1 支不接種作為空白對照， 天。逐日觀察結果。培養基接種：7取 適宜裝量 的硫乙醇酸鹽流體培養基 7 支，分別接種 不大于 100cfu 的金黃色葡 萄球菌、銅綠假單胞菌、生孢梭菌各 2 支，另7 1 支不

26、接種作為空白對照；取 適宜裝量 的胰酪 大豆胨液體培養基 7 支，分別接種 不大于菌的培養管 培養時間不 超過 3 天， 接種真菌的 培養管培養 時間不得超 過 5 天”；4. 刪除 “逐日觀察稀釋稀釋液、沖洗液配制后應采用驗證合格的滅菌程序滅稀釋液、沖洗液配制后應采用驗證合格的滅菌1. “濾清”液、菌。程序滅菌。改為“必要沖洗1.0.1% 無菌蛋白胨水溶液1.0.1% 無菌蛋白胨水溶液時濾過使澄液及取蛋白胨 1.0g ，加水 1000ml ，微溫溶解， 濾取蛋白胨 1.0g ，加水 1000ml ，微溫清”；其制清，調節 pH值至 7.1 ±0.2 ，分裝，滅菌。溶解， 必要時濾過

27、使澄清， 調節 pH 值至 7.12. 刪除備方2.pH7.0 無菌氯化鈉 - 蛋白胨緩沖液±0.2 ，分裝，滅菌。“過”法取磷酸二氫鉀 3.56g ，無水磷酸氫二鈉2.pH7.0 無菌氯化鈉 - 蛋白胨緩沖液“的”5.77g ，氯化鈉 4.30g ，蛋白胨 1.00g ，加水 1000ml ，微取磷酸二氫鉀 3.56g ，無水磷酸氫溫溶解， 濾清 ，分裝，滅菌。二鈉 5.77g ，氯化鈉 4.30g ，蛋白胨 1.00g ，根據供試品的特性，可選用其他經驗證 過 的適加水 1000ml ，微溫溶解， 必要時濾過使澄宜的 溶液作為稀釋液、沖洗液（如 0.9%無菌氯化鈉溶清， 分裝，滅

28、菌。液）。根據供試品的特性，可選用其他經如需要，可在上述稀釋液或沖洗液的滅菌前或滅菌后加入表面活性劑或中和劑等。驗證的適宜溶液作為稀釋液 或 沖洗液（如0.9%無菌氯化鈉溶液）。如需要，可在上述稀釋液或沖洗液 的滅菌前或滅菌后加入表面活性劑或中和劑 等。方法薄膜過濾法：薄膜過濾法：1. “小于適用取每種培養基規定接種的供試品總量 按 薄膜過按供試品的無菌檢查要求， 取每種100cfu ”改性試濾法過濾，沖洗，在最后一次的沖洗液中加入 小于培養基規定接種的供試品總量， 采用 薄膜過濾為“不大于驗100cfu 的試驗菌，過濾。 加硫乙醇酸鹽流體培養基或胰法過濾，沖洗，在最后一次的沖洗液中加入 不1

29、00酪大豆胨液體培養基至濾筒內 。另取一裝有同體積培養大于 100cfu 的試驗菌，過濾。 加培養基至濾cfu ”；基的容器，加入等量試驗菌，作為對照。置規定溫度培筒內，接種金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、生2. 增加養，培養時間不得超過 5 天， 各試驗菌同法操作 。孢梭菌的濾筒內加硫乙醇酸鹽流體培養基；接“按供試品種枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉的濾筒的無菌檢查內加胰酪大豆胨液體培養基 。另取一裝有同體要求”；積培養基的容器，加入等量試驗菌，作為對3. “加硫照。置規定溫度培養，培養時間不得超過 5乙醇酸鹽流天。體培養基或胰酪大豆胨液體培養基至濾筒內”改為“加培 養基至濾筒 內，接種金 黃色

30、葡萄球 菌、大腸埃 希菌、生孢 梭菌的濾筒 內加硫乙醇 酸鹽流體培 養基；接種 枯草芽孢桿 菌、白色念 珠菌、黑曲 霉的濾筒內 加胰酪大豆 胨液體培養 基”；4. 刪除 “各試驗菌 同法操 作”。直接接種法：直接接種法：取符合直接接種法培養基用量要求的硫乙醇酸取符合直接接種法培養基用量要求鹽流體培養基 6 管，分別接入 小于 100cfu 的金黃色葡萄的硫乙醇酸鹽流體培養基 6 管，分別接入 不大球菌、大腸埃希菌、生孢梭菌各 2 管，取符合直接接種于 100cfu 的金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、法培養基用量要求的胰酪大豆胨液體培養基6 管，分別生孢梭菌各 2 管，取符合直接接種法培養基用接入

31、小于 100cfu 的枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉量要求的胰酪大豆胨液體培養基 6 管，分別接各 2 管。其中 1 管接入每支培養基規定的供試品接種入 不大于 100cfu 的枯草芽孢桿菌、白色念珠量，另 1 管作為對照，置規定的溫度培養，培養時間不菌、黑曲霉各 2 管。其中 1 管按供試品的無菌得超過 5 天。檢查要求 ，接入每支培養基規定的供試品接種1. “小于 100cfu ”改 為“不大于 100 cfu ”；2. 增加 “按供試品 的無菌檢查 要求”。量，另 1 管作為對照，置規定的溫度培養，培養時間不得超過 5 天。供試品的無菌 檢查檢驗量：檢驗量：是指供試品每個最小包裝接種至

32、每份培養基的是指供試品每個最小包裝接種至每最小量（ g或 ml ）。除另有規定外，供試品檢驗量按表規定。若每支 （ 瓶） 供試品的裝量按規定足夠接種兩種培養基，則應分別接種硫乙醇酸鹽流體培養基和胰酪大豆胨液體培養基。采用薄膜過濾法時，只要供試品特性允許， 應將所有容器內的全部內容物過濾份培養基的最小量。除另有規定外，供試品檢驗量按表 3 規定。若每支 （ 瓶） 供試品的裝量按規定足夠接種兩種培養基，則應分別接種硫乙醇酸鹽流體培養基和胰酪大豆胨液體培養基。采用薄膜過濾法時，只要供試品特性允許，將所有容器內的內容物全部過濾1.刪除“ g 或 ml ”；2. “應將 所有容器內 的全部內容 物過濾”

33、改 為“應將所 有容器內的 內容物全部 過濾”陽性對照：應根據供試品特性選擇陽性對照 菌：無抑菌作用及抗革蘭陽性菌為主的供試 品，以金黃色葡萄球菌為對照菌；抗革蘭陰性 菌為主的供試品以大腸埃希菌為對照菌；抗厭 氧菌的供試品，以生孢梭菌為對照菌；抗真菌 的供試品，以白色念珠菌為對照菌。陽性對照 試驗的菌液制備同方法適用性試驗，加菌量 不 大于 100cfu ，供試品用量同供試品無菌檢查 時每份培養基接種的樣品量。 陽性對照管培養 不超過 5 天，應生長良好。 供試品處理及接種培養基操作時，用適宜的 方法 對供試品容器表面 進行徹底消毒，如果供試品容器內有一定的真 空度，可用適宜的無菌器材 （ 如

34、帶有除菌過濾 器的針頭）向容器內導人無菌空氣，再按無菌 操作啟開容器取出內容物。除另有規定外，按下列方法進行 供試品處理及接種培養基。1. “小于 100cfu ”改 為“不大于100cfu ”；2. “培養72 小時” 改為“培養 不超過 5 天”?！跋疽骸?改為“方 法”陽性對照：應根據供試品特性選擇陽性對照菌：無抑菌作 用及抗革蘭陽性菌為主的供試品，以金黃色葡萄球菌為 對照菌；抗革蘭陰性菌為主的供試品以大腸埃希菌為對 照菌；抗厭氧菌的供試品，以生孢梭菌為對照菌；抗真 菌的供試品，以白色念珠菌為對照菌。陽性對照試驗的 菌液制備同方法適用性試驗，加菌量 小于 100cfu ，供試 品用量同

35、供試品無菌檢查時每份培養基接種的樣品量。 陽性對照管培養 72 小時內應生長良好。供試品處理及接種培養基 操作時，用適宜的 消毒液 對供試品容器表面進行徹底 消毒，如果供試品容器內有一定的真空度，可用適宜的 無菌器材 （ 如帶有除菌過濾器的針頭）向容器內導人無菌 空氣，再按無菌操作啟開容器取出內容物。除另有規定外，按下列方法進行供試品處理 及接種培養基。1. 薄膜過濾法薄膜過濾法一般應采用封閉式薄膜過濾器。無 菌檢査用的濾膜孔徑應不大于0.45 m，直徑約為50mm。根據供試品及其溶劑的特性選擇濾膜材質。使用 時，應保證濾膜在過濾前后的完整性。水溶性供試液過濾前應先將少量的沖洗液過 濾，以潤濕

36、濾膜。油類供試品，其濾膜和過濾器在使用 前應充分干燥。為發揮濾膜的最大過濾效率，應注意保 持供試品溶液及沖洗液覆蓋整個濾膜表面。供試液經薄 膜過濾后，若需要用沖洗液沖洗濾膜，每張濾膜每次沖 洗量一般為 100ml ，且總沖洗量不得超過 1000ml ，以避 免濾膜上的微生物受損傷。1. 增加“若 使用其他尺 寸的濾膜， 應對稀釋液 和沖洗液體 積進行調 整，并重新 驗證”；2. “總沖 洗量不得超 過 1000ml”改 為“總沖洗 量一般不超 過 500ml ， 最高不得超 過 1000ml”。1. 薄膜過濾法薄膜過濾法一般應采用封閉式薄膜 過濾器。 根據供試品及其溶劑的特性選擇濾膜 材質。

37、無菌檢査用的濾膜孔徑應不大于 0.45 m。濾膜直徑約為 50mm， 若使用其他尺寸的 濾膜，應對稀釋液和沖洗液體積進行調整，并 重新驗證 。使用時，應保證濾膜在過濾前后的 完整性。水溶性供試液過濾前應先將少量的 沖洗液過濾，以潤濕濾膜。油類供試品，其濾 膜和過濾器在使用前應充分干燥。為發揮濾膜 的最大過濾效率，應注意保持供試品溶液及沖 洗液覆蓋整個濾膜表面。供試液經薄膜過濾 后，若需要用沖洗液沖洗濾膜，每張濾膜每次 沖洗量一般為 100ml ， 總沖洗量一般不超過 500ml ，最高不得超過 1000ml ，以避免濾膜上 的微生物受損傷。“水溶液供 試品”改為 “水溶性液 體供試品”水溶性液

38、體供試品 ：取規定量，直接過濾，或混合至含 不少于 100ml 適宜稀釋液的無菌容器中，混 勻，立即過濾。如供試品具有抑菌作用，須用 沖洗液沖洗濾膜，沖洗次數一般不少于三次， 所用的沖洗量、沖洗方法同方法適用性試驗。 除生物制品外，一般樣品沖洗后， 1 份濾器中 加入 100ml 硫乙醇酸鹽流體培養基， 1 份濾器 中加入 100ml 胰酪大豆胨液體培養基。生物制 品樣品沖洗后， 2 份濾器中加入 100ml 硫乙醇 酸鹽流體培養基， 1 份濾器中加入 100ml 胰酪 大豆胨液體培養基。水溶性固體和半固體供試品 ：取規定量，加適宜的稀釋液溶解或 按標簽說明復溶，然后照 水溶性液體供試品 項

39、下的方法操作。非水溶性供試品：取規定量，直接過濾；或混合溶于 適量含聚山梨酯 80 或其他適宜乳化劑的稀釋 液中，充分混合，立即過濾。用含 0.1%? 1%1. “水溶性 固體供試 品”改為 “水溶性固 體和半固體 供試品”；2. “水溶 液供試品” 改為“水溶水溶液供試品 ：取規定量，直接過濾，或混合至含不少于 100ml 適宜稀釋液的無菌容器中，混勻，立即過濾。如供 試品具有抑菌作用，須用沖洗液沖洗濾膜，沖洗次數一 般不少于三次，所用的沖洗量、沖洗方法同方法適用性 試驗。除生物制品外，一般樣品沖洗后， 1 份濾器中加 入 100ml 硫乙醇酸鹽流體培養基， 1 份濾器中加入 100ml 胰

40、酪大豆胨液體培養基。生物制品樣品沖洗后， 2 份濾 器中加入 100ml 硫乙醇酸鹽流體培養基， 1 份濾器中加入 100ml 胰酪大豆胨液體培養基。水溶性固體供試品 ： 取規定量，加適宜的稀釋液溶解或按標簽說明 復溶，然后照 水溶液供試品 項下的方法操作。非水溶性供試品： 取規定量，直接過濾；或混合溶于適量含聚山 梨酯 80 或其他適宜乳化劑的稀釋液中，充分混合，立即 過濾。用含 0.1%? 1%聚山梨酯 80 的沖洗液沖洗濾膜至少3 次。加入含或不含聚山梨酯 80 的培 養基。 接種培 養基 照 水溶液供試品 項下的方法操作。聚山梨酯 80 的沖洗液沖洗濾膜至少 3 次。加 入含或不含聚山

41、梨酯 80 的培養基。接種培養 基照 水溶性液體供試品 項下的方法操作。性液體供試品”可溶于十四烷酸異丙酯的膏劑和黏性油劑供試品： 取規定量，混合至適量的無菌十四烷酸異丙酯 中，劇烈振搖，使供試品充分溶解，如果需要可適當加 熱，但 溫度不得超過 44° C，趁熱迅速過濾。對仍然無法 過濾的供試品，于含有適量的無菌十四烷酸異丙酯中的 供試液中加入不少于 100ml 的 稀釋液 ，充分振搖萃取， 靜置，取下層水相作為供試液過濾。過濾后濾膜沖洗及 接種培養基照非水溶性制劑供試品項下的方法操作。無菌十四烷酸異丙酯的制備 采用薄膜過濾法過濾 除菌，選用孔徑為 0.22 m的適宜濾膜。濾膜， 或

42、其他適宜的滅菌方法。1. “溫度不 得超過 44°C”改 為“加熱溫 度一般不超 過 40 ， 最高不得超 過 44”；2. “稀釋 液”改為 “適宜稀釋 液”；增加“或 其他適宜的可溶于十四烷酸異丙酯的膏劑和黏性油劑供試 品：取規定量，混合至適量的無菌十四 烷酸異丙酯中，劇烈振搖，使供試品充分溶 解，如果需要可適當加熱， 加熱溫度一般不超 過 40，最高不得超過 44° C，趁熱迅速過 濾。對仍然無法過濾的供試品，于含有適量的 無菌十四烷酸異丙酯中的供試液中加入不少于 100ml 的 適宜稀釋液 ，充分振搖萃取，靜置， 取下層水相作為供試液過濾。過濾后濾膜沖洗 及接種培養

43、基照非水溶性制劑供試品項下的方 法操作。無菌十四烷酸異丙酯的制備 采用薄膜 過濾法過濾除菌，選用孔徑為 0.22 m的適宜滅菌方法”。無菌氣（噴）霧劑供試品 ：取規定量，將各容器置 -20 ° C或其他適宜溫度 冷凍約 1 小時，取出，以無菌操作迅速在容器上端鉆一 小孔，釋放拋射劑后再無菌開啟容器，并將供試品轉移 至無菌容器中混合，供試品亦可采用其他適宜的方法取 出。然后照 水溶液或非水溶性制劑供試品 項下的方法操 作。1. “無菌氣 （噴）霧劑 供試品”改 為“無菌氣 霧劑供試 品”；2. 增加 “采用專用 設備將供試 品轉移至封 閉式薄膜過 濾器中”；3. 增加 “迅速消毒無菌氣

44、霧劑供試品 ：取規定量， 采用專用設備將供試品 轉移至封閉式薄膜過濾器中 。或將各容器置 - 20° C或其他適宜溫度冷凍約 1 小時，取出， 迅速消毒供試品開啟部位或閥門，正置容器， 用無菌鋼錐或針樣設備以無菌操作迅速在與容 器閥門結構相匹配的適宜位置鉆一小孔，鉆孔 后應無明顯拋射劑拋出，輕輕轉動容器，使拋 射劑緩緩釋出， 釋放拋射劑后 再無菌開啟容 器，并將供試液轉移至無菌容器中混合， 必要 時用沖洗液沖洗容器內壁。 供試品亦可采用其 他適宜的方法取出。然后照 水溶性液體供試品 或非水溶性供試品 項下的方法操作。供試品開啟部位或閥門，正置容 器，用無菌 鋼錐或針樣 設備以無菌 操

45、作迅速在 與容器閥門 結構相匹配 的適宜位置 鉆一小孔， 鉆孔后應無 明顯拋射劑 拋出，輕輕 轉動容器， 使拋射劑緩 緩釋出”；4. 增加必要時用 沖洗液沖洗 容器內 壁”；5. “水溶 液或非水溶裝有藥物的注射器供試品： 取規定量，將注射器中的內容物（若需要可吸 入稀釋液或標簽所示的溶劑溶解）直接過濾，或混合至 含適宜稀釋液的無菌容器中，然后照 水溶液 或非水溶性 供試品項下方法操作。 同時應采用適宜的方法進行包裝 中所配帶的無菌針頭的無菌檢查 。品”改為“水溶性液 體供試品或 非水溶性供 試品”。裝有藥物的注射器供試品：1. “水溶取規定量，將注射器中的內容物液”改為（若需要可吸入稀釋液或

46、標簽所示的溶劑溶“水溶性液解）直接過濾，或混合至含適宜稀釋液的無菌體”；容器中，然后照 水溶性液體 或非水溶性供試品2. “同時項下方法操作。 同時應采用適宜的方法對包裝中所配帶的針頭等要求無菌的部件進行無菌檢應采用適宜的方法進行查。包裝中所配 帶的無菌針 頭的無菌檢 查”改為“同時應采 用適宜的方 法對包裝中 所配帶的針 頭等要求無性制劑供試菌的部件進行無菌檢 查”。具有導管的 醫療器具 （輸血、輸液袋等）供試品： 取規定量，每個最小包裝用 50? 100ml 沖洗液 分別沖洗內壁，收集沖洗液于無菌容器中，然后照 水溶 液供試品 項下方法操作。 同時應采用直接接種法進行包 裝中所配帶的針頭的

47、無菌檢査 。具有導管的 醫療器械 （輸血、輸液袋等）供試 品：除另有規定外， 取規定量，每個 最小包裝用 適量的 （通常 50? 100ml ）沖洗液 分別沖洗內壁，收集沖洗液于無菌容器中，然 后照 水溶性液體供試品 項下方法操作。 同時應 采用適宜的方法對包裝中所配帶的針頭等要求 無菌的部件進行無菌檢查 。1. “醫療器具”改為醫療器械”；2. 增加除另有規定外”；3. 增加適量的”；4. “水溶液供試品”改為“水溶性液體供試品”；5. “同時應采用直接接種法進行混懸液等非澄清 水溶液 供試品： 取規定量，等量接種至各管培養基中。固體供試品： 取規定量，直接等量接種至各管培養基中?；?加入適

48、宜的溶劑溶解，或按標簽說明復溶后，取規定量 等量接種至各管培養基中。非水溶性供試品： 取規定量，混合，加入適量的聚山梨酯 80 或 其他適宜的乳化劑及稀釋劑使其乳化，等量接種至各管混懸液等非澄清 水溶性液體 供試品：取規定量，等量接種至各管培養基 中。固體供試品：取規定量，直接等量接種至各管培 養基中。或加入適宜的溶劑溶解，或按標簽說 明復溶后，取規定量等量接種至各管培養基 中。非水溶性供試品：包裝中所配 帶的針頭的 無菌檢査” 改為“同時 應采用適宜 的方法對包 裝中所配帶 的針頭等要 求無菌的部 件進行無菌 檢查”?！八芤汗?試品”改為 “水溶性液 體供試品”培養基中?；蛑苯拥攘拷臃N至含

49、聚山梨酯 80 或其他適宜 乳化劑的各管培 養基中。敷料供試品： 取規定數量，以無菌操作拆開每個包裝，于不 同部位剪取約 100mg或 lcm ×3cm的供試品，等量接種于 各管足以浸沒供試品的適量培養基中。腸線、縫合線等供試品： 腸線、縫合線及其他一次性使用的醫用材料按 規定量取最小包裝，無菌拆開包裝，等量接種于各管足 以浸沒供試品的適量培養基中。滅菌 醫用器具 供試品： 取規定量，必要時應將其拆散或切成小碎段， 等量接種于各管足以浸沒供試品的適量培養基中。放射性藥品：取供試品 1 瓶（支），等量接種于裝量為取規定量，混合，加入適量的聚山 梨酯 80 或其他適宜的乳化劑及稀釋劑使其

50、乳 化，等量接種至各管培養基中?；蛑苯拥攘拷?種至含聚山梨酯 80 或其他適宜乳化劑的各管 培養基中。敷料供試品：1. “醫用器取規定數量，以無菌操作拆開每個具”改為包裝，于不同部位剪取約 100mg或 lcm ×3cm“醫療器的供試品，等量接種于各管足以浸沒供試品的械”；適量培養基中。2. 增加“除另有規腸線、縫合線等供試品：定外”；腸線、縫合線及其他一次性使用的醫用材料按規定量取最小包裝，無菌拆開包裝，等量接種于各管足以浸沒供試品的適量培養基中。滅菌 醫療器械 供試品：除另有規定外， 取規定量，必要時應將其拆散或切成小碎段，等量接種于各管足以浸沒供試品的適量培養基中。7.5ml

51、的硫乙醇酸鹽流體培養基和胰酪大豆胨液體培養基放射性藥品：中。每管接種量為 0.2ml取供試品 1 瓶（支），等量接種于 裝量為 7.5ml 的硫乙醇酸鹽流體培養基和胰酪 大豆胨液體培養基中。每管接種量為 0.2ml14 天”改 為“培養不 少于 14 天”；2. “逐日 觀察”改為 “定期觀 察”；3. “適 量”改為 “不少于培養及觀察： 將上述接種供試品后的培養基容器分別按各培 養基規定的溫度 培養 14 天 ；接種生物制品供試品的硫乙 醇酸鹽流體培養基的容器應分成兩等份，一份置 30? 35° C培養，一份置 20? 25培養。培養期間應 逐日觀 察并記錄是否有菌生長。如在加入

52、供試品后或在培養過 程中，培養基出現渾濁，培養 14 天后，不能從外觀上判 斷有無微生物生長，可取該培養液 適量 轉種至同種新鮮 培養基中， 培養 3 天 ，觀察接種的同種新鮮培養基是否 再出現渾濁；或取培養液涂片，染色，鏡檢，判斷是否 有菌。培養及觀察：將上述接種供試品后的培養基容器分別按各培養基規定的溫度 培養不少于 14 天；接種生物制品供試品的硫乙醇酸鹽流體培 養基的容器應分成兩等份，一份置30? 35° C培養，一份置 20? 25 培養。培養期間應 定 期觀察 并記錄是否有菌生長。如在加入供試品 后或在培養過程中，培養基出現渾濁，培養14 天后，不能從外觀上判斷有無微生物

53、生 長，可取該培養液 不少于 1ml 轉種至同種新鮮 培養基中 ， 將原始培養物和新接種的培養基繼 續培養不少于 4 天 ，觀察接種的同種新鮮培養基是否再出現渾濁；或取培養液涂片，染色，1ml”；鏡檢，判斷是否有菌。4. “培養 3 天”改為 “將原始培 養物和新接 種的培養基 繼續培養不 少于 4 天”。結果判斷：結果判斷：1. 刪除“陽陽性對照管應生長良好，陰性對照管不得有若供試品管均澄清，或雖顯渾濁但性對照管應菌生長。否則，試驗無效。經確證無菌生長，判供試品符合規定；若供試生長良好，若供試品管均澄清，或雖顯渾濁但經確證無菌品管中任何一管顯渾濁并確證有菌生長，判供陰性對照管生長，判供試品符合規定；若供試品管中任何一管顯渾試品不符合規定，除非能充分證明試驗結果無不得有菌生濁并確證有菌生長，判供試品不符合規定，除非能充分效，即生長的微生物非供試品所含。 只有符合長。否則，證明試驗結果無效，即生長的微生物非