1、一產品概況 黃芪精是我公司開發研制的虛癥類黃芪精是我公司開發研制的虛癥類OTCOTC產品，為補血養氣，固本止汗之良藥。產品，為補血養氣，固本止汗之良藥。其療效佳，口感好，攜帶方便。其療效佳，口感好，攜帶方便。 揚 子 江 藥 業 集 團第1頁/共68頁二.小組概況( (一一) )小組簡介小組簡介 小組名稱小組名稱飛躍飛躍QCQC小組小組課題注冊號課題注冊號TZ2005015TZ2005015課題類型課題類型創新型創新型小組成員小組成員8 8人人成立時間成立時間2005.102005.10活動時間活動時間2005.102005.102006.42006.4課題名稱課題名稱研究黃芪精中黃芪甲苷含量

2、測定的新方法研究黃芪精中黃芪甲苷含量測定的新方法活動次數活動次數1919次次出勤率出勤率100%100%制表人：張集盤 日期：2006.3 .20揚 子 江 藥 業 集 團第2頁/共68頁( (二二)QC)QC小組成員一覽表小組成員一覽表序號序號姓名姓名性別性別受教育情況受教育情況職務職務組內分工組內分工1張集盤張集盤男男大專大專標準研究員標準研究員組長，資料整理組長，資料整理2黃新蘭黃新蘭女女本科，工程師，質量本科，工程師，質量管理工程師管理工程師QC主管主管副組長，技術指導副組長，技術指導3馬馬 軍軍男男大專大專標準研究員標準研究員方案實施方案實施4盧晶晶盧晶晶女女本科本科標準研究員標準研

3、究員方案實施，成果匯報方案實施，成果匯報5陸莉娟陸莉娟女女大專大專標準研究員標準研究員方案實施方案實施6祖若玉祖若玉女女大專大專標準研究員標準研究員方案實施方案實施7牛牛 萍萍女女碩士，高工，質量管碩士，高工，質量管理工程師理工程師質管經理質管經理技術指導技術指導8季洪英季洪英女女大專，工程師，質量大專，工程師，質量管理工程師管理工程師質管部長質管部長技術指導技術指導制表人：張集盤 日期：第3頁/共68頁三選擇課題1.薄層掃描法測定黃芪精中黃芪甲苷含量的缺陷分析基線不穩定耗時長易出現鬼峰偏差大缺陷第4頁/共68頁1.1.掃描時基線不穩定第5頁/共68頁1.2.容易出現鬼峰第6頁/共68頁1.3

4、.檢測偏差大，方法的準確性較差第7頁/共68頁 1.4.薄層板展開耗時長，且一塊薄層板只能點一個批號的供試品，檢測批次很有限，導致出成品檢測報告的周期較長。 1.5.按照部頒標準，以薄層掃描法 （TLCS）對黃芪精中黃芪甲苷進行含量測定，結果如下。第8頁/共68頁黃芪精按部頒標準含量測定結果批批 號號含量（含量（mgml-1）含量平均值含量平均值（mgml-1）相對平均偏差相對平均偏差（%）030301-10.114120.105260.109694.1030401-10.110680.106490.108582.0030501-10.126550.119450.123002.9030601-

5、10.120410.113520.116963.0030702-10.129010.119300.124164.0030801-10.125070.133710.129393.4制表人：張集盤 日期：TLCS法測定本品含量時偏差大，不利于產品質量的控制。第9頁/共68頁2.課題確定 研究黃芪精中黃芪甲苷含量測定的新方法可供直接借鑒的方法少黃芪化學成分復雜黃芪為君藥黃芪甲苷為主要有效成分第10頁/共68頁四.設定目標擬制定黃芪精中黃芪甲苷含量測定的新方法的回收率不低于90%；含量測定結果的相對平均偏差小于2.0%。第11頁/共68頁五提出并選擇最佳方案 1.提出方案 （1）HPLC-UV（高效液

6、相色譜-紫外檢測器）法 （2）HPLC-RI（高效液相色譜-示差折光檢測器）法 （3）HPLC-ELSD（高效液相色譜-蒸發光散射檢測器）法第12頁/共68頁 2.方案的分析、評估與確定序序號號方方 案案 內內 容容原原 理理 分分 析析評估人評估人方方 案案 評評 估估綜綜合合得得分分方案方案選定選定可操作可操作性性準確準確性性經濟經濟性性1HPLC-UV（高效液相色譜（高效液相色譜-紫外檢測器）紫外檢測器）法法利用黃芪甲利用黃芪甲苷在苷在203nm處有末端吸處有末端吸收的原理收的原理,建立以乙腈建立以乙腈-水水（32：68）為流動相的為流動相的HPLC-UV法法張集盤張集盤44因在因在20

7、3nm處干處干擾大擾大不選不選黃新蘭黃新蘭馬馬 軍軍盧晶晶盧晶晶陸莉娟陸莉娟祖若玉祖若玉牛牛 萍萍季洪英季洪英第13頁/共68頁序序號號方方 案案 內內 容容原原 理理 分分 析析評估人評估人方方 案案 評評 估估綜綜合合得得分分方案方案選定選定可操作可操作性性準確準確性性經濟經濟性性2HPLC- RI（高效液相色（高效液相色譜譜-示差折光示差折光檢測器）檢測器）法法樣品組分折樣品組分折射率與流動射率與流動相溶劑折射相溶劑折射率有差異，率有差異，當組分洗脫當組分洗脫出來時，會出來時，會引起流動相引起流動相折射率的變折射率的變化，該變化化，該變化與樣品組分與樣品組分的濃度成正的濃度成正比比 張集

8、盤張集盤 32因靈因靈敏度敏度不高不高不選不選黃新蘭黃新蘭 馬馬 軍軍 盧晶晶盧晶晶 陸莉娟陸莉娟 祖若玉祖若玉 牛牛 萍萍 季洪英季洪英 第14頁/共68頁序序號號方方 案案 內內 容容原原 理理 分分 析析評估人評估人方方 案案 評評 估估綜綜合合得得分分方案選方案選定定可操作可操作性性準確準確性性經濟經濟性性3HPLC-ELSD （高效液相色（高效液相色譜譜-蒸發光散射蒸發光散射檢測器）檢測器）法法 ELSD可以可以對所有揮發對所有揮發性低于流動性低于流動相的物質作相的物質作出準確檢測出準確檢測,而與被檢測而與被檢測物質的化學物質的化學基團關系不基團關系不大大,響應值響應值與樣品的質與樣

9、品的質量成正比量成正比張集盤張集盤76因檢測因檢測范圍廣、范圍廣、靈敏度靈敏度高，故高，故選定選定黃新蘭黃新蘭馬馬 軍軍盧晶晶盧晶晶陸莉娟陸莉娟祖若玉祖若玉牛牛 萍萍 季洪英季洪英 備注：可操作性、準確性、經濟性三個指標均以1分（一般）、3分（良好）、5分（顯著）為評分標準，上述綜合得分為QC小組成員所評分數的總和。第15頁/共68頁3.確定方案的采用順序（3）HPLC-ELSD（高效液相色譜-蒸發光散射檢測器）法（1）HPLC-UV（高效液相色譜-紫外檢測器）法（2）HPLC-RI（高效液相色譜-示差折光檢測器）法PDCA第16頁/共68頁六制定對策 根據以上選擇的最佳方案制訂對策表對對 策

10、策目目 標標措措 施施地地 點點時時 間間負責人負責人色譜條件色譜條件的確定的確定峰形對稱，目標峰形對稱，目標峰與相鄰峰分離峰與相鄰峰分離度不小于度不小于1.5，保，保留時間適中留時間適中對不同的色譜柱、流動對不同的色譜柱、流動相、流速等進行摸索，相、流速等進行摸索，盡量與藥典中黃芪藥材盡量與藥典中黃芪藥材含量測定的色譜條件劃含量測定的色譜條件劃一一儀器室儀器室05.11.2105.11.28張集盤張集盤馬馬 軍軍供試品前供試品前處理方法處理方法的選擇的選擇有效地提取目標有效地提取目標物且操作方便物且操作方便摸索科學、準確的供試摸索科學、準確的供試品前處理方法，盡量與品前處理方法，盡量與藥典中

11、黃芪藥材含量測藥典中黃芪藥材含量測定的前處理方法劃一定的前處理方法劃一儀器室儀器室05.12.0505.12.17張集盤張集盤馬馬 軍軍盧晶晶盧晶晶陸莉娟陸莉娟第17頁/共68頁對對 策策目目 標標措措 施施地地 點點時時 間間負責人負責人線性關線性關系的確系的確定定 相關系數大于相關系數大于0.9990配制至少配制至少5個個系列濃度，選系列濃度，選擇適當的曲線擇適當的曲線擬和類型進行擬和類型進行確定確定 儀器室儀器室 06.01.0506.01.20 張集盤張集盤馬馬 軍軍盧晶晶盧晶晶精密度精密度試驗試驗 峰面積的相對峰面積的相對標準偏差標準偏差RSD2.0% 同一供試品至同一供試品至少連續

12、進樣少連續進樣5次，考查色譜次，考查色譜峰面積的相對峰面積的相對標準偏差標準偏差（RSD） 儀器室儀器室 06.02.0506.02.11 張集盤張集盤馬馬 軍軍祖若玉祖若玉第18頁/共68頁對對 策策目目 標標措措 施施地地 點點時時 間間負責人負責人重復性重復性試驗試驗 含量測定結果的含量測定結果的相對標準偏差相對標準偏差RSD2.0%同一批號的供同一批號的供試品同一人同試品同一人同一儀器平行操一儀器平行操作作6份，考查含份，考查含量測定結果的量測定結果的相對標準偏差相對標準偏差（RSD） 儀器室儀器室 06.02.1306.02.18 張集盤張集盤穩定性穩定性試驗試驗峰面積的相對標峰面積

13、的相對標準偏差準偏差RSD2.0% 同一供試品分同一供試品分別在別在0、2、4小時進樣小時進樣分析，考查色分析，考查色譜峰面積的相譜峰面積的相對標準偏差對標準偏差（RSD）儀器室儀器室 06.02.2006.02.23 張集盤張集盤馬馬 軍軍盧晶晶盧晶晶祖若玉祖若玉 第19頁/共68頁對對 策策目目 標標措措 施施地地 點點時時 間間負責人負責人方法回收方法回收率試驗率試驗 方法回收率不低方法回收率不低于于90% 同一批號已知同一批號已知含量的供試品含量的供試品加入適量的對加入適量的對照品（或對照照品（或對照品溶液）平行品溶液）平行操作操作6份，考查份，考查方法回收率方法回收率 儀器室儀器室

14、06.02.2506.03.10張集盤張集盤馬馬 軍軍陸莉娟陸莉娟 制表人：張集盤 日期：第20頁/共68頁七對策實施實施一：色譜條件的確定1.儀器與試藥 Agilent1100高效液相色譜儀；Attech2000蒸發光散射檢測器；梅特勒AG285電子天平。 黃芪精；天津農藥總廠D101型大孔吸附樹脂；甲醇、乙腈為色譜純；95%乙醇為分析純；水為超純水。第21頁/共68頁2.對照品溶液的制備 取黃芪甲苷對照品適量，加甲醇溶解，配制成0.1 mgml-1的對照品溶液。3.供試品溶液的制備 精密量取本品10ml，置分液漏斗中，加水10ml，搖勻，用水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次20ml，合并正丁

15、醇液，用氨試液充分洗滌2次，每次20ml，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇10ml使溶解，0.45 m有機系微孔濾膜濾過，即得。第22頁/共68頁4.色譜條件的確定第23頁/共68頁色譜條件篩選圖1色譜柱：Agilent XDB-C18柱（4.6150 mm，5m）流動相：乙腈-水 (40：60)柱溫：40流速：1.2mlmin-1min24681012mAu100200300400500600700 ADC1 A, ADC1 CHANNEL A (ZJPHQJ21528.D) 1.405 7.917第24頁/共68頁色譜條件篩選圖2色譜柱：Agilent XDB-C18柱（4.6150 m

16、m，5m）流動相：乙腈-水 (40：60)柱溫：40流速：1.0 mlmin-1min2468101214mAu150200250300350400450 ADC1 A, ADC1 CHANNEL A (ZJPHQJ11038.D) 1.406 1.848 2.463 2.738 3.088 3.281 10.198第25頁/共68頁色譜條件篩選圖3色譜柱：Agilent XDB-C18柱（4.6150 mm，5m）流動相：乙腈-水 (40：60)柱溫：40流速：0.9 mlmin-1min24681012mAu20040060080010001200 ADC1 A, ADC1 CHANNEL

17、 A (ZJPHQJ25055.D) 1.482 11.243第26頁/共68頁色譜條件篩選圖4色譜柱：Agilent XDB-C18柱（4.6150 mm，5 m）流動相：乙腈-水 (40：60)柱溫：40流速：0.9 mlmin-1min24681012mAu25050075010001250150017502000 ADC1 A, ADC1 CHANNEL A (ZJPHQJ25019.D) 1.427 1.853 2.814 3.315 3.507 4.446 11.265 12.380第27頁/共68頁色譜條件篩選圖5色譜柱：Agilent XDB-C18柱（4.6150 mm，5m

18、）流動相：乙腈-水 (32：68)柱溫：40流速：1.0 mlmin-1min2468101214mAu200250300350400450500550 ADC1 A, ADC1 CHANNEL A (ZJPHQJ11185.D) 1.494 10.575 - Astragaloside 第28頁/共68頁色譜條件篩選圖6色譜柱：Agilent XDB-C18柱（4.6150 mm，5 m）流動相：乙腈-水 (32：68)柱溫：40流速：1.0 mlmin-1min24681012mAu200250300350400 ADC1 A, ADC1 CHANNEL A (ZJPHQJ11215.D)

19、 1.485 1.877 2.786 3.150 3.345 10.453 - Astragaloside 第29頁/共68頁色譜條件篩選圖7色譜柱：Dikma DiamonsilTM（鉆石）C18柱(4.6250 mm,5 m)流動相：乙腈-水 (40：60)柱溫：40流速：1.0 mlmin-1min2.557.51012.51517.5mAu02505007501000125015001750 ADC1 A, ADC1 CHANNEL A (ZJPHQJ00001.D) 2.294 10.117 17.536 19.273第30頁/共68頁色譜條件選擇情況匯總表制表人：馬軍 日期：色譜柱

20、色譜柱流動相流動相不同流速（不同流速（mlmin-1）下的）下的對照品溶液色譜峰分離情況對照品溶液色譜峰分離情況不同流速（不同流速（mlmin-1）下的）下的供試品溶液色譜峰分離情況供試品溶液色譜峰分離情況0.91.01.20.91.01.2Agilent XDB-C18柱柱（4.6150 mm，5 m）乙腈乙腈-水水 (40：60)峰形對稱；目標峰與相鄰峰峰形對稱；目標峰與相鄰峰分離度大于分離度大于1.5，保留時間適，保留時間適中中峰形對稱；目標峰與相鄰峰峰形對稱；目標峰與相鄰峰分離度大于分離度大于1.5，保留時間適，保留時間適中中Dikma DiamonsilTM（鉆石）（鉆石）C18柱柱

21、（4.6250 mm，5 m）乙腈乙腈-水水 (40：60)峰形對稱；目標峰與相鄰峰峰形對稱；目標峰與相鄰峰分離度大于分離度大于1.5，tR R10min10min峰形對稱；目標峰與相鄰峰峰形對稱；目標峰與相鄰峰分離度大于分離度大于1.5，tR R10min10minAgilent XDB-C18柱柱（4.6150 mm，5 m）乙腈乙腈-水水 (32：68)峰形對稱；目標峰與相鄰峰峰形對稱；目標峰與相鄰峰分離度大于分離度大于1.5，tR R10min10min峰形對稱；目標峰與相鄰峰峰形對稱；目標峰與相鄰峰分離度大于分離度大于1.5，tR R10min10minDikma Diamonsil

22、TM（鉆石）（鉆石）C18柱柱（4.6250 mm，5 m）乙腈乙腈-水水 (32：68)峰形較對稱；目標峰與相鄰峰形較對稱；目標峰與相鄰峰分離度大于峰分離度大于1.5，tR R10min10min峰形較對稱；目標峰與相鄰峰形較對稱；目標峰與相鄰峰分離度大于峰分離度大于1.5，tR R10min10min第31頁/共68頁 因此，可以選擇Agilent XDB-C18柱（4.6150 mm，5 m）、以乙腈-水 (32：68)為流動相，流速為1.0 mlmin-1進行后續試驗。第32頁/共68頁實施二：供試品前處理方法的選擇1.供試品溶液的制備精密量取本品10ml，置分液漏斗中，加水10ml，

23、搖勻，用水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨試液充分洗滌2次，每次20ml，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘渣加水5ml使溶解，放冷，通過D101型大孔吸附樹脂柱，以水50ml洗脫，棄去水液，再用A乙醇30ml洗脫，棄去洗脫液，繼用B乙醇50ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，用甲醇溶解并轉移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，即得。第33頁/共68頁2.提取分離條件的確定收集上述水液和各擬棄去的乙醇洗脫液，蒸干，加甲醇適量使溶解，得溶液C按照上述色譜條件分別進樣20 l，記錄色譜峰面積。第34頁/共68頁各擬棄去的乙醇洗脫液蒸干，加甲醇適量使溶解，得溶液各擬棄去的乙醇洗脫液

24、蒸干，加甲醇適量使溶解，得溶液C水液水液30%40%50%60%70%80%95%黃芪甲黃芪甲苷峰檢苷峰檢出情況出情況未檢未檢出出未檢未檢出出檢出檢出量較量較小小檢出檢出量較量較大大檢出檢出量最量最大大未檢未檢出出未檢未檢出出未檢未檢出出制表人:盧晶晶 日期第35頁/共68頁試驗結果表明：（1）棄去的水液中目標物無損失；（2）當A=40，即采用40%乙醇洗脫時，目標物有損失；（3）當B=60，即繼續采用60%乙醇洗脫時，則目標物洗脫不完全。因此確定A%、B%的最佳值分別為：30%、70%，并以此值確定的提取分離條件進行后續方法學的驗證。第36頁/共68頁實施三：線性關系的確定 取黃芪甲苷對照品

25、適量，加甲醇溶解并稀釋至8個系列濃度, 分別進樣10 l，測定峰面積，以對照品濃度X(mgml-1)的lg值為橫坐標，峰面積積分值Y的lg值為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程： 第37頁/共68頁工作曲線評價：結果表明黃芪甲苷在255.20 gml-1 范圍內線性關系良好。第38頁/共68頁實施四：精密度試驗取同一供試品溶液，在上述色譜條件下重復進樣6次，每次10 l，測得黃芪甲苷色譜峰峰面積平均值為，RSD為0.5%。第39頁/共68頁制表人：祖若玉 日期：進樣次數進樣次數峰面積峰面積峰面積平均值峰面積平均值RSD（%）1977.09442978.578830.52980.079413975.

26、409004986.095835976.362926976.43140第40頁/共68頁繪圖人：祖若玉 日期：評價：精密度良好，達到預期目標。第41頁/共68頁實施五：重復性試驗取同一批號樣品，制備6份供試品溶液，分別精密吸取對照品溶液10l、20l，供試品溶液10l，注入液相色譜儀，測定峰面積值，以外標兩點法對數方程計算，即得黃芪甲苷的含量。第42頁/共68頁重復性試驗結果試驗次數試驗次數含量含量（mgml-1）含量平均值含量平均值（mgml-1）RSD（%）10.1234380.1223571.20.12196820.1233660.12376830.1238620.12227040.12

27、11760.12373450.1211650.11947860.1209460.123113制表人：張集盤 日期：第43頁/共68頁 繪圖人：張集盤 日期：評價：重復性試驗RSD為1.2%，達到預期目標。 第44頁/共68頁實施六：穩定性試驗取同一供試品溶液，于0、2、4、6、12、14 h分別精密吸取10 l注入液相色譜儀分析，測得峰面積值，計算RSD。 第45頁/共68頁穩定性試驗結果進樣時間進樣時間（h）峰面積峰面積峰面積平均值峰面積平均值RSD（%）01071.514771069.388771.821064.4517841077.6015661053.73657121098.48413

28、141043.48083制表人：盧晶晶 日期：第46頁/共68頁繪圖人：盧晶晶 日期： 評價：上述結果表明供試品溶液在14 h內穩定性良好。第47頁/共68頁實施七：方法回收率試驗 精密吸取已知含量同一批號樣品5 ml，6份，分別精密加入已知濃度的對照品溶液5 ml，制備溶液，分別進樣10 l，測得峰面積值， 計算平均回收率和RSD。第48頁/共68頁回收率測定結果（n = 6）取樣量取樣量（ml）樣品含量樣品含量（mg）加入量加入量（mg）測得量測得量（mg）回收率回收率（%）平均值平均值（%）RSD（%）50.8219550.52701.3168893.9196.761.911.32487

29、95.4350.8219550.52701.3455599.351.3418698.6550.8219550.52701.3305796.511.3396498.2350.8219550.52701.3352697.401.3371497.7650.8219550.52701.3218994.861.3219794.8850.8219550.52701.3432198.911.3241195.29制表人：張集盤 日期：第49頁/共68頁評價：平均回收率為96.76%，RSD為1.91%，表明方法準確度良好，可以用于本品的定量分析。第50頁/共68頁評價1.初步評價 建立了黃芪精中黃芪甲苷含量測

30、定的新方法，方法學研究符合中國藥典2005年版（一部）附錄“中藥質量標準分析方法驗證指導原則”。第51頁/共68頁2.綜合評價 取本品3批，將兩法的含量測定結果進行對比。第52頁/共68頁批號批號含含 量（量（mgml-1）相對平均偏差（相對平均偏差（%）TLCS法法平均值平均值HPLC-ELSD法法平均值平均值TLCS法法HPLC-ELSD法法060313010.133960.1393240.1304560.1352832.60.70.1332480.127400.1381040.139324060314010.152920.1585610.1441870.1512221.91.20.144

31、2410.147310.1578980.158561060315010.148710.1541390.1454340.1496721.80.70.1460540.143720.1530620.154139第53頁/共68頁繪圖人：陸莉娟 日期：第54頁/共68頁評價：采用HPLC- ELSD法測定黃芪精中黃芪甲苷含量比采用TLCS法測定時的相對平均偏差小，測定的結果較理想。第55頁/共68頁八.效果檢查1.效果驗證 取不同批號的黃芪精，依法制備供試品溶液，在上述色譜條件下進樣10 l，測得峰面積值，并計算黃芪甲苷含量。10批樣品含量測定結果見下表。第56頁/共68頁10批樣品含量測定結果（n

32、= 4） 批號批號含量含量（mgmlmgml-1-1）含量平均值含量平均值（mgmlmgml-1-1）相對平均偏差相對平均偏差（% %）06010201060102010.1573570.1573570.1586400.1586401.11.10.1565360.1565360.1602440.1602440.1604240.16042406012001060120010.1554750.1554750.1555660.1555660.60.60.1556130.1556130.1539920.1539920.1571840.15718406020201060202010.1634490.16

33、34490.1643910.1643911.41.40.1611400.1611400.1659520.1659520.1670230.167023第57頁/共68頁批號批號含量含量（mgmlmgml-1-1）含量平均值含量平均值（mgmlmgml-1-1）相對平均偏差相對平均偏差（% %）06020301060203010.1523720.1523720.1525030.1525030.50.50.1513820.1513820.1527150.1527150.1535440.15354406020401060204010.1433190.1433190.1428430.1428430.80.80.1435370.1435370.1405860.1405860.1439300.14393006020402060204020.1326390.1326390.1327960.1327960.40.40.1321470.1321470.1335680.1335680.1328280.132828第58頁/共68頁批號批號含