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文檔簡介
1、磷酸鹽緩沖液(PBS配制方法0.01M PBSPBS 135 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 1.5 mM KH2PO4, and 8 mM K2HPO4 ,pH 7.2PBS緩沖液pH7.2 7.4 : NaCI 137mmol/L, KCI 2.7mmol/L , Na2HP0組.3mmol/L , KH2PO41.4mmol/L稱 7.9g NaCI , 0.2g KCI , 0.24g KH2PO4(or 1.44g Na2HPO4)和 1.8g K2HPO4,溶于 800 ml 蒸餾水中,用HCI調節溶液的pH值至7.4,最后加蒸餾水定容至 1 L。保存于4C冰箱中即 可。
2、需要注意的是,通常所說的濃度 0.01 M 指的是緩沖溶液中所有的磷酸根濃度,而非 Na 離 子或 K 離子的濃度, Na 離子和 K 離子只是用來調節滲透壓的。母液的配制:0.2M Na2HPO4 稱取 71.6g Na2HPO4-12H2O,溶于 1000ml 水0.2M NaH2PO4 稱取 31.2g NaH2PO4-2H2O,溶于 1000ml 水各種濃度 PB(pH=7.4) 的配制:先配 0.2M PB(pH=7.4 ,100ml) :取 19ml 0.2mol/L 的 NaH2PO4, 81ml 0.2mol/L 的 Na2HPO4, 即可。然后 只需將 0.2M PB (pH
3、=7.4) 按相應比例適當稀釋 即可,如:0.1M PBPH=7.4:取 500ml 0.2M PB ,加水稀釋至1000ml即可。0.01M PB PH=7.4:取 50ml 0.2M PB ,加水稀釋至1000ml即可。0.02M PB PH=7.4:取 100ml 0.2 M PB ,加水稀釋至1000m即可。假設需要 NaCl 的話,參加 NaCl 至 0.9%(g/100ml )即可。另:其它各種另 PH 值的 0.2M PB(100ml)配方:pH0.2M NaH2PO4ml0.2M Na2HPO4ml5.793.56.55.89285.990106.087.712.36.1851
4、56.281.518.56.377.522.56.473.526.56.568.531.56.662.537.56.756.543.56.851496.945557.038627.133677.228727.323777.419ml81ml7.516847.613877.710.590.57.88.591.57.97938.05.394.70.01M磷酸鹽緩沖液PBS配制方法稱取 8g NaCl 、0.2g KCl 、1.44g Na2HPO4 和 0.24g KH2PO4, 溶于 800ml 蒸餾水中,用 HCl 調節溶液的pH值至7.4,最后加蒸餾水定容至 1L即可。在15lbf/in21
5、034X 105Pa高壓下蒸氣滅菌至少20分鐘,保存存于室溫或 4 C冰箱中。需要注意的是, 通常所說的濃度 0.01M 指的是緩沖溶液中所有的磷酸根濃度, 而非 Na 離子 或 K 離子的濃度, Na 離子和 K 離子只是用來調節滲透壓的。 如果是用于免疫組化的話, 那么 需要在配置的時候分別參加 100 u/ml青霉素和鏈霉素之后再調 PH定容、滅菌消毒。PH7.67.47.27.0H2O1000100010001000NaCl8.58.58.58.5Na2HPO4 2.22.22.22.2NaH2PO4 0.10.20.30.4根據經驗來看,新鮮配置的PBS攪勻后其PH值約在7.2-7.
6、4 之間,可是在溫度的影響下,尤其在夏天,其電離常數發生了改變,在經過晝夜的時間后,PH值會明顯改變我親自測過偏酸。所以做實驗的同學可要注意了,PH值可能會影響實驗結果,甚至可能導致陰性。所以務必記得這個時候和天氣, 要加強實驗條件控制問題。 每次使用前最好用試紙測一下過 夜了的PBS如果發生偏酸或偏堿,注意重新換新液。PBS緩沖液稱取 NaCI 8g , KCl 0.2g , Na2HPO4?12H2O 3.63g, KH2PO4 0.24g,溶于 900ml 雙蒸水中, 用鹽酸調pH值至7.4,加水定容至1L,常溫保存備用。PBST緩沖液取300卩l Tween-20 參加PBS 100m
7、l中,混勻后即刻使用。現用現配。如果是把所有固體加大十倍, 配置為濃縮液, 工作時候十倍稀釋, 那么, 在剛配好濃縮液時,PH在6.5左右,明顯偏酸。不能用鹽酸調。雖然可以用氫氧化鈉顆粒調,但是有更方便的 方法。十倍稀釋以后, PH 自動升高到所需要的值。不需要其它任何處理。這個可以先取少量試一 試,配好之后再測一次 PH8.0的PBS配方詳細1. NaCl 137mmol/L , KCl 2.7mmol/L , Na2HPO4 4.3mmol/L, KH2PO4 1.4mmol/L 2. 向燒杯中參加約 800 ml 的去離子水,充分攪拌溶解。4. 高溫高壓滅菌后,室溫保存。注意:上述PBS
8、Buffer中無二價陽離子,如需要,可在配方中補充1 mMCaCI2和0.5 mMMgCI2。0.05mol/L PBS磷酸緩沖液 Phosphate Buffer Solution ,PBS的配制:甲液:0.05mol/L Na2HPO4液:稱取磷酸氫二鈉 9.465g 7.099g,加蒸 餾水至1000ml ;乙液: 0.05mol/L KH2P04 溶液 : 稱取磷酸二氫鉀 , 9.07g 6.803g, 加蒸餾水至 1000m1。將甲乙液分裝在棕色瓶內,于4C冰箱中保存,用時甲、乙兩液各按不同比例混合,即可得所需pH的緩沖液,見下表:pH甲液 ml乙液 mI5.292.597.55.595.095.05.9110.090.06.2420.080.
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