1、高效液相色譜儀組成高效液相色譜儀組成流動相及貯液罐流動相及貯液罐高壓輸液泵及梯度洗脫裝置高壓輸液泵及梯度洗脫裝置進(jìn)樣裝置進(jìn)樣裝置色譜柱色譜柱檢測器檢測器餾分收集器數(shù)據(jù)處理及色譜工作站第1頁/共31頁流動相 泵色譜柱檢測器 泵液分離 檢測 記錄進(jìn)樣閥進(jìn)樣第2頁/共31頁一、流動相及貯液罐1. 貯液罐材料應(yīng)耐腐蝕，常用材料為玻璃材料應(yīng)耐腐蝕，常用材料為玻璃、不銹鋼或特種塑料、不銹鋼或特種塑料 （PEEKPEEK）。）。吸濾頭第3頁/共31頁吸濾頭：多孔不銹鋼過濾器，孔徑吸濾頭：多孔不銹鋼過濾器，孔徑0.45um0.45um。吸濾頭貯液罐流動相需經(jīng)過流動相需經(jīng)過0.45um0.45um濾膜過濾，以濾

2、膜過濾，以除去微除去微小顆粒，尤其是小顆粒，尤其是使用緩沖液使用緩沖液。第4頁/共31頁2. 流動相脫氣流動相中有溶解的氣體，在洗脫過流動相中有溶解的氣體，在洗脫過程中當(dāng)流動相由色譜柱流至檢測器程中當(dāng)流動相由色譜柱流至檢測器時，因壓力降低而產(chǎn)生氣泡，從而時，因壓力降低而產(chǎn)生氣泡，從而影響檢測器的工作。影響檢測器的工作。第5頁/共31頁1 1）低壓脫氣法）低壓脫氣法 使用水泵連接抽濾使用水泵連接抽濾瓶和微孔玻璃漏斗，瓶和微孔玻璃漏斗，可完成脫氣和過濾的可完成脫氣和過濾的雙重任務(wù)。雙重任務(wù)。第6頁/共31頁3 3）超聲波脫氣法）超聲波脫氣法將流動相瓶置于超聲波清洗器中，以將流動相瓶置于超聲波清洗器

3、中，以 水為介質(zhì)超聲脫氣。水為介質(zhì)超聲脫氣。2 2）吹氦脫氣法）吹氦脫氣法將氦氣通入流動相以驅(qū)除其中的空氣，將氦氣通入流動相以驅(qū)除其中的空氣，適用于所有的溶劑。適用于所有的溶劑。第7頁/共31頁4 4）真空脫氣法）真空脫氣法- -在線脫氣在線脫氣打開真空脫氣機(jī)的電源開關(guān)后，控制電路即開啟打開真空脫氣機(jī)的電源開關(guān)后，控制電路即開啟真空泵，真空泵運(yùn)行使真空箱內(nèi)產(chǎn)生部分真空。真空泵，真空泵運(yùn)行使真空箱內(nèi)產(chǎn)生部分真空。真空度由壓力傳感器測定。根據(jù)傳感器信號，真真空度由壓力傳感器測定。根據(jù)傳感器信號，真空脫氣機(jī)通過運(yùn)行或關(guān)閉真空泵來維持真空度空脫氣機(jī)通過運(yùn)行或關(guān)閉真空泵來維持真空度 第8頁/共31頁流動

4、相 泵色譜柱檢測器 泵液分離 檢測 記錄進(jìn)樣閥進(jìn)樣儀器裝置儀器裝置第9頁/共31頁二、高壓輸液泵及梯度洗脫裝置1. 1. 要要求求1 1）耐化學(xué)（酸、堿）腐蝕；）耐化學(xué)（酸、堿）腐蝕；2 2）輸出流量穩(wěn)定，重復(fù)性高；）輸出流量穩(wěn)定，重復(fù)性高；3 3）能在高壓下連續(xù)工作；）能在高壓下連續(xù)工作；5 5）易清洗、維修，具有梯度洗脫功能力。）易清洗、維修，具有梯度洗脫功能力。4 4）輸出流量范圍寬）輸出流量范圍寬 分析柱：分析柱：0.10.110ml/min 10ml/min 第10頁/共31頁2. 分類恒流泵恒壓泵注射泵往復(fù)柱塞泵液壓隔膜泵氣動放大泵第11頁/共31頁3. 往復(fù)型泵1）原理第12頁/

5、共31頁2 2）優(yōu)點(diǎn)：體積小，流量調(diào)節(jié)方便，更換溶劑容易3 3）缺點(diǎn)：）缺點(diǎn)：A.A.對加工制造有特殊要求：耐磨損對加工制造有特殊要求：耐磨損B.B.輸出壓力有明顯的起伏脈動。輸出壓力有明顯的起伏脈動。第13頁/共31頁4）減小脈動措施 采用多頭泵交替聯(lián)動 A 雙柱塞并聯(lián)泵第14頁/共31頁B 雙柱塞串連泵第15頁/共31頁4. 梯度洗脫問題：樣品組成復(fù)雜，第一個組問題：樣品組成復(fù)雜，第一個組分的分的k k值和最后一個峰的值和最后一個峰的k k值相值相差幾十倍至上百倍。差幾十倍至上百倍。解決：程序升溫？程序升溫？流量程序？流量程序？第16頁/共31頁在在一個分析周期中，不斷改變流一個分析周期中

6、，不斷改變流動相的組成，先用洗脫能力弱的動相的組成，先用洗脫能力弱的溶劑，然后不斷增加洗脫能力強(qiáng)溶劑，然后不斷增加洗脫能力強(qiáng)的溶劑的組成，使各個組分能在的溶劑的組成，使各個組分能在最佳條件下得到洗脫。最佳條件下得到洗脫。1）定義 ( gradient elution )：第17頁/共31頁2）梯度洗脫裝置A、低壓梯度（泵前混合、低壓梯度（泵前混合)第18頁/共31頁B、高壓梯度（泵后混合、高壓梯度（泵后混合)第19頁/共31頁三、進(jìn)樣裝置 柱外展寬柱外展寬是指色譜柱外的因素所引是指色譜柱外的因素所引起的峰展寬，主要包括進(jìn)樣系統(tǒng)、起的峰展寬，主要包括進(jìn)樣系統(tǒng)、連接管道及檢測器中存在死體積。連接管

7、道及檢測器中存在死體積。分柱前和柱后展寬。分柱前和柱后展寬。 進(jìn)樣系統(tǒng)是引起柱前展寬的主要因進(jìn)樣系統(tǒng)是引起柱前展寬的主要因素素，因此高效液相色譜法中對進(jìn)樣，因此高效液相色譜法中對進(jìn)樣系統(tǒng)要求較嚴(yán)。系統(tǒng)要求較嚴(yán)。 第20頁/共31頁1、自動進(jìn)樣器進(jìn)樣、自動進(jìn)樣器進(jìn)樣2. 六通閥進(jìn)樣六通閥進(jìn)樣美國美國RheodyneRheodyne公司的六通閥進(jìn)樣器最公司的六通閥進(jìn)樣器最為通用，各大為通用，各大HPLCHPLC儀器制造商均以此儀器制造商均以此產(chǎn)品作為儀器的進(jìn)樣器產(chǎn)品作為儀器的進(jìn)樣器。第21頁/共31頁第22頁/共31頁開始分析開始分析 廢廢液液樣樣品品 淋洗液淋洗液 至分離柱至分離柱進(jìn)樣閥進(jìn)樣閥

8、樣樣品品 裝裝樣樣 廢廢液液 淋洗液淋洗液至分離柱至分離柱 （）（）（）（） 樣樣品品環(huán)環(huán)112233445566第23頁/共31頁* * 手柄手柄處于處于LoadLoad和和InjectInject之間時，由于暫時之間時，由于暫時堵堵住了住了流路，流路中壓力驟增，再轉(zhuǎn)到進(jìn)流路，流路中壓力驟增，再轉(zhuǎn)到進(jìn)樣位，過高的壓力在柱頭上引起損壞，樣位，過高的壓力在柱頭上引起損壞，所所以應(yīng)盡快轉(zhuǎn)動閥，不能停留在中途以應(yīng)盡快轉(zhuǎn)動閥，不能停留在中途。* * 在在HPLCHPLC系統(tǒng)中使用的注射器針頭有別于氣系統(tǒng)中使用的注射器針頭有別于氣相色譜，是相色譜，是平頭注射器平頭注射器。一方面，針頭外。一方面，針頭外側(cè)

9、緊貼進(jìn)樣器密封管內(nèi)側(cè)，密封性能好，側(cè)緊貼進(jìn)樣器密封管內(nèi)側(cè)，密封性能好，不漏液，不引入空氣；另一方面，也防止不漏液，不引入空氣；另一方面，也防止了針頭刺壞密封組件及定子。了針頭刺壞密封組件及定子。第24頁/共31頁1)1)部分裝液法部分裝液法: :進(jìn)樣量最多為定量環(huán)體積進(jìn)樣量最多為定量環(huán)體積的的7575，并且要求每次進(jìn)樣體積準(zhǔn)確、，并且要求每次進(jìn)樣體積準(zhǔn)確、相同相同2)2)完全裝液法完全裝液法: : 進(jìn)樣量最少為定量環(huán)體積進(jìn)樣量最少為定量環(huán)體積的的3 3至至5 5倍，這樣才能完全置換樣品定量倍，這樣才能完全置換樣品定量環(huán)內(nèi)殘留的溶液，達(dá)到所要求的精密度環(huán)內(nèi)殘留的溶液，達(dá)到所要求的精密度及重現(xiàn)性。

10、及重現(xiàn)性。六通閥進(jìn)樣器的進(jìn)樣方式六通閥進(jìn)樣器的進(jìn)樣方式第25頁/共31頁四、色譜柱第26頁/共31頁 色譜柱長：100mm-250mm 色譜柱內(nèi)徑：4.6mm，2.1mm 色譜柱填裝：勻漿裝柱第27頁/共31頁餾分收集器餾分收集器用微處理機(jī)控制，按預(yù)先規(guī)定好的程序，或按時間，或按色譜用微處理機(jī)控制，按預(yù)先規(guī)定好的程序，或按時間，或按色譜峰的起落信號逐一收集和重復(fù)多次收集。峰的起落信號逐一收集和重復(fù)多次收集。 第28頁/共31頁數(shù)據(jù)處理及色譜工作站數(shù)據(jù)處理及色譜工作站 通用型和專用型通用型和專用型 通用型工作站包括軟件、數(shù)據(jù)采集裝通用型工作站包括軟件、數(shù)據(jù)采集裝置和接口，可用于不同型號的儀器，置和接口，可用于不同型號的儀器，具有數(shù)據(jù)采集、校正、計(jì)算、繪圖、具有數(shù)據(jù)采集、校正、計(jì)算、繪圖、貯存、管理等功能，能完成一般儀器貯存、管理等功能，能完成一般儀器系統(tǒng)測試，計(jì)算工作曲線和樣品含量、系統(tǒng)測試，計(jì)算工作曲線和樣品含量、繪制色譜圖等。繪制色譜圖等。 專用型是指為一定型號儀器配套的工專用型是指為一定型號儀器配套的工作站，大都包括了儀器參數(shù)的自動控