1、第十一章第十一章 酶技術酶技術第十一章第十一章 酶技術酶技術 定義：以酶為研討對象的各種生化技術的定義：以酶為研討對象的各種生化技術的統稱。統稱。 包括：酶生物合成的調理技術包括：酶生物合成的調理技術 酶的分別純化技術酶的分別純化技術 酶反響動力學研討技術酶反響動力學研討技術 酶的分子修飾技術酶的分子修飾技術 酶、細胞核原生質體固定化技術酶、細胞核原生質體固定化技術第一節第一節 酶生物合成的調理酶生物合成的調理遺傳信息傳送的中心法那么遺傳信息傳送的中心法那么蛋白質蛋白質翻譯翻譯轉錄轉錄逆轉錄逆轉錄復制復制復制復制DNARNA定義：經過調理酶合成的量來控制定義：經過調理酶合成的量來控制微生物代謝

2、速度的調理機制，是在微生物代謝速度的調理機制，是在基因轉錄程度上進展的。基因轉錄程度上進展的。意義：經過阻止酶的過量合成，節意義：經過阻止酶的過量合成，節約生物合成的原料和能量。約生物合成的原料和能量。第一節第一節 酶生物合成的調理酶生物合成的調理 支配子基因表達的協同單位支配子構造基因編碼蛋白質, structural gene, S控制部位支配基因operator gene, O啟動子promotor gene, P一基因調控實際 Jacob and Monod的支配子學說operon theory 基因支配子調理系統表示圖基因支配子調理系統表示圖 調理基因 啟動基因 支配基因 構造基因

3、DNA 轉錄 - RNA聚合酶 + 轉錄 翻譯 mRNA 翻譯 阻遏蛋白 蛋白質 誘導劑 控制區控制區 信息區信息區支配子支配子 調理基因調理基因(regulator gene)： 可產生一種組成型調理蛋白可產生一種組成型調理蛋白(regulatory protein) 一種變構蛋白，經過與效應物一種變構蛋白，經過與效應物(effector) 包括誘導物和輔阻遏物的特異包括誘導物和輔阻遏物的特異結合而發生變構作用，從而改動它與支配基結合而發生變構作用，從而改動它與支配基因的結合力。因的結合力。 調理基因常位于調控區的上游。調理基因常位于調控區的上游。RPOSD N AC RP-cA M P復

4、合 物C RP+cA M P cAMP-CRP復合物的作用表示圖 啟動基因啟動基因promotor genepromotor gene啟動子：啟動子： 有兩個位點：有兩個位點： 1 1RNARNA聚合酶的結合位點聚合酶的結合位點2 2cAMP-CAPcAMP-CAP的結合位點。的結合位點。CAPCAP：分解代謝產物基因活化蛋白：分解代謝產物基因活化蛋白catabolite catabolite gene activator proteingene activator protein，又稱環腺苷酸受，又稱環腺苷酸受體蛋白體蛋白(cAMP receptor protein(cAMP recepto

5、r protein，CRPCRP。 只需只需cAMP-CRPcAMP-CRP復合物結合到啟動子的位點復合物結合到啟動子的位點上，上，RNARNA聚合酶才干結合到其在啟動子的位點上，聚合酶才干結合到其在啟動子的位點上，酶的合成才干開場。酶的合成才干開場。 支配基因支配基因Operater geneOperater gene: : 位于啟動基因和構造基因之間的一位于啟動基因和構造基因之間的一段堿基順序，能特異性地與調理基因產段堿基順序，能特異性地與調理基因產生的變構蛋白結合，支配酶合成的時機生的變構蛋白結合，支配酶合成的時機與速度。與速度。構造基因構造基因Structural geneStruct

6、ural gene: : 決議某一多肽的決議某一多肽的DNADNA模板，與酶有模板，與酶有各自的對應關系，其中的遺傳信息可轉各自的對應關系，其中的遺傳信息可轉錄為錄為mRNAmRNA，再翻譯為蛋白質。，再翻譯為蛋白質。( (二二) ) 酶合成調理的類型酶合成調理的類型 1.1.誘導誘導 (induction) (induction) 組成酶：細胞固有的酶類。組成酶：細胞固有的酶類。 誘導酶：是細胞為順應外來底物或誘導酶：是細胞為順應外來底物或其構造類似其構造類似 物而暫時合成的一類酶。物而暫時合成的一類酶。 2.2.阻遏阻遏 (repression) (repression) 分解代謝物阻遏分

7、解代謝物阻遏(catabolite (catabolite repression)repression)：某物質分解代謝的產物阻遏：某物質分解代謝的產物阻遏某些酶生物合成的景象。某些酶生物合成的景象。 反響阻遏反響阻遏(feedback repression)(feedback repression)：即在合成過程中有生物合成途徑的終點產即在合成過程中有生物合成途徑的終點產物對該途徑的一系列酶的量調理物對該途徑的一系列酶的量調理, ,所引起的所引起的阻遏作用阻遏作用三酶合成的調理機制 1. 酶合成的誘導加進某種物質，使酶生物合成開場或加速進展。 酶合成誘導的景象： 知分解利用乳糖的酶有： -半

8、乳糖苷酶； -半乳糖苷透過酶；硫代半乳糖苷轉乙酰酶。實驗：1大腸桿菌生長在葡萄糖培育基上時，細胞內無上述三種酶合成； 2大腸桿菌生長在乳糖培育基上時，細胞內有上述三種酶合成； 3闡明菌體生物合成的經濟原那么：需求時才合成。調理調理基因基因支配支配基因基因乳糖構造基因乳糖構造基因PLacZLacYLacamRNA 阻遏蛋白阻遏蛋白有活性有活性基基 因因 關關 閉閉啟啟動動子子ORPLacZLacYLaca調理調理基因基因支配支配基因基因乳糖構造基因乳糖構造基因啟啟動動子子ORmRNAZmRNAYmRNAa 阻遏蛋白阻遏蛋白無活性無活性 基基 因因 表表達達mRNAA、乳糖支配子的構造、乳糖支配子

9、的構造B、乳糖酶的誘導、乳糖酶的誘導 乳糖乳糖 阻遏蛋白阻遏蛋白有活性有活性誘導誘導誘導物的選擇誘導物的選擇 分為三類分為三類 1酶的作用底物；酶的作用底物； 2酶的反響產物；酶的反響產物； 3酶的底物類似物：最有效酶的底物類似物：最有效酶誘導合成的條件酶誘導合成的條件 1基因必需完好。基因必需完好。 a. 構造基因改動構造基因改動 b. 同一支配子中第一個構造基因破壞同一支配子中第一個構造基因破壞 c. 支配基因變異支配基因變異 d. 調理基因變異調理基因變異 調理基因調理基因 啟動基因啟動基因 支配基因支配基因 構造基因構造基因酶誘導合成的條件酶誘導合成的條件 2阻抑蛋白本來與支配基因的親

10、和力強，阻抑蛋白本來與支配基因的親和力強，兩者原來結合在一同，使酶不能合成；兩者原來結合在一同，使酶不能合成； 3在添加誘導物時，細胞所處環境中，在添加誘導物時，細胞所處環境中，不能有高濃度的分解代謝阻遏物或其他強不能有高濃度的分解代謝阻遏物或其他強阻遏劑存在，否那么將無法誘導。阻遏劑存在，否那么將無法誘導。酶誘導合成的檢測酶誘導合成的檢測 普統統過測定酶活力的方法進展檢測。普統統過測定酶活力的方法進展檢測。 胞外酶：誘導一定時間后，取培育液測定胞外酶：誘導一定時間后，取培育液測定酶活力；酶活力； 胞內酶：破碎細胞后測定酶活力。胞內酶：破碎細胞后測定酶活力。 2. 2.末端產物阻遏末端產物阻遏

11、 由某代謝途徑末端產物的過量累積引由某代謝途徑末端產物的過量累積引起的阻遏。起的阻遏。 酶合成阻遏的景象：酶合成阻遏的景象： 實驗：實驗： 1 1大腸桿菌生長在無機鹽和葡萄糖大腸桿菌生長在無機鹽和葡萄糖的培育基上時，的培育基上時， 檢測到細胞內有色氨檢測到細胞內有色氨酸合成酶的存在；酸合成酶的存在； 2 2在上述培育基中參與色氨酸，檢在上述培育基中參與色氨酸，檢測發現細胞內色氨酸合成酶的活性降低，測發現細胞內色氨酸合成酶的活性降低，直至消逝。直至消逝。 3 3闡明色氨酸的存在阻止了色氨酸闡明色氨酸的存在阻止了色氨酸合成酶的合成，表達了菌體生長的經濟合成酶的合成，表達了菌體生長的經濟原那么原那么

12、: :不需求就不合成。不需求就不合成。 色氨酸支配子色氨酸支配子酶的阻遏酶的阻遏調理基因調理基因支配基因支配基因構造基因構造基因mRNAmRNA酶蛋白酶蛋白阻遏蛋白不能與支配基阻遏蛋白不能與支配基因結合，構造基因表達因結合，構造基因表達調理基因調理基因支配基因支配基因構造基因構造基因輔阻遏物輔阻遏物代謝產物與阻遏蛋白結代謝產物與阻遏蛋白結合，使之構象發生變化合，使之構象發生變化與支配基因結合，構造與支配基因結合，構造基基因不能表達因不能表達酶酶的的誘誘導導和和阻阻遏遏支支配配子子模模型型B.有活性阻遏蛋白加誘導劑有活性阻遏蛋白加誘導劑A.有活性阻遏蛋白有活性阻遏蛋白C.無活性阻遏蛋白無活性阻遏

13、蛋白D.無活性阻遏蛋白加輔阻遏劑無活性阻遏蛋白加輔阻遏劑支配基因支配基因啟動基因啟動基因調理基因調理基因構造基因構造基因 阻遏蛋白阻遏蛋白(有活性有活性)阻遏蛋白阻撓支配基因阻遏蛋白阻撓支配基因構造基因不表達構造基因不表達誘導物誘導物誘導物與阻遏蛋白結合誘導物與阻遏蛋白結合,使阻遏蛋白不能起使阻遏蛋白不能起到阻撓支配基因的作用到阻撓支配基因的作用,構造基因可以表達構造基因可以表達酶蛋白酶蛋白mRNA阻遏蛋白不能跟支配基因結合阻遏蛋白不能跟支配基因結合, 構造基因可以表達構造基因可以表達阻遏蛋白阻遏蛋白(無活性無活性)酶蛋白酶蛋白mRNA代謝產物與阻遏蛋白結合代謝產物與阻遏蛋白結合,從而使阻遏蛋

14、從而使阻遏蛋白可以阻撓支配基因白可以阻撓支配基因,構造基因不表達構造基因不表達代謝產物代謝產物調控方式調控方式 阻遏蛋白阻遏蛋白 添加物添加物 與支配基與支配基因結合因結合阻遏效應阻遏效應舉例舉例酶的誘導酶的誘導有活性有活性不轉錄，不轉錄，繼而不翻譯繼而不翻譯誘導物誘導物轉錄，轉錄，繼而翻譯繼而翻譯乳糖支乳糖支配子配子酶的阻遏酶的阻遏無活性無活性阻遏物阻遏物不轉錄，不轉錄，繼而不翻譯繼而不翻譯色氨酸色氨酸支配子支配子酶合成的誘導與阻遏支配子模型調控作用對比酶合成的誘導與阻遏支配子模型調控作用對比3.3.分解代謝物阻遏分解代謝物阻遏 指細胞內同時有兩種分解底物碳源或氮指細胞內同時有兩種分解底物碳

15、源或氮源存在時，利用快的那種分解底物會阻源存在時，利用快的那種分解底物會阻遏利用慢的底物的有關酶合成的景象。遏利用慢的底物的有關酶合成的景象。 分解代謝物的阻遏作用，并非由于快速利分解代謝物的阻遏作用，并非由于快速利用的甲碳源本身直接作用的結果，而是經用的甲碳源本身直接作用的結果，而是經過甲碳源或氮源等在其分解過程中所過甲碳源或氮源等在其分解過程中所產生的中間代謝物所引起的阻遏作用。產生的中間代謝物所引起的阻遏作用。分解代謝物阻遏景象：分解代謝物阻遏景象： 實驗：細菌在含有葡萄糖和乳糖的培育基上生實驗：細菌在含有葡萄糖和乳糖的培育基上生長，優先利用葡萄糖。待葡萄糖耗盡后才開場長，優先利用葡萄糖

16、。待葡萄糖耗盡后才開場利用乳糖，產生了兩個對數生長期中間隔開一利用乳糖，產生了兩個對數生長期中間隔開一個生長延滯期的個生長延滯期的“二次生長景象二次生長景象(diauxie或或biphasic growth。02468020406080 細胞 濃 度(OD)時 間(h) 這一景象又稱葡萄糖效應，這一景象又稱葡萄糖效應，產生的緣由是由于葡萄糖降解產生的緣由是由于葡萄糖降解物阻遏了分解乳糖酶系的合成。物阻遏了分解乳糖酶系的合成。此調理基因的產物是環腺苷酸此調理基因的產物是環腺苷酸受體蛋白受體蛋白CRPCRP, ,亦稱降解物亦稱降解物基因活化蛋白基因活化蛋白CAPCAP。分解代謝物阻遏分解代謝物阻遏

17、RLacZLacYLacamRNAmRNAZmRNAYmRNAa基基 因因 表表達達CAP基因基因構造基因構造基因TCAPOCAP結結合部位合部位 RNA聚合酶聚合酶TcAMP -CAPP葡萄糖葡萄糖分解代分解代謝產物謝產物腺苷酸腺苷酸環化酶環化酶磷酸二酯磷酸二酯酶酶ATPcAMP5-AMP抑制抑制激活激活葡萄糖降解物與葡萄糖降解物與cAMP的關系的關系cAMPCAP：降解物基因活化蛋白：降解物基因活化蛋白catabolic gene activation protein降低降低cAMP濃度濃度使使CAP呈失活形狀呈失活形狀第二節第二節 酶反響動力學的研討酶反響動力學的研討 主要包括：主要包括

18、： 酶反響初速度的測定酶反響初速度的測定 底物濃度對酶反響速率的影響底物濃度對酶反響速率的影響 米氏常數和最大反響速度的測定米氏常數和最大反響速度的測定 溫度、溫度、pH、抑制劑等對反響速度的影響、抑制劑等對反響速度的影響 酶反響活化能的測定酶反響活化能的測定 激活劑的作用激活劑的作用 抑制類型確實定抑制類型確實定斜率斜率=P/ t = V初速度初速度Pt開場一段時間內反響速度幾乎開場一段時間內反響速度幾乎維持恒定，即產物生成量與時維持恒定，即產物生成量與時間成直線關系間成直線關系一、酶反響初速度的測定一、酶反響初速度的測定 為正確丈量酶促反響速度并防止干擾就必需測定反響初期為正確丈量酶促反響

19、速度并防止干擾就必需測定反響初期干擾要素還來不及起作用時的速度，稱之為反響初速度。干擾要素還來不及起作用時的速度，稱之為反響初速度。 1丈量單位時間內底物的耗費量丈量單位時間內底物的耗費量 2丈量單位時間內產物的生成量丈量單位時間內產物的生成量測定的普通步驟測定的普通步驟 1選擇適宜的底物；選擇適宜的底物； 2確定酶反響的溫度和確定酶反響的溫度和pH條件；條件； 3預備就緒后，將酶液加究竟物中，開預備就緒后，將酶液加究竟物中，開場反響，計時；場反響，計時； 4每隔一定時間測定產物生成量；每隔一定時間測定產物生成量； 5作圖：以反響時間為橫坐標，產物生作圖：以反響時間為橫坐標，產物生成量為縱坐標

20、作圖。成量為縱坐標作圖。二、底物濃度對反響速度的影響二、底物濃度對反響速度的影響Km和和vmax的測定的測定1 1、底物濃度對酶促反響速度的影響、底物濃度對酶促反響速度的影響 在低底物濃度時在低底物濃度時, 反響速度與底物濃度成正比，表現反響速度與底物濃度成正比，表現為一級反響特征。為一級反響特征。 當底物濃度到達一定值，幾乎一切的酶都與底物結合當底物濃度到達一定值，幾乎一切的酶都與底物結合后，反響速度到達最大值后，反響速度到達最大值Vmax，此時再添加底，此時再添加底物濃度，反響速度不再添加，表現為零級反響。物濃度，反響速度不再添加，表現為零級反響。SvVmax一級反響一級反響 v = k

21、S零級反響零級反響 v = k E混合級反響混合級反響單分子酶促反響的米氏方程及單分子酶促反響的米氏方程及Km推導原那么：從酶被底物飽和的景象出發，按照推導原那么：從酶被底物飽和的景象出發，按照 “穩態平衡假說的想象進展推導。穩態平衡假說的想象進展推導。1kSE 2kES3kEP SKSVvmmax132kkkKm米氏方程米氏方程:米氏常數米氏常數:2kk4酶反響速度與底物濃度的關系曲線酶反響速度與底物濃度的關系曲線* 當當v=Vmax/2時，時，Km=S Km的單位為濃度單位的單位為濃度單位* 是酶在一定條件下的特征物理常數，經過測定是酶在一定條件下的特征物理常數，經過測定Km的數值，的數值

22、，可鑒別酶。可鑒別酶。Km和和vmax的測定的測定求求Km和和vmax采用直接作圖法采用直接作圖法 從從vS圖，找出圖，找出1/2 Vmax ，查出，查出SKm但但S無論怎樣大，也只能趨近無論怎樣大，也只能趨近Vmax，故，故1/2 Vmax不準，且點不準，且點也要多。也要多。 (1). 雙倒數作圖法最常用雙倒數作圖法最常用 改寫改寫M氏方程為：氏方程為：1/v = Km/Vmax (1/S )+ 1/ Vmax(2). 伊蒂-霍夫斯第方程三、最適溫度、熱穩定性和活化能的測定三、最適溫度、熱穩定性和活化能的測定1.最適溫度測定最適溫度測定 在到達最適溫度以前，反在到達最適溫度以前，反響速度隨溫

23、度升高而加快響速度隨溫度升高而加快 酶是蛋白質，其變性速度酶是蛋白質，其變性速度亦隨溫度上升而加快亦隨溫度上升而加快 酶的最適溫度不是一個固酶的最適溫度不是一個固定不變的常數定不變的常數 在較低的溫度范圍內，酶反響速率隨溫度升高而增大，在較低的溫度范圍內，酶反響速率隨溫度升高而增大，但超越一定溫度后，反響速率反而下降，因此只需在某一但超越一定溫度后，反響速率反而下降，因此只需在某一溫度下，反響速率到達最大值，這個溫度通常就稱為酶反溫度下，反響速率到達最大值，這個溫度通常就稱為酶反響的最適溫度。響的最適溫度。102030405060708090020406080100Temperature OC

24、Relative Activity (%)2. 熱穩定性測定熱穩定性測定 測定方法：測定方法： 1溫度不同，作用時間一樣時的酶反響溫度不同，作用時間一樣時的酶反響速度，計算不同溫度下相對酶反響速度；速度，計算不同溫度下相對酶反響速度； 2測定較高溫度下，不同時間的酶反響測定較高溫度下，不同時間的酶反響速度。速度。3.活化能測定活化能測定 反響活化能的普通測定方法是測定不同溫反響活化能的普通測定方法是測定不同溫度下的反響速率常數，根據阿累尼烏斯公度下的反響速率常數，根據阿累尼烏斯公式：式： lnk=lnA-Ea/RT 以以lnk對對1/T作圖，圖像為直線，其斜率為作圖，圖像為直線，其斜率為-Ea

25、/R，從而計算出，從而計算出Ea。四、最適四、最適pH值的測定值的測定 pH影響酶活力的緣由：影響酶活力的緣由： 過酸過堿導致酶蛋白變性過酸過堿導致酶蛋白變性影響底物分子解離形狀影響底物分子解離形狀影響酶分子解離形狀影響酶分子解離形狀影響酶的活性中心構象影響酶的活性中心構象 酶的活力受環境酶的活力受環境pH的的影響，在一定影響，在一定pH下，下，酶表現最大活力，酶表現最大活力， 高于或低于此高于或低于此pH，酶，酶活力降低，通常把表活力降低，通常把表現出酶最大活力的現出酶最大活力的 pH稱為該酶的最適稱為該酶的最適pHoptimum pH。v最適最適pHoptimum pHpH五、酶的激活與抑

26、制五、酶的激活與抑制 凡是能提高酶活性的物質，稱為酶的激活劑凡是能提高酶活性的物質，稱為酶的激活劑activator 激活劑主要類別：激活劑主要類別： 金屬離子：金屬離子：K+、Na+、 Mg2+、Cu2+、Mn2+、Zn2+、Se3+ 、 Co2+、Fe2+ 陰離子：陰離子： Cl-、Br- 有機分子有機分子 復原劑：抗壞血酸、半胱氨酸、谷胱甘肽復原劑：抗壞血酸、半胱氨酸、谷胱甘肽 金屬螯合劑：金屬螯合劑：EDTA凡是使酶的必需基團或酶的活性部位中的基團的化凡是使酶的必需基團或酶的活性部位中的基團的化學性質改動而降低酶活力甚至使酶完全喪失活性學性質改動而降低酶活力甚至使酶完全喪失活性的物質，

27、叫酶的抑制劑的物質，叫酶的抑制劑inhibitor 。類型：可逆抑制劑類型：可逆抑制劑 不可逆抑制劑不可逆抑制劑:不能用透析或超濾等方法去除不能用透析或超濾等方法去除酶與抑制劑非共價地可逆結合，當用透析或超濾等酶與抑制劑非共價地可逆結合，當用透析或超濾等方法除去抑制劑后酶的活性可以恢復，這種抑制方法除去抑制劑后酶的活性可以恢復，這種抑制造用叫可逆抑制造用。造用叫可逆抑制造用。抑制劑對酶作用的影響抑制劑對酶作用的影響抑制劑類型和特點 競爭性抑制劑競爭性抑制劑可逆抑制劑可逆抑制劑 非競爭性抑制劑非競爭性抑制劑 反競爭性抑制劑反競爭性抑制劑 非專注性不可逆抑制劑非專注性不可逆抑制劑不可逆抑制劑不可逆

28、抑制劑 專注性不可逆抑制劑專注性不可逆抑制劑抑制劑與酶的必需基團以共價鍵抑制劑與酶的必需基團以共價鍵結合而引起酶活力喪失，不能用結合而引起酶活力喪失，不能用透析、超濾等物理方法除去抑制透析、超濾等物理方法除去抑制劑而使酶復活，稱不可逆抑制劑而使酶復活，稱不可逆抑制irreversible inhibition。抑制劑與酶的必需基團以共價鍵結抑制劑與酶的必需基團以共價鍵結合而引起酶活力喪失，能用物理方合而引起酶活力喪失，能用物理方法除去抑制劑而使酶復活，稱可逆法除去抑制劑而使酶復活，稱可逆抑制抑制reversible inhibition。+IEIESP+ EE+S競爭性抑制造用競爭性抑制造用可

29、經過添加底物濃可經過添加底物濃度減弱或解除這種度減弱或解除這種抑制造用。抑制造用。抑制劑抑制劑I和底物和底物S競爭酶的結合部位，從而影響競爭酶的結合部位，從而影響了底物與酶的正常結合。酶的活性部位不能同時既與了底物與酶的正常結合。酶的活性部位不能同時既與底物結合又與抑制劑結合，因此在底物和抑制劑之間底物結合又與抑制劑結合，因此在底物和抑制劑之間產生競爭，構成一定的平衡關系。產生競爭，構成一定的平衡關系。大多數競爭性抑制劑的構造與底物構造類似如：丙二大多數競爭性抑制劑的構造與底物構造類似如：丙二酸是琥珀酸脫氫酶的競爭性抑制劑。酸是琥珀酸脫氫酶的競爭性抑制劑。競爭性抑制中，競爭性抑制中，Vmax不

30、變，不變，Km增大，即到達一樣最大速度所需的底物濃度增多。增大，即到達一樣最大速度所需的底物濃度增多。非競爭性抑制造用非競爭性抑制造用+IEI+SESIESP+ EE+S+I實例：重金屬離子實例：重金屬離子Cu2+、Hg2+、Ag+、Pb2+ 金屬絡合劑金屬絡合劑EDTA、F-、CN-、N3-作用特點：底物和抑制劑同時和酶作用特點：底物和抑制劑同時和酶結合兩者沒有競爭作用。酶與抑制結合兩者沒有競爭作用。酶與抑制劑結合后還可以與底物結合；酶與劑結合后還可以與底物結合；酶與底物結合后還可以與抑制劑結合。底物結合后還可以與抑制劑結合。但是中間的三元復合物不能進一步但是中間的三元復合物不能進一步分解為

31、產物，因此酶活性降低。分解為產物，因此酶活性降低。這類抑制劑與酶活性部位以外的基團這類抑制劑與酶活性部位以外的基團相結合，其構造與底物無共同之處，相結合，其構造與底物無共同之處，這種抑制造用不能用添加底物濃度這種抑制造用不能用添加底物濃度來解除抑制，故稱非競爭性抑制。來解除抑制，故稱非競爭性抑制。這種抑制造用不能用添加底物濃度這種抑制造用不能用添加底物濃度的方法來消除。的方法來消除。非競爭性抑制中，非競爭性抑制中，Vmax變小，變小，Km不變，即在底物濃度不變情況下，降低了反響的最大不變，即在底物濃度不變情況下，降低了反響的最大速率。速率。反競爭性抑制造用反競爭性抑制造用ESIESP+ EE+

32、S+I作用特點：酶只需與底物結合后，才干與抑制劑結合。作用特點：酶只需與底物結合后，才干與抑制劑結合。反競爭性抑制中，反競爭性抑制中，Vmax變小，變小，Km變小變小11111第三節、酶、細胞和原生質體固定第三節、酶、細胞和原生質體固定化技術化技術 固定化生物技術固定化生物技術 經過化學或物理的手段將酶或游離細胞經過化學或物理的手段將酶或游離細胞定位于限定的空間區域內，使其堅持活性定位于限定的空間區域內，使其堅持活性并可反復利用。并可反復利用。 游離酶的缺陷：游離酶的缺陷： 1.酶是蛋白質，穩定性差熱、酸堿、有機酶是蛋白質，穩定性差熱、酸堿、有機溶劑對其有影響。溶劑對其有影響。 2.不能回收，

33、也使產物中混雜酶蛋白。不能回收，也使產物中混雜酶蛋白。 3.分別純化困難。分別純化困難。一、固定化酶和固定化細胞的定義一、固定化酶和固定化細胞的定義及特點及特點 1.固定化酶固定化酶(immobilized enzyme) 固定在載體上并在一定空間范圍內進展固定在載體上并在一定空間范圍內進展催化反響的酶。催化反響的酶。水溶性酶水溶性酶水不溶性載體水不溶性載體水不溶性酶水不溶性酶固定化酶固定化酶固定化技術固定化技術什么是固定化酶？什么是固定化酶？ 優點：優點： (1)可提高穩定性。可提高穩定性。 (2)能回收，易與產物分別，可反復運用。能回收，易與產物分別，可反復運用。 缺陷：缺陷： (1)存在

34、分散限制。適于催化小分子物質。存在分散限制。適于催化小分子物質。 (2)酶活性下降。酶活性下降。2. 固定化細胞固定化細胞immobilized cell 固定在載體上并在一定空間范圍內進展生固定在載體上并在一定空間范圍內進展生命活動生長、繁衍、新陳代謝的細胞。命活動生長、繁衍、新陳代謝的細胞。 優越性：優越性： (1)降低本錢，省去酶的分別純化任務降低本錢，省去酶的分別純化任務; (2)既可作為單一酶，也可作為復合酶系完既可作為單一酶，也可作為復合酶系完成部分代謝過程。成部分代謝過程。 局限性：局限性： (1)細胞內多種酶的存在，會構成不需求的細胞內多種酶的存在，會構成不需求的副產物。副產物

35、。 (2)細胞膜、細胞壁和載體都存在著分散限細胞膜、細胞壁和載體都存在著分散限制造用。制造用。 3.固定化原生質體固定化原生質體 意義：意義： (1)固定化原生質體去除了細胞壁的分散妨固定化原生質體去除了細胞壁的分散妨礙，有利于氧的傳送，營養成分的吸收和礙，有利于氧的傳送，營養成分的吸收和胞內產物的分泌。胞內產物的分泌。 (2)原生質體不穩定，容易破裂，固定化后，原生質體不穩定，容易破裂，固定化后，由于載體的維護作用，穩定性提高。由于載體的維護作用，穩定性提高。固定化方法固定化方法一酶的固定化方法一酶的固定化方法吸附法吸附法共價偶聯法共價偶聯法交聯法交聯法包埋法包埋法網格型網格型微囊型微囊型離

36、子交離子交換吸附換吸附物理物理吸附法吸附法 二、固定化方法二、固定化方法1.吸附法吸附法adsorption 根據帶電的酶或細胞和載體之間的靜電作根據帶電的酶或細胞和載體之間的靜電作用，使酶吸附于惰性固體的外表或離子交用，使酶吸附于惰性固體的外表或離子交換劑上。換劑上。 根據吸附劑的特點分根據吸附劑的特點分: 1物理吸附法物理吸附法physical adsortion 作用力：氫鍵、疏水鍵作用力：氫鍵、疏水鍵 常用載體：氧化鋁、硅藻土、多孔陶瓷、常用載體：氧化鋁、硅藻土、多孔陶瓷、多孔玻璃、多孔玻璃、 硅膠、羥基磷灰石、纖維素等。硅膠、羥基磷灰石、纖維素等。 2離子結合法離子結合法ion bi

37、nding 作用力：離子鍵作用力：離子鍵 常用載體：常用載體：DEAE-纖維素、纖維素、DEAE-葡聚糖葡聚糖凝膠、凝膠、CM-纖維素纖維素優點：條件溫暖，操作簡便，酶活力損優點：條件溫暖，操作簡便，酶活力損失少。失少。缺陷：結合力弱，易解吸附。缺陷：結合力弱，易解吸附。2.共價偶聯法共價偶聯法covalent binding or covalent coupling 借助共價鍵借助共價鍵將酶的活性將酶的活性非必需側鏈非必需側鏈基團和載體基團和載體的功能基團的功能基團進展偶聯。進展偶聯。 1載體：親水載體優于疏水載體載體：親水載體優于疏水載體 如如:天然高分子衍生物天然高分子衍生物: 纖維素纖

38、維素 葡聚糖凝膠葡聚糖凝膠 親和性好，機械性能差親和性好，機械性能差 瓊脂糖瓊脂糖 合成聚合物：合成聚合物： 聚丙烯酰胺聚丙烯酰胺 聚苯乙烯聚苯乙烯 機械性能好，但有疏水構造機械性能好，但有疏水構造 尼龍尼龍2偶聯方法：偶聯方法： 偶聯勝利與否取決于：偶聯勝利與否取決于： 載體：功能基團：芳香氨基，羧基，羧甲載體：功能基團：芳香氨基，羧基，羧甲基等。基等。 酶分子酶分子:側鏈非必需基團：羧基，巰基，羥側鏈非必需基團：羧基，巰基，羥基，酚基，咪唑基。基，酚基，咪唑基。 常用的偶聯反響有：常用的偶聯反響有： 重氮化法重氮化法; 疊氮法疊氮法; 溴化氰法溴化氰法; 烷基化法等。烷基化法等。 優點：酶

39、與載體結合結實，不會隨便優點：酶與載體結合結實，不會隨便零落，可延續運用。零落，可延續運用。 缺陷：反響條件較猛烈，易影響酶的缺陷：反響條件較猛烈，易影響酶的空間構象而影響酶的催化活性。空間構象而影響酶的催化活性。 借助雙功能試劑使酶分子之間發生交聯的借助雙功能試劑使酶分子之間發生交聯的固定化方法。固定化方法。 雙功能試劑：雙功能試劑：常用的是戊二醛常用的是戊二醛3.交聯法交聯法crosslinking O OH C CH2 CH2 CH2 C H 戊二醛有兩個醛基，均可與酶或蛋白質的游離氨基反響,使酶蛋白交聯。 此法與共價偶聯法利用的均是共價鍵，此法與共價偶聯法利用的均是共價鍵，不同之處：交

40、聯法不運用載體。不同之處：交聯法不運用載體。 交聯反響既能發生在分子間，也可發生在交聯反響既能發生在分子間，也可發生在分子內。分子內。 酶濃度低時，交聯發生在分子內，酶仍堅酶濃度低時，交聯發生在分子內，酶仍堅持溶解形狀。持溶解形狀。 酶濃度高時，交聯發生在分子間，酶變為酶濃度高時，交聯發生在分子間，酶變為不溶態。不溶態。 缺陷：缺陷： (1)反響條件猛烈，酶分子的多個基團被交反響條件猛烈，酶分子的多個基團被交聯，酶活力損失大。聯，酶活力損失大。 (2)制備的固定化酶顆粒較小，給運用帶來制備的固定化酶顆粒較小，給運用帶來不便。不便。4. 包埋法包埋法entrapment 將酶用物理的方法包將酶用

41、物理的方法包埋在各種載體高聚埋在各種載體高聚物內。分為：物內。分為： 網格型：將酶包埋在網格型：將酶包埋在高分子凝膠細微網格高分子凝膠細微網格中。中。 微囊型：將酶包埋在微囊型：將酶包埋在高分子半透膜中。高分子半透膜中。1網格型包埋法網格型包埋法gel (lattic) entrapment 又稱凝膠包埋法又稱凝膠包埋法凝膠凝膠包埋條件包埋條件 酶活性酶活性強度強度天然凝膠天然凝膠瓊脂、海藻酸鈣、瓊脂、海藻酸鈣、角叉菜膠、明膠角叉菜膠、明膠溫暖溫暖不變不變差差合成凝膠合成凝膠聚丙烯酰胺、聚丙烯酰胺、光交聯樹脂光交聯樹脂聚合反響聚合反響 部分失活部分失活 高高運用的多孔載體及其特點運用的多孔載體

42、及其特點海藻酸鈣凝膠包埋法：海藻酸鈣凝膠包埋法： 滴至滴至海藻酸鈉溶液海藻酸鈉溶液E (or cell) CaCl2 溶液中溶液中 IE(or IC) 角叉菜膠包埋法：角叉菜膠包埋法： 滴至滴至角叉菜膠角叉菜膠E (or cell) KCl 溶液中溶液中 IE (or IC)聚丙烯酰胺凝膠包埋法：聚丙烯酰胺凝膠包埋法： AP過硫酸銨過硫酸銨Acr+ Bis+E (or cell) IE (or IC) TEMED (四甲基乙二胺四甲基乙二胺)2微囊型包埋法微囊型包埋法microencapsulation 又稱半透膜包埋法又稱半透膜包埋法 將一定量酶液包在半透性的高分子微孔將一定量酶液包在半透性

43、的高分子微孔膜內膜內 。半透膜：直徑幾十微米到幾百微米，。半透膜：直徑幾十微米到幾百微米，厚約厚約25nm。 半透膜孔徑半透膜孔徑80%活性。活性。一、固定化酶的性質一、固定化酶的性質 能夠的緣由：能夠的緣由：固定化添加了酶活性構象的結實程度，固定化添加了酶活性構象的結實程度， 可防止酶分子伸展變形；可防止酶分子伸展變形；抑制酶的本身降解。抑制酶的本身降解。固定化部分阻撓了外界不利要素對酶固定化部分阻撓了外界不利要素對酶 的侵襲。的侵襲。 3. 酶的最適溫度酶的最適溫度 最適溫度與酶穩定性有關。最適溫度與酶穩定性有關。 多數酶固定化后熱穩定性上升，最適溫多數酶固定化后熱穩定性上升，最適溫度也上

44、升有例外。度也上升有例外。 4. 酶的最適酶的最適pH 帶負電荷載體帶負電荷載體 ：最適：最適pH 向堿性偏移。向堿性偏移。 帶正電荷載體帶正電荷載體 ：最適：最適pH 向酸性偏移。向酸性偏移。 5. 酶的動力學特征酶的動力學特征 固定化酶的表觀米氏常數固定化酶的表觀米氏常數Km隨載體的帶電隨載體的帶電性能變化。性能變化。 固定化載體與底物電荷相反，固定化酶固定化載體與底物電荷相反，固定化酶的表觀的表觀Km值降低。值降低。 固定化載體與底物電荷一樣，固定化酶固定化載體與底物電荷一樣，固定化酶的表觀的表觀Km值顯著添加。值顯著添加。6. 酶的作用專注性酶的作用專注性 與自然酶根本一樣。但大分子底

45、物難于接近與自然酶根本一樣。但大分子底物難于接近酶分子，導致酶的專注性發生改動。酶分子，導致酶的專注性發生改動。二、固定化細胞的性質二、固定化細胞的性質 與固定化酶相比，固定化細胞的情況比較與固定化酶相比，固定化細胞的情況比較復雜。復雜。 1有活性升高的景象。有活性升高的景象。 2穩定性的添加穩定性的添加 。 3最適溫度和最適最適溫度和最適pH常堅持不變。常堅持不變。三、固定化酶細胞的評價三、固定化酶細胞的評價目的目的 1. 酶酶(細胞細胞)的活力的活力 固定化酶通常呈顆粒狀，普通用于測定固定化酶通常呈顆粒狀，普通用于測定自然酶活力的方法改良后才干用于測定固自然酶活力的方法改良后才干用于測定固

46、定化酶。定化酶。 2. 蛋白總量蛋白總量 1.雙辛可寧酸法雙辛可寧酸法(BCA法法) 2.考馬斯亮藍法考馬斯亮藍法 3. 偶聯率及相對活力偶聯率及相對活力 偶聯率偶聯率=(參與蛋白活力參與蛋白活力-上清液蛋白活力上清液蛋白活力)/參參與蛋白活力與蛋白活力100% 活力回收活力回收=固定化酶總活力固定化酶總活力/參與酶的總活力參與酶的總活力100% 相對活力相對活力=固定化酶總活力固定化酶總活力/ (參與酶的總活參與酶的總活力力-上清液中未偶聯酶活力上清液中未偶聯酶活力)100%4. 半衰期半衰期 在延續測定條件下，固定化酶在延續測定條件下，固定化酶(細胞細胞)的活的活力下降為最初活力一半所閱歷

47、的延續任務力下降為最初活力一半所閱歷的延續任務時間，以時間，以t1/2表示。表示。 是衡量穩定性的一項重要目的。是衡量穩定性的一項重要目的。第四節第四節 酶分子修飾酶分子修飾酶在生物技術與工程中占有非常重要的位置。酶在生物技術與工程中占有非常重要的位置。酶所具有的反響專注性、催化高效性及反酶所具有的反響專注性、催化高效性及反響條件溫暖等優點，使其廣泛運用在工業、響條件溫暖等優點，使其廣泛運用在工業、農業、醫藥、環保及能源等領域。農業、醫藥、環保及能源等領域。由于酶的本質是蛋白質的特點，在催化反響由于酶的本質是蛋白質的特點，在催化反響中遭到穩定性、反響條件等制約，早期能中遭到穩定性、反響條件等制

48、約，早期能大規模運用的酶還不夠多，酶工藝也不完大規模運用的酶還不夠多，酶工藝也不完善。善。 酶在運用中的缺陷有：穩定性差、活力酶在運用中的缺陷有：穩定性差、活力不夠高、抗原性等，如對酸、堿、重金屬、不夠高、抗原性等，如對酸、堿、重金屬、有機介質、高溫等物理化學環境敏感，且有機介質、高溫等物理化學環境敏感，且活性、專注性、作用條件不能滿足消費工活性、專注性、作用條件不能滿足消費工藝要求。藝要求。 酶分子修飾成為酶工程中具有重要意義酶分子修飾成為酶工程中具有重要意義和運用前景的領域。和運用前景的領域。 隨著蛋白質工程的興起與開展，酶分子隨著蛋白質工程的興起與開展，酶分子修飾與基因工程技術結合在一同

49、，使酶分修飾與基因工程技術結合在一同，使酶分子修飾展現出更寬廣的前景。子修飾展現出更寬廣的前景。1、什么是酶分子修飾2、酶分子修飾的根本要求和條件3、酶分子的修飾方法GoGoGo4、酶分子修飾的運用Go酶分子修飾酶分子修飾一、什么是酶分子修飾？一、什么是酶分子修飾？ 經過各種方法使酶分子的構造發生某些改經過各種方法使酶分子的構造發生某些改動，從而改動酶的催化特性的技術過程稱動，從而改動酶的催化特性的技術過程稱為酶分子修飾。即：在體外將酶分子經過為酶分子修飾。即：在體外將酶分子經過人工的方法與一些化學基團物質，特人工的方法與一些化學基團物質，特別是具有生物相容性的物質，進展共價銜別是具有生物相容

50、性的物質，進展共價銜接，從而改動酶的構造和性質。接，從而改動酶的構造和性質。酶分子修飾的意義酶分子修飾的意義 提高酶的活力提高酶的活力 activityactivity 加強酶的穩定性加強酶的穩定性 stabilitystability 降低或消除酶的抗原性降低或消除酶的抗原性 immunological immunological propertyproperty 研討和了解酶分子中主鏈、側鏈、組成單位、研討和了解酶分子中主鏈、側鏈、組成單位、金屬離子和各種物理要素對酶分子空間構象金屬離子和各種物理要素對酶分子空間構象的影響的影響 structure structure 二、酶分子修飾的根本

51、要求和條件二、酶分子修飾的根本要求和條件 對酶分子進展修飾必需在修飾原理、修飾劑和反響條件對酶分子進展修飾必需在修飾原理、修飾劑和反響條件的選擇以及酶學性質等方面都要有足夠的了解。的選擇以及酶學性質等方面都要有足夠的了解。 1 1酶的穩定性酶的穩定性 熱穩定性、酸堿穩定性、作用溫度、熱穩定性、酸堿穩定性、作用溫度、pHpH、抑制劑等。、抑制劑等。 2 2酶活性中心的情況酶活性中心的情況 活性中心基團、輔因子等。其他如分子大小、性狀、亞活性中心基團、輔因子等。其他如分子大小、性狀、亞基數等。基數等。酶分子修飾的條件酶分子修飾的條件 修飾反響盡能夠在酶穩定條件下進展，并盡量不破修飾反響盡能夠在酶穩

52、定條件下進展，并盡量不破壞酶活性功能的必需基團，使修飾率高，同時酶的壞酶活性功能的必需基團，使修飾率高，同時酶的活力回收高。活力回收高。 1 1pHpH與離子強度與離子強度 pHpH決議了酶蛋白分子中反響基團的解離形狀。由于決議了酶蛋白分子中反響基團的解離形狀。由于它們的解離形狀不同，反響性能也不同。它們的解離形狀不同，反響性能也不同。 2 2修飾反響的溫度與時間修飾反響的溫度與時間 嚴厲控制溫度和時間可以減少以致消除一些非專注嚴厲控制溫度和時間可以減少以致消除一些非專注性的修飾反響。性的修飾反響。 3 3反響體系中酶與修飾劑的比例反響體系中酶與修飾劑的比例 三、酶分子的修飾方法三、酶分子的修

53、飾方法 金屬離子置換修飾金屬離子置換修飾 大分子結合修飾大分子結合修飾( (共價共價/ /非共價非共價) ) 側鏈基團修飾側鏈基團修飾 肽鏈有限水解修飾肽鏈有限水解修飾 氨基酸置換修飾氨基酸置換修飾 核苷酸置換修飾核苷酸置換修飾 酶分子的物理修飾酶分子的物理修飾 一酶的金屬離子置換修飾一酶的金屬離子置換修飾 把酶分子中的金屬離子換成另一種金屬離子，把酶分子中的金屬離子換成另一種金屬離子，使酶的特性和功能發生改動的修飾方法稱為金使酶的特性和功能發生改動的修飾方法稱為金屬離子置換修飾。屬離子置換修飾。 -淀粉酶中的鈣離子淀粉酶中的鈣離子Ca2+Ca2+，谷氨酸脫氫，谷氨酸脫氫酶中的鋅離子酶中的鋅離

54、子(Zn2+)(Zn2+)，過氧化氫酶分子中的鐵，過氧化氫酶分子中的鐵離子離子(Fe2+)(Fe2+)，酰基氨基酸酶分子中的鋅離子，酰基氨基酸酶分子中的鋅離子Zn2+Zn2+, ,超氧化物歧化酶分子中的銅、鋅離超氧化物歧化酶分子中的銅、鋅離子子(Cu2+,Zn2+) (Cu2+,Zn2+) 假設從酶分子中除去其所含的金屬離子，酶往往會喪失其催化活性。 假設重新參與原有的金屬離子，酶的催化活性可以恢復或者部分恢復。 假設用另一種金屬離子進展置換，那么可使酶呈現出不同的特性。 有的可以使酶的活性降低甚至喪失，有的卻可以使酶的活力提高或者添加酶的穩定性。一酶的金屬離子置換修飾一酶的金屬離子置換修飾1

55、. 1. 金屬離子置換修飾的方法金屬離子置換修飾的方法 1、酶的分別純化2、除去原有的金屬離子：參與金屬螯合劑3、參與置換離子1. 1. 金屬離子置換修飾的方法金屬離子置換修飾的方法 p 金屬離子置換修飾只適用于那些在分子構造中本金屬離子置換修飾只適用于那些在分子構造中本來含有金屬離子的酶。來含有金屬離子的酶。p 用于金屬離子置換修飾的金屬離子，普通都是二用于金屬離子置換修飾的金屬離子，普通都是二價金屬離子。價金屬離子。 2. 2. 金屬離子置換修飾的作用金屬離子置換修飾的作用 闡明金屬離子對酶催化作用的影響闡明金屬離子對酶催化作用的影響 提高酶活力提高酶活力 加強酶的穩定性加強酶的穩定性 改

56、動酶的動力學特性改動酶的動力學特性(二二) 大分子結合修飾大分子結合修飾 定義：利用水溶性大分子與酶結合定義：利用水溶性大分子與酶結合,使酶的使酶的空間構造發生某些精細的改動，從而改動空間構造發生某些精細的改動，從而改動酶的特性與功能的方法稱為大分子結合修酶的特性與功能的方法稱為大分子結合修飾法。簡稱為大分子結合法。飾法。簡稱為大分子結合法。 常用的修飾劑：右旋糖酐常用的修飾劑：右旋糖酐dextran、聚、聚乙二醇乙二醇PEG、肝素、肝素(heparin)、蔗糖聚、蔗糖聚合物合物Ficoll、聚氨基酸等。、聚氨基酸等。 大分子結合修飾是目前運用最廣的酶分子大分子結合修飾是目前運用最廣的酶分子修

57、飾方法。修飾方法。 用可溶性大分子，如聚乙二醇、右旋糖苷、肝素等，經過共價鍵銜接于酶分子的外表，構成一層覆蓋層。 例如：用聚乙二醇修飾超氧物歧化酶 ，不僅可以降低或消除酶的抗原性，而且提高了抗蛋白酶的才干，延伸了酶在體內的半衰期從而提高了酶藥效。共價修飾共價修飾(二二) 大分子結合修飾大分子結合修飾 每分子核糖核酸酶與每分子核糖核酸酶與6.56.5分子的右旋糖酐結合，分子的右旋糖酐結合，可以使酶活力提高到原有酶活力的可以使酶活力提高到原有酶活力的2.252.25倍；倍； 每分子胰凝乳蛋白酶與每分子胰凝乳蛋白酶與1111分子右旋糖酐結合，分子右旋糖酐結合，酶活力到達原有酶活力的酶活力到達原有酶活

58、力的5.15.1倍倍 共價修飾共價修飾(二二) 大分子結合修飾大分子結合修飾1. 1. 大分子結合修飾的方法大分子結合修飾的方法1、修飾劑的選擇：大分子結合修飾采用的修飾劑是、修飾劑的選擇：大分子結合修飾采用的修飾劑是水溶性大分子。例如，聚乙二醇水溶性大分子。例如，聚乙二醇PEG、右旋、右旋糖酐、蔗糖聚合物糖酐、蔗糖聚合物Ficoll、環狀糊精、肝素、環狀糊精、肝素、羧甲基纖維素、聚氨基酸等。要根據酶分子的構羧甲基纖維素、聚氨基酸等。要根據酶分子的構造和修飾劑的特性選擇適宜的水溶性大分子。造和修飾劑的特性選擇適宜的水溶性大分子。2、修飾劑的活化：作為修飾劑中含有的基團往往不、修飾劑的活化：作為

59、修飾劑中含有的基團往往不能直接與酶分子的基團進展反響而結合在一同。能直接與酶分子的基團進展反響而結合在一同。在運用之前普通需求經過活化，然后才可以與酶在運用之前普通需求經過活化，然后才可以與酶分子的某側鏈基團進展反響。分子的某側鏈基團進展反響。 1. 1. 大分子結合修飾的方法大分子結合修飾的方法3、修飾：將帶有活化基團的大分子修飾劑與經、修飾：將帶有活化基團的大分子修飾劑與經過分別純化的酶液，以一定的比例混合，在一過分別純化的酶液，以一定的比例混合，在一定的溫度、定的溫度、pH值等條件下反響一段時間，使值等條件下反響一段時間，使修飾劑的活化基團與酶分子的某側鏈基團以共修飾劑的活化基團與酶分子

60、的某側鏈基團以共價鍵結合，對酶分子進展修飾。價鍵結合，對酶分子進展修飾。 4、分別：需求經過凝膠層析等方法進展分別，、分別：需求經過凝膠層析等方法進展分別，將具有不同修飾度的酶分子分開，從中獲得具將具有不同修飾度的酶分子分開，從中獲得具有較好修飾效果的修飾酶。有較好修飾效果的修飾酶。 聚乙二醇是線性分子具有良好的生物相聚乙二醇是線性分子具有良好的生物相容性和水溶性，在體內無毒性、無殘留、容性和水溶性，在體內無毒性、無殘留、無免疫原性，并可消除酶的抗原性，使無免疫原性，并可消除酶的抗原性，使其末端活化后可以與酶產生交聯，因此，其末端活化后可以與酶產生交聯，因此，它被廣泛用于酶的修飾。它被廣泛用于