1、第35講基因工程考綱明細(xì)1.基因工程的誕生()2.基因工程的原理及技術(shù)(含pcr技術(shù))()3.基因工程的應(yīng)用()4.蛋白質(zhì)工程()5.實(shí)驗(yàn)：dna的粗提取與鑒定知識(shí)自主梳理一基因工程的概念及基本工具1基因工程概念基因工程的別名基因拼接技術(shù)或dna重組技術(shù)操作環(huán)境生物體外操作對(duì)象基因操作原理基因重組操作水平dna分子水平基本過程剪切拼接導(dǎo)入表達(dá)目的創(chuàng)造出更符合人們需要的生物類型和生物產(chǎn)品優(yōu)點(diǎn)克服遠(yuǎn)緣雜交不親和障礙，定向改造生物的遺傳性狀2dna重組技術(shù)的基本工具(1)限制性核酸內(nèi)切酶(簡(jiǎn)稱：限制酶)本質(zhì)：蛋白質(zhì)。來源：主要是從原核生物中分離純化出來的。作用：識(shí)別雙鏈dna分子的某種特定的核苷酸序

2、列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開。結(jié)果：產(chǎn)生黏性末端或平末端。例：如下圖所示，ecor限制酶識(shí)別的堿基序列是gaattc，切割位點(diǎn)在g和a之間；sma限制酶識(shí)別的堿基序列是cccggg，切割位點(diǎn)在c和g之間；說明限制酶具有特異性。限制酶為何不切割自身dna?提示限制酶具有特異性，即一種限制酶只能識(shí)別一種特定的堿基序列，并在特定的位點(diǎn)上進(jìn)行切割。限制酶不切割自身dna的原因是自身dna中不存在該酶的識(shí)別序列或識(shí)別序列已經(jīng)被修飾。(2)dna連接酶作用：將限制酶切割下來的dna片段拼接成新的dna分子。類型常用類型ecoli dna連接酶t4dna連接酶來源大腸桿菌t4

3、噬菌體功能只“縫合”黏性末端“縫合”黏性末端和平末端結(jié)果恢復(fù)被限制酶切開的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵dna連接酶和限制酶的關(guān)系(3)載體載體的作用：攜帶外源dna片段進(jìn)入受體細(xì)胞。常用載體：質(zhì)粒。其他載體：噬菌體衍生物、動(dòng)植物病毒等。質(zhì)粒a概念：質(zhì)粒是一種裸露的、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、獨(dú)立于細(xì)菌擬核dna之外，并具有自我復(fù)制能力的很小的雙鏈環(huán)狀dna分子。b特點(diǎn)：能自我復(fù)制；有一個(gè)至多個(gè)限制酶切割位點(diǎn)；有特殊標(biāo)記基因，供重組dna的鑒定和選擇。二基因工程的基本操作程序1目的基因的獲取目的基因：主要指編碼蛋白質(zhì)的基因，也可以是一些具調(diào)控作用的因子。獲取方法(1)從基因文庫中獲取基因文庫：將含有某種生物不同基

4、因的許多dna片段，導(dǎo)入受體菌的群體中儲(chǔ)存，各個(gè)受體菌分別含有這種生物的不同的基因，可分為基因組文庫和部分基因文庫(如cdna文庫)。構(gòu)建過程基因組文庫的構(gòu)建cdna文庫的構(gòu)建(2)利用pcr技術(shù)擴(kuò)增目的基因pcr含義：是一項(xiàng)在生物體外復(fù)制特定dna片段的核酸合成技術(shù)。pcr原理：dna雙鏈復(fù)制。前提條件：有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根據(jù)這一序列合成引物。要求模板：目的基因兩條鏈。原料：dctp、datp、dgtp、dttp。酶：熱穩(wěn)定dna聚合酶(taq酶)。引物：人工合成的兩條dna片段(引物1，引物2)。pcr反應(yīng)過程過程說明圖解變性當(dāng)溫度上升到9095_時(shí)，雙鏈dna解旋為單鏈

5、復(fù)性溫度下降到5560_時(shí)，兩種引物通過堿基互補(bǔ)配對(duì)與兩條單鏈dna結(jié)合延伸7075 時(shí)，taq酶從引物3端開始進(jìn)行互補(bǔ)鏈的合成方式：指數(shù)形式擴(kuò)增(2n，n為擴(kuò)增循環(huán)的次數(shù))。結(jié)果：短時(shí)間內(nèi)大量擴(kuò)增目的基因。(3)人工合成前提條件：核苷酸序列已知，基因比較小。方法a反轉(zhuǎn)錄法：目的基因的mrna單鏈dna雙鏈dna(目的基因)b化學(xué)合成法：通過dna合成儀直接人工合成2基因表達(dá)載體的構(gòu)建基因工程的核心(1)操作目的使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳給下一代，同時(shí)，使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。(2)組成(3)構(gòu)建過程獲取目的基因與切割載體時(shí)只能用同一種限制酶嗎？提示不是只能用一種限制酶

6、，也可以用不同的限制酶，只要切割后目的基因和載體的黏性末端相同即可。3將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞(1)將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法：最常用的方法。a受體細(xì)胞：植物體細(xì)胞或受精卵。b操作過程：將目的基因插入ti質(zhì)粒的tdna上轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌導(dǎo)入植物細(xì)胞tdna上的目的基因整合到受體細(xì)胞的染色體dna上目的基因表達(dá)。基因槍法：適用于單子葉植物，成本較高。花粉管通道法：將目的基因通過花粉管通道導(dǎo)入受體細(xì)胞，十分簡(jiǎn)便經(jīng)濟(jì)。(2)將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞方法：顯微注射技術(shù)。受體細(xì)胞：動(dòng)物的受精卵。操作過程：將含有目的基因的表達(dá)載體提純?nèi)÷?受精卵)顯微注射受精卵經(jīng)胚胎早期培養(yǎng)后，移植到雌性動(dòng)物的輸卵管或子宮

7、內(nèi)獲得具有新性狀的動(dòng)物。獲得轉(zhuǎn)基因動(dòng)物時(shí)，通常選擇受精卵做受體細(xì)胞的原因？提示受精卵全能性高，可使目的基因在相應(yīng)的組織細(xì)胞內(nèi)表達(dá)。(3)將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞轉(zhuǎn)化方法a用ca2處理細(xì)胞，使細(xì)胞處于一種能吸收周圍環(huán)境中dna分子的生理狀態(tài)(這種細(xì)胞稱為感受態(tài)細(xì)胞)。b感受態(tài)細(xì)胞吸收重組表達(dá)載體dna分子。受體細(xì)胞：原核細(xì)胞(使用最廣泛的是大腸桿菌)。原核生物的特點(diǎn)：繁殖快、多為單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)相對(duì)較少等。4目的基因的檢測(cè)與鑒定類型步驟檢測(cè)內(nèi)容方法分子檢測(cè)第一步轉(zhuǎn)基因生物的dna上是否插入了目的基因dna分子雜交技術(shù)(dna和dna之間)第二步目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mrna分子雜交技術(shù)(dna和m

8、rna之間)第三步目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)抗原抗體雜交技術(shù)個(gè)體生物學(xué)水平鑒定抗蟲或抗病接種實(shí)驗(yàn)，以確定是否有抗性以及抗性的程度(1)不論是復(fù)制水平、轉(zhuǎn)錄水平還是翻譯水平的檢測(cè)，都是在體外進(jìn)行的。(2)在dna分子、mrna分子上檢測(cè)目的基因是否插入、目的基因是否轉(zhuǎn)錄時(shí)，用的探針都是用放射性同位素等作標(biāo)記的含有目的基因的dna片段。三基因工程的應(yīng)用1轉(zhuǎn)基因植物植物基因工程技術(shù)主要用于提高農(nóng)作物的抗逆能力(如抗除草劑、抗蟲、抗病、抗干旱和抗鹽堿等)，以及改良農(nóng)作物的品質(zhì)和利用植物生產(chǎn)藥物等方面。2轉(zhuǎn)基因動(dòng)物動(dòng)物基因工程在動(dòng)物品種改良、建立生物反應(yīng)器、器官移植等方面顯示了廣闊的應(yīng)用前景。3基因工程藥

9、物(1)來源：轉(zhuǎn)基因的工程菌。(2)成果：細(xì)胞因子、抗體、疫苗、激素等。(3)作用：用來預(yù)防和治療人類腫瘤、心血管疾病、遺傳病、各種傳染病、糖尿病、類風(fēng)濕等疾病。4基因治療(1)方法：把正常基因?qū)氩∪梭w內(nèi)，使該基因的表達(dá)產(chǎn)物發(fā)揮功能。(2)效果：治療遺傳病的最有效的手段。(3)分類：體內(nèi)基因治療和體外基因治療。四蛋白質(zhì)工程1概念：蛋白質(zhì)工程是指以蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)規(guī)律及其與生物功能的關(guān)系作為基礎(chǔ)，通過基因修飾或基因合成，對(duì)現(xiàn)有蛋白質(zhì)進(jìn)行改造，或制造一種新的蛋白質(zhì)，以滿足人類生產(chǎn)和生活的需求。2基本途徑：預(yù)期蛋白質(zhì)功能設(shè)計(jì)預(yù)期蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)推測(cè)應(yīng)有的氨基酸序列找到對(duì)應(yīng)的脫氧核苷酸序列(基因)。考點(diǎn)題

10、型突破考點(diǎn)1基因工程的操作工具1下列關(guān)于載體的相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是()a目前常用的載體有質(zhì)粒、噬菌體的衍生物和動(dòng)植物病毒b天然質(zhì)粒均可以直接用作載體將目的基因送入受體細(xì)胞c載體dna分子上要有一個(gè)至多個(gè)限制酶切割位點(diǎn)d載體上的標(biāo)記基因有利用篩選含重組dna的細(xì)胞答案b解析天然質(zhì)粒往往不能直接作為載體，要根據(jù)不同的目的和需求進(jìn)行人工改造。2(2016全國(guó)卷)圖a中的三個(gè)dna片段上依次表示出了ecor、bamh和sau3a三種限制性內(nèi)切酶的識(shí)別序列與切割位點(diǎn)，圖b為某種表達(dá)載體的示意圖(載體上的ecor、sau3a的切點(diǎn)是唯一的)。根據(jù)基因工程的有關(guān)知識(shí)，回答下列問題：(1)經(jīng)bamh酶切后得到的目

11、的基因可以與上述表達(dá)載體被_酶切后的產(chǎn)物連接，理由是_。(2)若某人利用圖b所示的表達(dá)載體獲得了甲、乙、丙三種含有目的基因的重組子，如圖c所示。這三種重組子中，不能在宿主細(xì)胞中表達(dá)目的基因產(chǎn)物的有_，不能表達(dá)的原因是_。(3)dna連接酶是將兩個(gè)dna片段連接起來的酶，常見的有_和_，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是_。答案(1)sau3a兩種酶切割后產(chǎn)生的片段具有相同的黏性末端(2)甲和丙甲中目的基因插入在啟動(dòng)子的上游，丙中目的基因插入在終止子的下游，二者的目的基因均不能被轉(zhuǎn)錄(其他合理答案也可)(3)ecoli dna連接酶t4dna連接酶t4dna連接酶(其他合理答案也可)解析(1

12、)分析圖a可知，限制酶sau3a 與bamh 切割dna后形成的黏性末端相同，故經(jīng)這兩種酶切割得到的產(chǎn)物可以用dna連接酶進(jìn)行連接。(2)構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，為保證目的基因能在宿主細(xì)胞中成功表達(dá)，目的基因應(yīng)插入在啟動(dòng)子和終止子之間，據(jù)此可判斷甲、丙均不符合要求，目的基因均不能被轉(zhuǎn)錄。(3)常見的dna連接酶有ecoli dna連接酶和t4dna連接酶，其中t4dna連接酶既能連接黏性末端又能連接平末端。 與dna相關(guān)的六種酶的比較名稱作用部位底物作用結(jié)果限制酶磷酸二酯鍵dna將dna切成兩個(gè)片段dna連接酶磷酸二酯鍵dna片段將兩個(gè)dna片段連接為一個(gè)dna分子dna聚合酶磷酸二酯鍵脫氧核苷酸

13、以單鏈dna為模板，將單個(gè)脫氧核苷酸依次連接到單鏈末端dna(水解)酶磷酸二酯鍵dna將dna片段水解為單個(gè)脫氧核苷酸解旋酶堿基對(duì)之間的氫鍵dna將雙鏈dna分子局部解旋為單鏈rna聚合酶磷酸二酯鍵核糖核苷酸以dna一條鏈為模板，將單個(gè)核糖核苷酸依次連接到單鏈末端考點(diǎn)2基因工程的基本操作程序1(2017江蘇高考)金屬硫蛋白(mt)是一類廣泛存在的金屬結(jié)合蛋白，某研究小組計(jì)劃通過多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(pcr)擴(kuò)增獲得目的基因，構(gòu)建轉(zhuǎn)基因工程菌，用于重金屬廢水的凈化處理。pcr擴(kuò)增過程示意圖如下，請(qǐng)回答下列問題：(1)從高表達(dá)mt蛋白的生物組織中提取mrna，通過_獲得_用于pcr擴(kuò)增。(2)設(shè)計(jì)一對(duì)與

14、mt基因兩端序列互補(bǔ)配對(duì)的引物(引物1和引物2)，為方便構(gòu)建重組質(zhì)粒，在引物中需要增加適當(dāng)?shù)腳位點(diǎn)。設(shè)計(jì)引物時(shí)需要避免引物之間發(fā)生_，而造成引物自連。(3)圖中步驟1代表_，步驟2代表退火，步驟3代表延伸，這三個(gè)步驟組成一輪循環(huán)。(4)pcr擴(kuò)增時(shí)，退火溫度的設(shè)定是成敗的關(guān)鍵。退火溫度過高會(huì)破壞_的堿基配對(duì)。退火溫度的設(shè)定與引物長(zhǎng)度、堿基組成有關(guān)，長(zhǎng)度相同但_的引物需要設(shè)定更高的退火溫度。(5)如果pcr反應(yīng)得不到任何擴(kuò)增產(chǎn)物，則可以采取的改進(jìn)措施有_(填序號(hào)：升高退火溫度降低退火溫度重新設(shè)計(jì)引物)。答案(1)逆轉(zhuǎn)錄cdna(2)限制性核酸內(nèi)切酶識(shí)別堿基互補(bǔ)配對(duì)(3)變性(4)引物與模板gc含

15、量高(5)解析(4)退火溫度過高，會(huì)破壞引物與模板的堿基配對(duì)。因a、t之間形成兩個(gè)氫鍵，g、c之間形成三個(gè)氫鍵，g、c含量高的引物與模板之間氫鍵多，穩(wěn)定性高，破壞氫鍵需要更多的能量，所以可以設(shè)定更高的退火溫度。(5)如果pcr反應(yīng)得不到任何擴(kuò)增產(chǎn)物，可能的原因是退火溫度過高，或者設(shè)計(jì)的引物不合適，不能與模板結(jié)合。因此可采取的改進(jìn)措施有降低退火溫度、重新設(shè)計(jì)引物等。2(2019成都一診)用基因工程技術(shù)生產(chǎn)羧酸酯酶(care)制劑的流程如圖所示。回答下列問題：(1)過程所需的酶是_。從cdna文庫中獲取的目的基因_(填“有”或“無”)啟動(dòng)子。實(shí)現(xiàn)過程常用_技術(shù)，運(yùn)用該技術(shù)的前提是要有_，以便合成引

16、物。(2)過程將重組表達(dá)載體導(dǎo)入大腸桿菌時(shí)，首先用ca2處理大腸桿菌，目的是_。然后將_溶于緩沖液中與該大腸桿菌混合，在一定溫度下完成轉(zhuǎn)化。(3)過程可利用_技術(shù)鑒定care基因是否已導(dǎo)入大腸桿菌。答案(1)逆轉(zhuǎn)錄酶無pcr一段已知目的基因的核苷酸序列(2)使大腸桿菌處于較易吸收周圍環(huán)境中dna分子的生理狀態(tài)重組表達(dá)載體(重組質(zhì)粒)(3)dna分子雜交解析(1)過程是以mrna為模板合成cdna的逆轉(zhuǎn)錄(反轉(zhuǎn)錄)過程，此過程需要逆轉(zhuǎn)錄酶的參與。mrna中無啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄片段，所以從cdna文庫中獲取的目的基因無啟動(dòng)子。過程可表示使用pcr技術(shù)擴(kuò)增目的基因的過程，運(yùn)用該技術(shù)的前提是要有一段已知目的

17、基因的核苷酸序列，以便合成引物。(2)過程表示將重組表達(dá)載體導(dǎo)入大腸桿菌。用ca2處理大腸桿菌的目的是使大腸桿菌處于較易吸收周圍環(huán)境中dna分子的生理狀態(tài)，然后將重組表達(dá)載體溶于緩沖液中與該大腸桿菌混合，在一定溫度下完成轉(zhuǎn)化。(3)過程是目的基因的檢測(cè)與鑒定，可利用dna分子雜交技術(shù)鑒定目的基因(即care基因)是否導(dǎo)入大腸桿菌。3(2016全國(guó)卷)某一質(zhì)粒載體如圖所示，外源dna插入到ampr或tetr中會(huì)導(dǎo)致相應(yīng)的基因失活(ampr表示氨芐青霉素抗性基因，tetr表示四環(huán)素抗性基因)。有人將此質(zhì)粒載體用bamh 酶切后，與用bamh 酶切獲得的目的基因混合，加入dna連接酶進(jìn)行連接反應(yīng)，用

18、得到的混合物直接轉(zhuǎn)化大腸桿菌。結(jié)果大腸桿菌有的未被轉(zhuǎn)化，有的被轉(zhuǎn)化。被轉(zhuǎn)化的大腸桿菌有三種，分別是含有環(huán)狀目的基因、含有質(zhì)粒載體、含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒的大腸桿菌。回答下列問題：(1)質(zhì)粒載體作為基因工程的工具，應(yīng)具備的基本條件有_(答出兩點(diǎn)即可)，而作為基因表達(dá)載體，除滿足上述基本條件外，還需具有啟動(dòng)子和終止子。(2)如果用含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基進(jìn)行篩選，在上述四種大腸桿菌細(xì)胞中，未被轉(zhuǎn)化的和僅含環(huán)狀目的基因的細(xì)胞是不能區(qū)分的，其原因是_；并且_和_的細(xì)胞也是不能區(qū)分的，其原因是_。在上述篩選的基礎(chǔ)上，若要篩選含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒的大腸桿菌單菌落，還需使用含有_的固體培養(yǎng)基。(

19、3)基因工程中，某些噬菌體經(jīng)改造后可以作為載體，其dna復(fù)制所需的原料來自于_。答案(1)能自我復(fù)制、具有標(biāo)記基因(2)二者均不含有氨芐青霉素抗性基因，在該培養(yǎng)基上均不生長(zhǎng)含有質(zhì)粒載體含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒(或含有重組質(zhì)粒)二者均含有氨芐青霉素抗性基因，在該培養(yǎng)基上均能生長(zhǎng)四環(huán)素(3)受體細(xì)胞解析(1)質(zhì)粒作為載體應(yīng)具備的基本條件有：能自我復(fù)制、具有標(biāo)記基因、含有一至多個(gè)限制酶切割位點(diǎn)等。(2)由題意可知，未被轉(zhuǎn)化的和僅含環(huán)狀目的基因的細(xì)胞中均不含有氨芐青霉素抗性基因，所以在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上均不能生長(zhǎng)。質(zhì)粒載體上含有氨芐青霉素抗性基因和四環(huán)素抗性基因，插入了目的基因的重組質(zhì)粒中僅

20、含有氨芐青霉素抗性基因(四環(huán)素抗性基因被破壞)，所以含有質(zhì)粒載體和含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒的細(xì)胞均能在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，但前者可以在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)而后者不能，所以可用含有四環(huán)素的培養(yǎng)基，篩選出含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒的大腸桿菌單菌落。(3)噬菌體屬于病毒，病毒增殖過程中所需的原料、酶等均來自于受體細(xì)胞。4(2019河南省九師聯(lián)盟高三質(zhì)檢)內(nèi)皮抑素是從血管內(nèi)皮細(xì)胞瘤中分離出的一種內(nèi)源性血管生成抑制因子，能特異性地抑制內(nèi)皮細(xì)胞增殖和遷移。某小組為獲得內(nèi)皮抑素，構(gòu)建分泌型內(nèi)皮抑素基因表達(dá)載體，并在c6細(xì)胞(大鼠源性膠質(zhì)瘤細(xì)胞)中表達(dá)。具體操作如下：(1)構(gòu)建分泌型內(nèi)皮抑

21、素基因表達(dá)載體采用相關(guān)技術(shù)提取1日齡sd大鼠大腦半球組織中的總rna，檢測(cè)rna質(zhì)量和濃度。內(nèi)皮抑素cdna的獲得：以上述提取的rna為模板，通過_過程獲得cdna，并利用pcr技術(shù)體外擴(kuò)增cdna。pcr技術(shù)中除需目的基因作為模板外，還需要的條件有_和控制溫度等。為避免目的基因和載體自身環(huán)化，酶切目的基因和載體時(shí)，可用_酶切割，以保證目的基因和載體兩側(cè)具有_。(2)目的基因在c6細(xì)胞中表達(dá)(將目的基因?qū)隿6細(xì)胞中，并表達(dá))培養(yǎng)c6細(xì)胞時(shí)，為防止雜菌污染，同時(shí)檢測(cè)目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞，可在培養(yǎng)基中加入一定量的_。若要檢測(cè)目的基因是否成功整合到受體細(xì)胞的dna上，可采用_技術(shù)。導(dǎo)入c6細(xì)胞

22、中的目的基因成功表達(dá)后，可能會(huì)使c6細(xì)胞在大鼠體內(nèi)的_受到抑制。答案(1)逆轉(zhuǎn)錄熱穩(wěn)定dna聚合酶(taq酶)、兩種引物、四種脫氧核苷酸兩種限制性核酸內(nèi)切(限制)不同的黏性末端(2)抗生素dna分子雜交增殖和遷移解析(1)遺傳信息從rna到dna的過程叫逆轉(zhuǎn)錄。pcr技術(shù)中除需目的基因作為模板外，還需要的條件有熱穩(wěn)定dna聚合酶(taq酶)、兩種引物、四種脫氧核苷酸和控制溫度等。為避免目的基因和載體自身環(huán)化，酶切目的基因和載體時(shí)，可用雙酶切法，即兩種限制性核酸內(nèi)切(限制)酶切割，以保證目的基因兩側(cè)和載體上具有不同的黏性末端。(2)在培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)，為防止雜菌污染，同時(shí)檢測(cè)目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞，

23、可在培養(yǎng)基中加入一定量的抗生素。若要檢測(cè)目的基因是否成功整合到受體細(xì)胞的dna上，可采用dna分子雜交技術(shù)。根據(jù)題干信息可知，導(dǎo)入c6細(xì)胞中的目的基因成功表達(dá)后，會(huì)使c6細(xì)胞在大鼠體內(nèi)的增殖和遷移受到抑制。 1.基因表達(dá)載體構(gòu)建時(shí)限制酶的選擇(1)根據(jù)目的基因兩端的限制酶切點(diǎn)確定限制酶的種類應(yīng)選擇切點(diǎn)位于目的基因兩端的限制酶，如圖甲可選擇pst、pst和ecor。不能選擇切點(diǎn)位于目的基因內(nèi)部的限制酶，如圖甲不能選擇sma。為避免目的基因和質(zhì)粒的自身環(huán)化和隨意連接，也可使用不同的限制酶切割目的基因和質(zhì)粒，如圖甲選擇用pst和ecor兩種限制酶(但要確保質(zhì)粒上也有這兩種酶的切點(diǎn))。(2)根據(jù)質(zhì)粒的

24、特點(diǎn)確定限制酶的種類所選限制酶要與切割目的基因的限制酶相一致(也可以是能形成相同黏性末端的不同限制酶)，以確保具有相同的黏性末端。質(zhì)粒作為載體必須具備標(biāo)記基因等，所以所選擇的限制酶盡量不要破壞這些結(jié)構(gòu)，如圖乙中限制酶sma會(huì)破壞標(biāo)記基因；如果所選酶的切點(diǎn)不止一個(gè)，則切割重組后可能會(huì)丟失某些片段，若丟失的片段含復(fù)制起點(diǎn)區(qū)，則切割重組后的片段進(jìn)入受體細(xì)胞后將不能自主復(fù)制。2基因表達(dá)載體中啟動(dòng)子、終止子的來源(1)如果目的基因是從自然界中已有的物種中分離出來的，目的基因中已含有啟動(dòng)子、終止子，在構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，不需要在質(zhì)粒上接上特定的啟動(dòng)子、終止子。(2)如果目的基因是通過人工方法合成的，或通過

25、cdna文庫獲得的，則目的基因是不含啟動(dòng)子和終止子的。因此，在構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，需要在與質(zhì)粒結(jié)合之前，在目的基因的前后端接上特定的啟動(dòng)子、終止子。3.如何篩選出含有目的基因的受體細(xì)胞(1)原理：將目的基因插入含有兩種抗生素抗性基因的載體時(shí)，如果插入某種抗生素抗性基因內(nèi)部，則會(huì)導(dǎo)致該抗生素抗性基因失活。如圖，目的基因插入了四環(huán)素抗性基因內(nèi)部，則四環(huán)素抗性基因失活。(2)被轉(zhuǎn)化的細(xì)菌有三種：含環(huán)狀目的基因的細(xì)菌、含重組質(zhì)粒的細(xì)菌、含質(zhì)粒的細(xì)菌。(3)篩選方法：將轉(zhuǎn)化后的細(xì)菌先放在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，能生長(zhǎng)的是含重組質(zhì)粒的細(xì)菌和含質(zhì)粒的細(xì)菌，如圖1、2、3、4、5菌落，再利用滅菌的絨布影印

26、到含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上，如圖能生長(zhǎng)的菌落為2、3、4，則在含四環(huán)素培養(yǎng)基上不生長(zhǎng)的即為含有目的基因的菌落，如圖1、5菌落。最后，可在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上挑取1、5菌落進(jìn)行培養(yǎng)。考點(diǎn)3基因工程的應(yīng)用及蛋白質(zhì)工程題型一 基因工程的應(yīng)用1(2019山東聊城二模)普通番茄細(xì)胞中含有pg基因，其能控制合成多聚半乳糖醛酸酶(簡(jiǎn)稱pg)，pg能破壞細(xì)胞壁使番茄軟化不耐貯藏。科學(xué)家將抗pg基因?qū)敕鸭?xì)胞，培育出了抗軟化、保鮮時(shí)間長(zhǎng)的轉(zhuǎn)基因番茄。如圖表示抗pg基因的作用原理，回答下列問題：(1)據(jù)圖回答該轉(zhuǎn)基因番茄具有抗軟化、保鮮時(shí)間長(zhǎng)的原理是_。(2)為培育抗軟化番茄，應(yīng)采用_技術(shù)將抗pg基因進(jìn)行體外擴(kuò)增

27、。在該技術(shù)的反應(yīng)體系中除模板、引物、原料外，還需要加入_，這個(gè)基因的表達(dá)需要_等不可缺少的調(diào)控組件。(3)將抗pg基因插入ti質(zhì)粒的_上構(gòu)建基因表達(dá)載體，通過農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將抗pg基因?qū)敕鸭?xì)胞，為檢驗(yàn)抗pg基因是否成功表達(dá)，在個(gè)體生物學(xué)水平上應(yīng)檢測(cè)_。(4)為避免抗pg基因通過花粉傳播進(jìn)入其他植物而導(dǎo)致“基因污染”，應(yīng)將抗pg基因?qū)隷(填“細(xì)胞核”或“細(xì)胞質(zhì)”)。答案(1)抗pg基因能阻止pg基因表達(dá)的翻譯過程，使細(xì)胞不能合成pg(2)pcr(多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))熱穩(wěn)定dna聚合酶(taq酶)啟動(dòng)子、終止子(3)tdna轉(zhuǎn)基因番茄是否抗軟化以及保鮮時(shí)間的長(zhǎng)短(4)細(xì)胞質(zhì)解析(1)據(jù)題圖可知，抗

28、pg基因轉(zhuǎn)錄成的mrna能夠與pg基因轉(zhuǎn)錄成的mrna結(jié)合，阻止了pg基因表達(dá)的翻譯過程，使細(xì)胞不能合成pg，不能破壞細(xì)胞壁而使轉(zhuǎn)基因番茄抗軟化且保鮮時(shí)間延長(zhǎng)。(2)采用pcr技術(shù)將抗pg基因進(jìn)行體外擴(kuò)增；pcr過程所需要的條件有：模板(抗pg基因)、引物、原料、熱穩(wěn)定dna聚合酶；啟動(dòng)子、終止子等是基因表達(dá)不可缺少的調(diào)控組件。(3)將抗pg基因插入ti質(zhì)粒的tdna上構(gòu)建基因表達(dá)載體，通過農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將抗pg基因?qū)敕鸭?xì)胞，為檢驗(yàn)抗pg基因是否成功表達(dá)，在個(gè)體生物學(xué)水平上應(yīng)檢測(cè)轉(zhuǎn)基因番茄是否抗軟化以及保鮮時(shí)間的長(zhǎng)短。(4)花粉中的雄配子幾乎不含質(zhì)基因，所以為避免抗pg基因通過花粉傳播進(jìn)入其

29、他植物而導(dǎo)致“基因污染”，應(yīng)將抗pg基因?qū)爰?xì)胞質(zhì)。 有關(guān)基因工程應(yīng)用的四個(gè)易錯(cuò)點(diǎn)(1)動(dòng)物基因工程主要是為了改善畜產(chǎn)品的品質(zhì)，而不是為了產(chǎn)生體型巨大的個(gè)體。(2)bt毒蛋白基因控制合成的bt毒蛋白并無毒性，進(jìn)入昆蟲消化道被分解成多肽后產(chǎn)生毒性。(3)青霉素是青霉菌產(chǎn)生的，不是通過基因工程產(chǎn)生的。(4)并非所有個(gè)體都可作為乳腺生物反應(yīng)器。操作成功的應(yīng)該是雌性個(gè)體，個(gè)體本身的繁殖速度較高，泌乳量、蛋白含量等都是應(yīng)該考慮的因素。題型二 蛋白質(zhì)工程2(2015全國(guó)卷)已知生物體內(nèi)有一種蛋白質(zhì)(p)，該蛋白質(zhì)是一種轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，由305個(gè)氨基酸組成。如果將p分子中158位的絲氨酸變成亮氨酸，240位的谷氨

30、酰胺變成苯丙氨酸，改變后的蛋白質(zhì)(p1)不但保留p的功能，而且具有了酶的催化活性。回答下列問題：(1)從上述資料可知，若要改變蛋白質(zhì)的功能，可以考慮對(duì)蛋白質(zhì)的_進(jìn)行改造。(2)以p基因序列為基礎(chǔ)，獲得p1基因的途徑有修飾_基因或合成_基因。所獲得的基因表達(dá)時(shí)是遵循中心法則的，中心法則的全部?jī)?nèi)容包括_的復(fù)制，以及遺傳信息在不同分子之間的流動(dòng)，即：_。(3)蛋白質(zhì)工程也被稱為第二代基因工程，其基本途徑是從預(yù)期蛋白質(zhì)功能出發(fā)，通過_和_，進(jìn)而確定相對(duì)應(yīng)的脫氧核苷酸序列，據(jù)此獲得基因，再經(jīng)表達(dá)、純化獲得蛋白質(zhì)，之后還需要對(duì)蛋白質(zhì)的生物_進(jìn)行鑒定。答案(1)氨基酸序列(或結(jié)構(gòu))(2)pp1dna和rna

31、(或遺傳物質(zhì))dnarna、rnadna、rna蛋白質(zhì)(或轉(zhuǎn)錄、逆轉(zhuǎn)錄、翻譯)(3)設(shè)計(jì)蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)推測(cè)氨基酸序列功能解析(1)從題中所述資料可知，將p分子中158位的絲氨酸變成亮氨酸，240位的谷氨酰胺變成苯丙氨酸后，該蛋白質(zhì)的功能發(fā)生了改變，此過程對(duì)構(gòu)成蛋白質(zhì)的氨基酸序列進(jìn)行改造，進(jìn)而改變了蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)，從而改變了蛋白質(zhì)的功能。(2)在蛋白質(zhì)工程中，目的基因可以以p基因序列為基礎(chǔ)，對(duì)生物體內(nèi)原有p基因進(jìn)行修飾，也可以通過人工合成法合成新的p1基因。所獲得的基因表達(dá)遵循中心法則，中心法則的全部?jī)?nèi)容包括dna和rna復(fù)制，以及遺傳信息在不同分子之間的流動(dòng)，即dnarna，rnadna，rna蛋

32、白質(zhì)。(3)蛋白質(zhì)工程的基本途徑是預(yù)期蛋白質(zhì)功能設(shè)計(jì)預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)推測(cè)應(yīng)有的氨基酸序列合成dna表達(dá)出蛋白質(zhì)，經(jīng)過該過程得到的蛋白質(zhì)，需要對(duì)其生物功能進(jìn)行鑒定，以保證其發(fā)揮正常作用。 蛋白質(zhì)工程與基因工程的比較項(xiàng)目蛋白質(zhì)工程基因工程區(qū)別過程預(yù)期的蛋白質(zhì)功能設(shè)計(jì)預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)推測(cè)應(yīng)有的氨基酸序列找到相應(yīng)的脫氧核苷酸序列(基因)獲取目的基因構(gòu)建基因表達(dá)載體將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞目的基因的檢測(cè)與鑒定實(shí)質(zhì)定向改造或生產(chǎn)人類所需的蛋白質(zhì)定向改造生物的遺傳特性，以獲得人類所需的生物類型或生物產(chǎn)品結(jié)果生產(chǎn)自然界中沒有的蛋白質(zhì)生產(chǎn)自然界中已有的蛋白質(zhì)聯(lián)系蛋白質(zhì)工程是在基因工程的基礎(chǔ)上延伸出來的第二代基因工

33、程，是對(duì)現(xiàn)有蛋白質(zhì)的改造或制造新的蛋白質(zhì)，必須通過基因修飾或基因合成實(shí)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)16dna的粗提取與鑒定1dna粗提取和鑒定的原理(1)提取思路：利用dna和其他物質(zhì)在理化性質(zhì)方面的差異，提取dna。(2)dna的理化性質(zhì)(提取和鑒定原理)：dna在不同濃度的nacl溶液中的溶解度不同dna不溶于酒精；對(duì)酶、高溫和洗滌劑的耐受性強(qiáng)；dna二苯胺試劑藍(lán)色。2dna粗提取和鑒定的操作流程1(2019揚(yáng)州江都中學(xué)段考)下列有關(guān)“dna的粗提取與鑒定”實(shí)驗(yàn)的敘述，錯(cuò)誤的是()adna既溶于2 mol/l的nacl溶液也溶于蒸餾水b向雞血細(xì)胞液中加蒸餾水是為了釋放出dnac向濃鹽溶液中加蒸餾水是為了析出dn

34、ad用菜花替代雞血做實(shí)驗(yàn)，其實(shí)驗(yàn)操作步驟相同答案d解析dna既溶于2 mol/l的nacl溶液也溶于蒸餾水，a正確；向雞血細(xì)胞液中加蒸餾水是為了讓雞血細(xì)胞吸水漲破，從而釋放出dna，b正確；向溶解dna的濃鹽溶液中加蒸餾水是為了降低dna的溶解度，進(jìn)而析出dna，c正確；用菜花替代雞血作為實(shí)驗(yàn)材料，其實(shí)驗(yàn)操作步驟不完全相同，如植物細(xì)胞有細(xì)胞壁，破碎細(xì)胞時(shí)需要充分?jǐn)嚢韬脱心ゲ⒓尤胧雏}和洗滌劑，d錯(cuò)誤。2下列關(guān)于“dna的粗提取和鑒定”實(shí)驗(yàn)依據(jù)原理的敘述，錯(cuò)誤的是()a利用dna不溶于酒精溶液，而蛋白質(zhì)能溶于酒精溶液，可將dna與蛋白質(zhì)分離b利用高溫能使蛋白質(zhì)變性，卻對(duì)dna沒有影響的特性，可將d

35、na與蛋白質(zhì)分離c二苯胺與dna沸水浴呈現(xiàn)藍(lán)色可用于dna的鑒定d在dna濾液中加入嫩肉粉，通過木瓜蛋白酶的作用，可將dna與蛋白質(zhì)分離答案b解析高溫能使蛋白質(zhì)、dna變性，蛋白質(zhì)在6080 發(fā)生變性，dna在80 以上變性。3下列關(guān)于“dna粗提取與鑒定”實(shí)驗(yàn)的敘述，正確的是()選項(xiàng)試劑操作作用a檸檬酸鈉溶液與雞血混合防止血液凝固b蒸餾水與雞血細(xì)胞混合保持細(xì)胞形狀c蒸餾水加入到溶解有dna的nacl溶液中析出蛋白質(zhì)d冷卻的酒精加入到過濾后含dna的nacl溶液中產(chǎn)生特定的顏色反應(yīng)答案a解析蒸餾水與雞血細(xì)胞混合的目的是使紅細(xì)胞吸水漲破，釋放出核物質(zhì)，b錯(cuò)誤；將蒸餾水加入到溶解有dna的nacl

36、溶液中，其目的是降低dna的溶解度，初步析出dna，c錯(cuò)誤；加入冷卻酒精的目的是進(jìn)一步析出dna，d錯(cuò)誤。 dna的粗提取與鑒定實(shí)驗(yàn)中的“2、4、4”加蒸餾水2次加到雞血細(xì)胞液中，使血細(xì)胞吸水漲破；加到含dna的2 mol/l的nacl溶液中，使nacl溶液的物質(zhì)的量濃度稀釋到0.14 mol/l，使dna析出用紗布過濾4次過濾血細(xì)胞破裂液，得到含細(xì)胞核物質(zhì)的濾液；過濾用2 mol/l的nacl溶液充分溶解的dna，濾去溶液中的雜質(zhì)；濾取0.14 mol/l的nacl溶液中析出的dna(黏稠物)；過濾溶有dna的2 mol/l的nacl溶液用nacl溶液4次加2 mol/l的nacl溶液，溶解

37、提取的細(xì)胞核物質(zhì)；用0.14 mol/l的nacl溶液使dna析出；用2 mol/l的nacl溶液，溶解濾取的dna黏稠物；用2 mol/l的nacl溶液，溶解絲狀物用于鑒定dna方向真題體驗(yàn)1(2019全國(guó)卷)基因工程中可以通過pcr技術(shù)擴(kuò)增目的基因。回答下列問題。(1)基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得。基因文庫包括_和_。(2)生物體細(xì)胞內(nèi)的dna復(fù)制開始時(shí)，解開dna雙鏈的酶是_。在體外利用pcr技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，使反應(yīng)體系中的模板dna解鏈為單鏈的條件是_。上述兩個(gè)解鏈過程的共同點(diǎn)是破壞了dna雙鏈分子中的_。(3)目前在pcr反應(yīng)中使用taq酶而不使用大

38、腸桿菌dna聚合酶的主要原因是_。答案(1)基因組文庫cdna文庫(2)解旋酶加熱至9095 氫鍵(3)taq酶熱穩(wěn)定性高，而大腸桿菌dna聚合酶在高溫下會(huì)失活解析(1)基因工程中的基因文庫包括基因組文庫和部分基因文庫(cdna文庫)。(2)生物體細(xì)胞內(nèi)的dna復(fù)制開始時(shí)，通過解旋酶解開dna雙鏈。在體外利用pcr技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，通過高溫(9095 )使反應(yīng)體系中的模板dna解鏈為單鏈。上述兩個(gè)解鏈過程的共同點(diǎn)是破壞了dna雙鏈分子中的氫鍵。(3)大腸桿菌dna聚合酶不耐高溫，在高溫下會(huì)失活，而pcr反應(yīng)體系中加入的聚合酶需耐高溫，故在pcr反應(yīng)中要用能耐高溫的taq酶。2(2018全國(guó)卷

39、)某種熒光蛋白(gfp)在紫外光或藍(lán)光激發(fā)下會(huì)發(fā)出綠色熒光，這一特性可用于檢測(cè)細(xì)胞中目的基因的表達(dá)。某科研團(tuán)隊(duì)將某種病毒的外殼蛋白(l1)基因連接在gfp基因的5末端，獲得了l1gfp融合基因(簡(jiǎn)稱為甲)，并將其插入質(zhì)粒p0，構(gòu)建了真核表達(dá)載體p1，其部分結(jié)構(gòu)和酶切位點(diǎn)的示意圖如下，圖中e1e4四種限制酶產(chǎn)生的黏性末端各不相同。回答下列問題：(1)據(jù)圖推斷，該團(tuán)隊(duì)在將甲插入質(zhì)粒p0時(shí)，使用了兩種限制酶，這兩種酶是_。使用這兩種酶進(jìn)行酶切是為了保證_，也是為了保證_。(2)將p1轉(zhuǎn)入體外培養(yǎng)的牛皮膚細(xì)胞后，若在該細(xì)胞中觀察到了綠色熒光，則說明l1基因在牛的皮膚細(xì)胞中完成了_和_過程。(3)為了獲

40、得含有甲的牛，該團(tuán)隊(duì)需要做的工作包括：將能夠產(chǎn)生綠色熒光細(xì)胞的_移入牛的_中、體外培養(yǎng)、胚胎移植等。(4)為了檢測(cè)甲是否存在于克隆牛的不同組織細(xì)胞中，某同學(xué)用pcr方法進(jìn)行鑒定。在鑒定時(shí)應(yīng)分別以該牛不同組織細(xì)胞中的_(填“mrna”“總rna”或“核dna”)作為pcr模板。答案(1)e1和e4甲的完整甲與載體正確連接(2)轉(zhuǎn)錄翻譯(3)細(xì)胞核去核卵母細(xì)胞(4)核dna解析(1)甲是將某種病毒的外殼蛋白(l1)基因連接在gfp基因的5末端而獲得的l1gfp融合基因，據(jù)此結(jié)合題意并分析圖示可知：該團(tuán)隊(duì)在將甲插入質(zhì)粒p0時(shí)，如果用e2或e3，則目的基因不完整，而使用e1和e4這兩種限制酶進(jìn)行酶切保

41、證了甲的完整，而且也保證了甲與載體正確連接，因此，使用的兩種限制酶是e1和e4。(2)構(gòu)建的真核表達(dá)載體p1中含有g(shù)fp基因，而gfp基因的表達(dá)產(chǎn)物“某種熒光蛋白(gfp)”在紫外光或藍(lán)光激發(fā)下會(huì)發(fā)出綠色熒光。若在導(dǎo)入p1的牛皮膚細(xì)胞中觀察到了綠色熒光，則說明l1基因在牛的皮膚細(xì)胞中完成了表達(dá)。基因的表達(dá)過程包括轉(zhuǎn)錄和翻譯。(3)若要獲得含有甲的牛，可采用核移植技術(shù)，即將能夠產(chǎn)生綠色熒光細(xì)胞的細(xì)胞核移入牛的去核卵母細(xì)胞中獲得重組細(xì)胞，并將該重組細(xì)胞在體外培養(yǎng)成重組胚胎，再經(jīng)過胚胎移植等獲得含有甲的牛。(4)pcr是多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的縮寫，是一種在生物體外復(fù)制特定dna片段的核酸合成技術(shù)。若利用p

42、cr方法檢測(cè)甲是否存在于克隆牛的不同組織細(xì)胞中，則應(yīng)分別以該牛不同組織細(xì)胞中的核dna作為pcr模板。3(2018天津高考)甲型流感病毒為rna病毒，易引起流感大規(guī)模流行。我國(guó)科學(xué)家在2017年發(fā)明了一種制備該病毒活疫苗的新方法，主要環(huán)節(jié)如下。(1)改造病毒的部分基因，使其失去在正常宿主細(xì)胞內(nèi)的增殖能力。以病毒rna為模板，逆轉(zhuǎn)錄成對(duì)應(yīng)dna后，利用_技術(shù)擴(kuò)增，并將其中某些基因(不包括表面抗原基因)內(nèi)個(gè)別編碼氨基酸的序列替換成編碼終止密碼子的序列。與改造前的基因相比，改造后的基因表達(dá)時(shí)不能合成完整長(zhǎng)度的_，因此不能產(chǎn)生子代病毒。將該改造基因、表面抗原基因等其他基因分別構(gòu)建重組質(zhì)粒，并保存。(2

43、)構(gòu)建適合改造病毒增殖的轉(zhuǎn)基因宿主細(xì)胞。設(shè)計(jì)合成一種特殊trna的基因，其產(chǎn)物的反密碼子能與(1)中的終止密碼子配對(duì)結(jié)合，并可攜帶一個(gè)非天然氨基酸(uaa)。將該基因與_連接后導(dǎo)入宿主細(xì)胞。提取宿主細(xì)胞的_進(jìn)行分子雜交鑒定，篩選獲得成功表達(dá)上述trna的轉(zhuǎn)基因宿主細(xì)胞。(3)利用轉(zhuǎn)基因宿主細(xì)胞制備疫苗。將(1)中的重組質(zhì)粒導(dǎo)入(2)中的轉(zhuǎn)基因宿主細(xì)胞，并在補(bǔ)加_的培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，則該宿主細(xì)胞能利用上述特殊trna，翻譯出改造病毒基因的完整蛋白，產(chǎn)生大量子代病毒，用于制備疫苗。特殊trna基因轉(zhuǎn)錄時(shí)，識(shí)別其啟動(dòng)子的酶是_(單選)。a病毒的dna聚合酶 b宿主的dna聚合酶c病毒的rna聚合酶

44、d宿主的rna聚合酶(4)上述子代病毒不能在正常宿主細(xì)胞中增殖，沒有致病性，因此不經(jīng)滅活或減毒即可制成疫苗。與不具侵染性的流感病毒滅活疫苗相比，該病毒活疫苗的優(yōu)勢(shì)之一是可引起_免疫，增強(qiáng)免疫保護(hù)效果。答案(1)pcr多肽(或蛋白質(zhì))(2)載體總rna(3)非天然氨基酸(uaa)d(4)細(xì)胞解析(1)利用pcr技術(shù)體外擴(kuò)增dna。若將基因中個(gè)別編碼氨基酸的序列替換為編碼終止密碼子的序列，則改造后的基因轉(zhuǎn)錄合成的mrna中，終止密碼子提前出現(xiàn)，將不能控制合成完整長(zhǎng)度的多肽(或蛋白質(zhì))。(2)目的基因只有與載體連接后才能導(dǎo)入宿主細(xì)胞。可提取宿主細(xì)胞的總rna進(jìn)行分子雜交鑒定，以篩選獲得成功表達(dá)題述t

45、rna的轉(zhuǎn)基因宿主細(xì)胞。(3)由(2)知，轉(zhuǎn)基因宿主細(xì)胞含有特殊trna基因轉(zhuǎn)錄的trna，該trna的反密碼子可與終止密碼子配對(duì)，并可攜帶非天然氨基酸(uaa)，所以培養(yǎng)基中需補(bǔ)加非天然氨基酸(uaa)。病毒的基因進(jìn)行轉(zhuǎn)錄時(shí)利用的是宿主細(xì)胞的酶，識(shí)別其啟動(dòng)子的酶是宿主的rna聚合酶。(4)因該病毒疫苗侵染人體細(xì)胞，故可引起細(xì)胞免疫。4(2018全國(guó)卷)回答下列問題：(1)博耶(h.boyer)和科恩(s.coben)將非洲爪蟾核糖體蛋白基因與質(zhì)粒重組后導(dǎo)入大腸桿菌細(xì)胞中進(jìn)行了表達(dá)，該研究除證明了質(zhì)粒可以作為載體外，還證明了_(答出兩點(diǎn)即可)。(2)體外重組的質(zhì)粒可通過ca2參與的_方法導(dǎo)入大