1、常規(guī)轉(zhuǎn)染技術(shù)分為兩大類，一類是瞬時(shí)轉(zhuǎn)染，一類是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染永久轉(zhuǎn)染。前者外源DNA/RN4整合到宿主染色體中，因此一個(gè)宿主細(xì)胞中可存在多個(gè)拷貝數(shù)，產(chǎn)生高水平的表達(dá)，但通常只持續(xù)幾天，多用于啟動(dòng)子和其它調(diào)控元件的分析。一般來說，超螺旋質(zhì)粒DNA專染效率較高，在轉(zhuǎn)染后24-72小時(shí)內(nèi)依賴于各種不同的構(gòu)建分析結(jié) 果，常常用到一些報(bào)告系統(tǒng)如熒光蛋白，B 半乳糖甘酶等來幫助檢測。后者也稱穩(wěn)定 轉(zhuǎn)染，外源DN徼可以整合到宿主染色體中， 也可能作為一種游離體episome存在。 盡管線性DNAt匕超螺旋DNA專入量低但整合率高。外源 DNAS合到染色體中概率很小， 大約1/104轉(zhuǎn)染細(xì)胞能整合，通常需要通過一些

2、選擇性標(biāo)記，如來氨丙基轉(zhuǎn)移酶APH 新霉素抗性基因，潮霉素 B磷酸轉(zhuǎn)移酶HPH ,胸昔激酶TW等反復(fù)篩選，得到 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的同源細(xì)胞系。轉(zhuǎn)染技術(shù)的選擇對轉(zhuǎn)染結(jié)果影響也很大，許多轉(zhuǎn)染方法需要優(yōu)化 DNAt轉(zhuǎn)染試劑比例， 細(xì)胞數(shù)量，培養(yǎng)與檢測時(shí)間等。一些傳統(tǒng)的轉(zhuǎn)染技術(shù)，如DEAE&旋糖甘法，磷酸鈣法, 電穿孔法，脂質(zhì)體法各有利弊，其主要原理與應(yīng)用特點(diǎn)見下表：轉(zhuǎn)染方法原理應(yīng)用特點(diǎn)，一， 磷酸鈣法磷酸鈣DNAM合物吸附 細(xì)胞膜被細(xì)胞內(nèi)吞穩(wěn)定轉(zhuǎn)染 瞬時(shí)性轉(zhuǎn)染不適用于原代細(xì)胞 操作簡便但重復(fù)性差 有些細(xì)胞/、適用DEAE右旋糖日 法帶正電的DEAE糖 甘與核酸帶負(fù)電的磷酸 骨架相互作用形成的復(fù) 合物

3、被細(xì)胞內(nèi)吞瞬時(shí)性轉(zhuǎn)染相對簡便、結(jié)果可重復(fù) 但對細(xì)胞有f的毒作用 轉(zhuǎn)染時(shí)需除血清電穿孔法高脈沖電壓破壞細(xì)胞膜 電位，DNA!過膜上形成 的小孔導(dǎo)入穩(wěn)定轉(zhuǎn)染 瞬時(shí)性轉(zhuǎn)染 所有細(xì)胞適用性廣但細(xì)胞致死率高,DNAffi 細(xì)胞用量大，需根據(jù)不同細(xì)胞類 型優(yōu)化電穿孔實(shí)驗(yàn)條件病毒介導(dǎo)法通過侵染宿主細(xì)胞將外 源基因整合到染色體中穩(wěn)定轉(zhuǎn)染可用于難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞、原代細(xì)胞， 體內(nèi)細(xì)胞等逆轉(zhuǎn)錄病也特定宿主細(xì) 胞但攜帶基因不能太大細(xì)胞需處分 到宜日需考慮安全因素腺病也通過侵染宿主細(xì)胞將外 源基因整合到染色體中瞬時(shí)轉(zhuǎn)染 特定宿主細(xì) 胞可用于難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞 需考慮安全因素陽離子脂質(zhì)體、帶正電的脂質(zhì)體與核酸 帶負(fù)電的磷酸基團(tuán)形成

4、 復(fù)合物被細(xì)胞內(nèi)吞穩(wěn)定轉(zhuǎn)染 瞬時(shí)性轉(zhuǎn)染 所有細(xì)胞適用性，轉(zhuǎn)染效率高，重復(fù)性好， 但轉(zhuǎn)染時(shí)需除血清。轉(zhuǎn)染效果隨細(xì) 胞尖型變化大Biolistic 顆粒傳遞法將DNAffl顯微重金屬顆 粒沉淀，再將包被好的 顆粒用彈道裝置投射入 細(xì)胞，DNAt胞內(nèi)逐步釋 放，表達(dá)瞬時(shí)性轉(zhuǎn)染可用于：人的表皮細(xì)胞，纖維原細(xì) 胞，淋巴細(xì)胞系以與原代細(xì)胞顯微注射法用顯微操作將DNAft接注入靶細(xì)胞核穩(wěn)定轉(zhuǎn)染 瞬時(shí)性轉(zhuǎn)染轉(zhuǎn)染細(xì)胞數(shù)有限，多用于工程改造 或轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的胚胎細(xì)胞各種轉(zhuǎn)染方法的比較除上述傳統(tǒng)方法外，近年來國際上推出了一些陽離子聚合物基因轉(zhuǎn)染技術(shù)，以其適用宿主X圍廣，操作簡便，對細(xì)胞毒性小，轉(zhuǎn)染效率高受到研究者們的

5、青睞。其中 樹 枝狀聚合物Dendrimers和聚乙烯亞胺Polyethylenimine , PEI的轉(zhuǎn)染性能最佳， 但樹枝狀聚合物的結(jié)構(gòu)不易于進(jìn)一步改性，且其合成工藝復(fù)雜。聚乙烯亞胺是一種具有 較高的陽離子電荷密度的有機(jī)大分子， 每相隔二個(gè)碳個(gè)原子，即每“第三個(gè)原子都是質(zhì) 子化的氨基氮原子，使得聚合物網(wǎng)絡(luò)在任何pH下都能充當(dāng)有效的“質(zhì)子海綿(protonsponge)體。這種聚陽離子能將各種報(bào)告基因轉(zhuǎn)入各種種屬細(xì)胞，其效果好于脂質(zhì)聚酰 胺，經(jīng)進(jìn)一步的改性后，其轉(zhuǎn)染性能好于樹枝狀聚合物，而且它的細(xì)胞毒性低。大量實(shí)驗(yàn)證明，PEI是非常有希望的基因治療載體。目前在設(shè)計(jì)更復(fù)雜的基因載體時(shí)，PEI經(jīng)

6、常做為核心組成成分。線型PEILine PEI,LPEI與其衍生物用作基因轉(zhuǎn)染載體的研究比分枝狀PE I： BranchedPEI,BPEI要早一些，過去的研究認(rèn)為在不考慮具體條件，LPEI/DNA轉(zhuǎn)染復(fù)合物的細(xì)胞毒性較低，有利于細(xì)胞定位，因此與 BPEI相比應(yīng)該轉(zhuǎn)染效率高一些。但最近研究表 明BPEI的分枝度高有利于形成小的轉(zhuǎn)染復(fù)合物，從而提高轉(zhuǎn)染效率，但同時(shí)細(xì)胞毒性 也增大。超高分枝的、較柔性的PEI衍生物含有額外的仲胺基和叔胺基， 在染實(shí)驗(yàn)中發(fā) 現(xiàn)這種PEI的毒性低，但轉(zhuǎn)染效率卻較高。GenEscort是采用各種分枝狀和超高分枝狀的小分子 PEI與各種含有生理?xiàng)l件下可降解 鍵的交聯(lián)劑交聯(lián)

7、，合成出的一系列高分枝的可降解的 PEI衍生物。聚合物的分枝結(jié)構(gòu)使 得其具有較高的正電性，因此易于高效地包裹各種 DNA RN吩子與質(zhì)粒形成小的納米 顆粒，從而提高轉(zhuǎn)染效率，當(dāng)所形成復(fù)合物進(jìn)入細(xì)胞以后，其中所含的生理?xiàng)l件下可降 解的化學(xué)鍵在細(xì)胞內(nèi)水解，使交聯(lián)聚合物分解為無細(xì)胞毒性的小分子 PEI,這樣結(jié)構(gòu)的 轉(zhuǎn)染試劑在體外應(yīng)用可以獲得高的轉(zhuǎn)染效率和低的細(xì)胞毒性，其可降解性對體內(nèi)應(yīng)用也 具有重要的意義。影響轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)的因素轉(zhuǎn)染技術(shù)是指將外源分子如DNA RNA?導(dǎo)入真核細(xì)胞的技術(shù)。隨著分子生 物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)研究的不斷發(fā)展，轉(zhuǎn)染已經(jīng)成為研究和控制真核細(xì)胞基因功能 的常規(guī)工具。在研究基因功能、調(diào)控基

8、因表達(dá)、突變分析和蛋白質(zhì)生產(chǎn)等生物學(xué) 試驗(yàn)中，其應(yīng)用越來越廣泛。影響轉(zhuǎn)染效率的因素有很多，細(xì)胞株本身的特性和 活性，細(xì)胞培養(yǎng)條件，轉(zhuǎn)染的DNA£ RNA勺質(zhì)量，轉(zhuǎn)染方法，轉(zhuǎn)染試劑的選擇等。 常規(guī)轉(zhuǎn)染技術(shù)可分為兩大類，一類是瞬時(shí)轉(zhuǎn)染，一類是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染永久轉(zhuǎn)染。 前者外源DNA/RNAf整合到宿主染色體中，因此一個(gè)宿主細(xì)胞中可存在多個(gè)拷貝 數(shù)，產(chǎn)生高水平的表達(dá)，但通常只持續(xù)幾天，多用于啟動(dòng)子和其它調(diào)控元件的分 析。一般來說，超螺旋質(zhì)粒DNA專染效率較高，在轉(zhuǎn)染后24-72小時(shí)內(nèi)依賴于 各種不同的構(gòu)建分析結(jié)果，常常用到一些報(bào)告系統(tǒng)如熒光蛋白，B -半乳糖 音酶等來幫助檢測。后者也稱穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，

9、外源 DNAS可以整合到宿主染色體中， 也可能作為一種游離體episome存在。盡管線性DNAb匕超螺旋DNA專入量低 但整合率高。外源DNASE合到染色體中概率很小，大約1/104轉(zhuǎn)染細(xì)胞能整合， 通常需要通過一些選擇性標(biāo)記，如來氨丙基轉(zhuǎn)移酶 APH新霉素抗性基因， 潮霉素B磷酸轉(zhuǎn)移酶HPH ,胸昔激酶TK0等反復(fù)篩選，得到穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的同源細(xì)胞系。轉(zhuǎn)染效率受多種因素影響，主要因素有下面幾個(gè)：1.轉(zhuǎn)染試劑不同細(xì)胞系轉(zhuǎn)染效率通常不同，但細(xì)胞系的選擇通常是根據(jù)實(shí)驗(yàn)的需要，因此在 轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)前應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求和細(xì)胞特性選擇適合的轉(zhuǎn)染試劑。每種轉(zhuǎn)染試劑都會(huì) 提供一些已經(jīng)成功轉(zhuǎn)染的細(xì)胞株列表和文獻(xiàn)，通過這些資

10、料可選擇最適合實(shí)驗(yàn)設(shè) 計(jì)的轉(zhuǎn)染試劑。當(dāng)然，最適合的是高效、低毒、方便、廉價(jià)的轉(zhuǎn)染試劑。 2.細(xì) 胞狀態(tài)一般低的細(xì)胞代數(shù)50能確保基因型不變。最適合轉(zhuǎn)染的細(xì)胞是經(jīng)過幾次傳 代后達(dá)到指數(shù)生長期的細(xì)胞，細(xì)胞生長旺盛，最容易轉(zhuǎn)染。細(xì)胞培養(yǎng)在實(shí)驗(yàn)室中 保存數(shù)月和數(shù)年后會(huì)經(jīng)歷突變，總?cè)旧w重組或基因調(diào)控變化等而演化。 這會(huì)導(dǎo) 致和轉(zhuǎn)染相關(guān)的細(xì)胞行為的變化。也就是說同一種系的細(xì)胞株，在各實(shí)驗(yàn)室不同 培養(yǎng)條件下，其生物學(xué)性狀發(fā)生不同程度的改變，導(dǎo)致其轉(zhuǎn)染特性也發(fā)生變化。 因此，如果發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染效率降低，可以試著轉(zhuǎn)染新鮮培養(yǎng)的細(xì)胞以恢復(fù)最佳結(jié)果。3 .轉(zhuǎn)染方法不同轉(zhuǎn)染試劑有不同的轉(zhuǎn)染方法，但大多 XX小異。轉(zhuǎn)染時(shí)應(yīng)

11、跟據(jù)具體轉(zhuǎn)染試劑 推薦的方法，但也要注意，因不同實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的細(xì)胞性質(zhì)不同，質(zhì)粒定量差異， 操作手法上的差異等，其轉(zhuǎn)染效果可能不同，應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)室的具體條件來確定最 佳轉(zhuǎn)染條件。1細(xì)胞培養(yǎng)物健康的細(xì)胞培養(yǎng)物是成功轉(zhuǎn)染的基礎(chǔ)。不同細(xì)胞有不同的培養(yǎng)基，血清和添加物。 高的轉(zhuǎn)染效率需要一定的細(xì)胞密度， 一般的轉(zhuǎn)染試劑都會(huì)有專門的說明。 推薦在 轉(zhuǎn)染前24小時(shí)分細(xì)胞，這將提供正常細(xì)胞代謝，增加對外源 DNAfg入的可能。 一定要避免細(xì)菌，支原體或真菌的污染。2細(xì)胞密度細(xì)胞密度對轉(zhuǎn)染效率有一定的影響。 不同的轉(zhuǎn)染試劑，要求轉(zhuǎn)染時(shí)的最適細(xì)胞密 度各不相同，即使同一種試劑，也會(huì)因不同的細(xì)胞類型或應(yīng)用而異。轉(zhuǎn)染時(shí)

12、過高 或者過低的細(xì)胞密度會(huì)導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率降低，乃至表達(dá)水平偏低。因此如果選用新 的細(xì)胞系或者新的轉(zhuǎn)染試劑，最好能夠進(jìn)行優(yōu)化實(shí)驗(yàn)并為以后的實(shí)驗(yàn)建立一個(gè)穩(wěn) 定方法，包括適當(dāng)?shù)慕臃N量和培養(yǎng)時(shí)間等等。 陽離子脂質(zhì)體具有微量的細(xì)胞毒性 而往往需要更高的鋪板密度或者更多的懸浮細(xì)胞數(shù)，有的要求細(xì)胞90%匚片；而有些多胺或者非脂質(zhì)體的配方則要求在 40%-80臉問，總之是盡量在細(xì)胞最適的 生理狀態(tài)下轉(zhuǎn)染，以求最佳的轉(zhuǎn)染效果。不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊矔?huì)影響轉(zhuǎn)染時(shí)的鋪板 密度，比如研究細(xì)胞周期相關(guān)基因等表達(dá)周期長的基因，就需要較低的鋪板密度， 所以需要選擇能夠在較低鋪板密度下進(jìn)行轉(zhuǎn)染的試劑。一般轉(zhuǎn)染時(shí)貼壁細(xì)胞密度為50%-

13、90%但這個(gè)需要參考所選轉(zhuǎn)染試劑的說明書。3血清血清一度曾被認(rèn)為會(huì)降低轉(zhuǎn)染效率，老一代的轉(zhuǎn)染方法往往要求轉(zhuǎn)染前后洗細(xì)胞 或者在無血清培養(yǎng)基條件下轉(zhuǎn)染，但有些對此敏感的細(xì)胞如原代細(xì)胞會(huì)受到損 傷，甚至死亡導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率極低。不過轉(zhuǎn)染產(chǎn)品配方幾經(jīng)革新后的今天， 對于主 流的轉(zhuǎn)染試劑來說，血清的存在已經(jīng)不會(huì)影響轉(zhuǎn)染效率， 甚至還有助于提高轉(zhuǎn)染 效率，如陽離子聚合物等，血清的存在會(huì)影響 DNA-轉(zhuǎn)染復(fù)合物的形成，但只要 在DNA轉(zhuǎn)染復(fù)合物形成時(shí)用無血清培養(yǎng)基或 PBS來稀釋DNAf口轉(zhuǎn)染試劑就可以 了，在轉(zhuǎn)染過程中是可以使用血清的。不過要特別注意：對于RNA專染，如何消 除血清中潛在的RNase?虧染是

14、值得關(guān)注的。胎牛血清FCS經(jīng)常用到，便宜一 點(diǎn)的有馬或牛血清。通常的，血清是一種包含生長因子與其它輔助因子的不確切 成分的添加物，對不同細(xì)胞的生長作用有很大的差別。 血清質(zhì)量的變化直接影響 細(xì)胞生長，因此也會(huì)影響轉(zhuǎn)染效率。新加培養(yǎng)基的預(yù)熱對細(xì)胞轉(zhuǎn)染很有幫助。4抗生素細(xì)胞培養(yǎng)過程中往往會(huì)添加抗生素來防止污染，但是這些添加劑可能對轉(zhuǎn)染造成 麻煩。比如青霉素和鏈霉素，就是影響轉(zhuǎn)染的培養(yǎng)基添加物。 這些抗生素一般對 于真核細(xì)胞無毒，但有些轉(zhuǎn)染試劑增加了細(xì)胞的通透性，使抗生素可以進(jìn)入細(xì)胞。 這可能間接導(dǎo)致細(xì)胞死亡，造成轉(zhuǎn)染效率低。目前轉(zhuǎn)染試劑因?yàn)槿潭伎梢杂糜?血清和抗生素等添加劑的完全培養(yǎng)基來操作，

15、非常方便，省去了污染等麻煩。5 氮磷N/P比N/P比是轉(zhuǎn)染效率的關(guān)鍵為了換算方便，一般以 DNA轉(zhuǎn)染試劑質(zhì)量比表示， 在一定比例X圍內(nèi)轉(zhuǎn)染效率隨N/P比成比例增高，之后達(dá)到平值，但毒性也隨之 而增加，因此在實(shí)驗(yàn)之前應(yīng)根據(jù)推薦比例，確定本實(shí)驗(yàn)的最佳轉(zhuǎn)染比例。6DN頌量DN頗量對轉(zhuǎn)染效率影響非常大。一般的轉(zhuǎn)染技術(shù)如脂質(zhì)體等基于電荷吸引 原理，如果DNA純，如帶少量的鹽離子，蛋白，代謝物污染都會(huì)顯著影響轉(zhuǎn)染 復(fù)合物的有效形成與轉(zhuǎn)染的進(jìn)行，但對GenEscort系列轉(zhuǎn)染試劑影響不大。核酸 純化世界第一品牌德國QIAGEN司提供的超純質(zhì)粒抽提試劑盒，能達(dá)到兩倍 2XCsCl梯度離心以上的純度效果，使您不

16、必為 DN顏量操心。止匕外，對一些內(nèi) 毒素敏感的細(xì)胞如原代細(xì)胞，懸浮細(xì)胞和造血細(xì)胞，QIAGEN3S提供可去除內(nèi)毒素污染的質(zhì)粒抽提試劑盒，在質(zhì)粒抽提過程中有效去除脂多糖分子， 保證理 想的轉(zhuǎn)染效果。但如果使用GenEscort轉(zhuǎn)染試劑，一般不需要這么高的DN顏量 要求。當(dāng)使用GenEscort轉(zhuǎn)染試劑時(shí)，即使采用傳統(tǒng)的酚一氯仿沉淀方法純化質(zhì) 粒，仍然可達(dá)到非常好的轉(zhuǎn)染效果，但所用的質(zhì)粒量比試劑盒純化方法的DNA用量大一些。4 .載體構(gòu)建轉(zhuǎn)染載體的構(gòu)建病毒載體，質(zhì)粒 DNA RNA PCRT物，寡核甘酸等也影響轉(zhuǎn) 染結(jié)果。病毒載體對特定宿主細(xì)胞感染效率較高，但不同病毒載體有其特定的宿 主，有的還

17、要求特定的細(xì)胞周期，如逆轉(zhuǎn)錄病毒需侵染分裂期的宿主細(xì)胞， 此外 還需考慮一些安全問題如基因污染。除載體構(gòu)建外，載體的形態(tài)與大小對轉(zhuǎn) 染效率也有不同的影響，如前面提到的超螺旋與線性DNA寸瞬時(shí)和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的影 響。如果基因產(chǎn)物對細(xì)胞有毒性作用，轉(zhuǎn)染也很難進(jìn)行，因此選擇組成或可調(diào)控， 強(qiáng)度合適的啟動(dòng)子也很重要，同時(shí)做空載體與其它基因的相同載體構(gòu)建的轉(zhuǎn)染正 對照可排除毒性影響的干擾。轉(zhuǎn)染技術(shù)的要點(diǎn)與轉(zhuǎn)染試劑正確選擇轉(zhuǎn)染技術(shù)的要點(diǎn)與轉(zhuǎn)染試劑正確選擇轉(zhuǎn)染技術(shù)是指將外源分子如 DNA RNA?導(dǎo)入真核細(xì)胞的技術(shù)，它是研究基因表 達(dá)調(diào)控，突變分析等的常規(guī)工具。隨著功能研究的興起，具應(yīng)用越來越廣泛。以 下就向大

18、家介紹一些轉(zhuǎn)染的技術(shù)要點(diǎn)與市面上主要的轉(zhuǎn)染試劑類型的選擇。常規(guī)轉(zhuǎn)染技術(shù)可分為兩大類，一類是瞬時(shí)轉(zhuǎn)染，一類是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染永久轉(zhuǎn)染。前者外源DNA/RNAf整合到宿主染色體中，因此一個(gè)宿主細(xì)胞中可存在多個(gè)拷貝 數(shù)，產(chǎn)生高水平的表達(dá)，但通常只持續(xù)幾天，多用于啟動(dòng)子和其它調(diào)控元件的分 析。一般來說，超螺旋質(zhì)粒DNA專染效率較高，在轉(zhuǎn)染后24-96小時(shí)內(nèi)依賴于 各種不同的構(gòu)建分析結(jié)果，常常用到一些報(bào)告系統(tǒng)如熒光蛋白，B半乳糖甘酶等來幫助檢測。后者也稱穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，外源DNAS可以整合到宿主染色體中，也 可能作為一種游離體episome存在。盡管線性DNAb匕超螺旋DNA專入量低但 整合率高。外源DNAB合到染色

19、體中概率很小，大約1/104轉(zhuǎn)染細(xì)胞能整合，通 常需要通過一些選擇性標(biāo)記，如來氨丙基轉(zhuǎn)移酶 APH新霉素抗性基因，潮 霉素B磷酸轉(zhuǎn)移酶HPH ,胸昔激酶TK0等反復(fù)篩選，得到穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的同源 細(xì)胞系。轉(zhuǎn)染效率收多種因素影響，主要因素有下面幾個(gè)：1.細(xì)胞培養(yǎng)物健康的細(xì)胞培養(yǎng)物是成功轉(zhuǎn)染的基礎(chǔ)。不同細(xì)胞有不同的培養(yǎng)基，血清和添加物。低的細(xì)胞代 數(shù)50能確保基因型不變。高的轉(zhuǎn)染效率需要一定的細(xì)胞密度，一般的轉(zhuǎn)染 試劑都會(huì)有專門的說明。推薦在轉(zhuǎn)染前24小時(shí)分細(xì)胞，這將提供正常細(xì)胞代謝， 增加對外源DNAS入的可能。一定要避免細(xì)菌，支原體或真菌的污染。2.血清大多數(shù)培養(yǎng)基在使用前需要加血清。胎牛血清FCS

20、經(jīng)常用到，便宜一點(diǎn)的有 馬或牛血清。通常的，血清是一種包含生長因子與其它輔助因子的不確切成分的 添加物，對不同細(xì)胞的生長作用有很大的差別。 血清質(zhì)量的變化直接影響轉(zhuǎn)染效 率。因此在轉(zhuǎn)染前建議先測（轉(zhuǎn)右）試出對細(xì)胞生長良好的血清批號，轉(zhuǎn)染時(shí)用同 一批號的血清，并同時(shí)做負(fù)對照不加轉(zhuǎn)染試劑與外源 DNA以測試細(xì)胞生長是 否正常。有些轉(zhuǎn)染技術(shù)如脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染在有血清存在情況下效率很低，因此在轉(zhuǎn)染前要除血清。但有些對此敏感的細(xì)胞如原代細(xì)胞會(huì)受到損傷，甚至死亡導(dǎo)致轉(zhuǎn)染 效率極低。3.載體構(gòu)建轉(zhuǎn)染載體的構(gòu)建病毒載體，質(zhì)粒 DNA RNA PCFT物， 寡核甘酸等也影響轉(zhuǎn)染結(jié)果。病毒載體對特定宿主細(xì)胞感染效率較高

21、， 但不同 病毒載體有其特定的宿主，有的還要求特定的細(xì)胞周期，如逆轉(zhuǎn)錄病毒需侵染分 裂期的宿主細(xì)胞，此外還需考慮一些安全問題如基因污染。除載體構(gòu)建外， 載體的形態(tài)與大小對轉(zhuǎn)染效率也有不同的影響， 如前面提到的超螺旋與線性 DNA 對瞬時(shí)和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的影響。如果基因產(chǎn)物對細(xì)胞有毒性作用，轉(zhuǎn)染也很難進(jìn)行， 因此選擇組成或可調(diào)控，強(qiáng)度合適的啟動(dòng)子也很重要，同時(shí)做空載體與其它基因 的相同載體構(gòu)建的轉(zhuǎn)染正對照可排除毒性影響的干擾。4. DNA質(zhì)量DN顏量對轉(zhuǎn)染效率影響非常大。一般的轉(zhuǎn)染技術(shù)如脂質(zhì)體等基于電荷吸引原理，如果 DNM純，如帶少量的鹽離子，蛋白，代謝物污染都會(huì)顯著影響轉(zhuǎn)染復(fù)合物的有 效形成與轉(zhuǎn)染的進(jìn)行。核酸純化世界第一品牌德國QIAGEN&司提供的超純質(zhì)粒抽提試劑盒，能達(dá)到兩倍2x CsCl梯度離心以上的純度效果，使您不必為 DNA 質(zhì)量操心。止匕外，對一些內(nèi)毒素敏感的細(xì)胞如原代細(xì)胞，懸浮細(xì)胞和造血細(xì)胞， QIAGEN5提供可去除內(nèi)毒素污染的質(zhì)粒抽提試劑盒，在質(zhì)粒抽提過程中有效去 除脂多糖分子，保證理想的轉(zhuǎn)染效果。5 .轉(zhuǎn)染技術(shù)轉(zhuǎn)染技術(shù)的選擇對