1、疑問（1）到底什么是角膜？（2）常說的角膜移植是怎么回事？（3）角膜移植中的角膜來源于哪里？（4）盲人，近視，遠視，白內障都可以進行角膜移植而恢復視力嗎？角膜 眼角膜是眼睛前端一層透明薄膜 ，角膜完全透明，位于眼球前部，呈橫橢圓形。角膜有十分敏感的神經末梢，如有外物接觸角膜，眼瞼便會不由自主地合上以保護眼睛。 角膜分為五層，組織學上從前向后分為：上皮細胞層：厚約35m，由56層鱗狀上皮細胞組成，無角化，排列特別整齊，易與其內面的前彈力層分離；前彈力層：厚約12m，為一層均質無細胞成分的透明膜；基質層：厚約500m，占角膜厚度的90%，由近200層排列規則的膠原纖維束薄板組成，其間有角膜細胞和少

2、數游走細胞，并有粘蛋白和糖蛋白填充；后彈力層：為較堅韌的透明均質膜，成年人厚約1012m；內皮細胞層：厚5m，為一層六角形扁平細胞構成，細胞頂部朝向前房，基底面向后彈力層。 角膜移植概念 用正常的眼角膜替換患者現有病變的角膜，使患眼復明或控制角膜病變，達到增進視力或治療某些角膜疾患的眼科治療方法。 適用癥狀 適合于各種原因造成的角膜混濁或水腫而嚴重影響視力的病變 。例如：病毒性角膜炎 被酸、堿化學物燒傷的角膜混濁患者 先天性角膜變性、圓錐角膜、角膜基質變性、角膜內皮細胞功能失代償等患者 角膜腫瘤、角膜瘺、角膜葡萄腫患者 已失明的角膜白斑患者 材料來源 傳統 現代活體捐贈 尸體捐贈 活體捐贈 尸

3、體捐贈 人工角膜活體捐贈顧名思義供體是活人，因外傷、視神經疾患、顱內疾患等原因導致失明（無光感）而角膜卻是完好無損的眼球，均是合適的供體。 返回人工角膜基本簡介基本簡介世界上超過1000萬人的眼盲是由角膜角膜病引起，為導致眼盲的第二大原因，僅次于白內障。其中80%可以通過角膜移植手術脫盲。然而，傳統的角膜移植角膜移植手術有其兩大弊端，一是角膜供體的來源困難，二是手術成功率低。人工角膜的出現及應用為角膜盲患者帶來了希望。 基本結構人工角膜是用醫用高分子材料制成的類似人體角膜的產品 。人工角膜材料 無機材料有機材料生物材料玻璃，羥基磷灰玻璃，羥基磷灰石石 ， 生物玻璃陶生物玻璃陶瓷瓷 硅凝膠硅凝膠

4、 ，聚甲基丙烯，聚甲基丙烯酸甲酯酸甲酯 ，氟碳多聚體氟碳多聚體 羊膜，動物膠原和殼聚糖，黏多糖組織工程角膜光學鏡柱周邊支架 聚甲基丙烯酸羥乙酯(phema）、聚甲基丙烯酸甲酯(pmma）、硅凝膠、玻璃 陶瓷、氟碳聚合物、羥基磷灰石、生物材料、聚四氟乙烯 角膜設計中，較為成功的是alphacor、dohlman-doan和osteo-odonto， 并獲得了fda 批準，進入臨床階段。 種子細胞特點（1）具有較高的增殖能力 （2）能夠長期維持其生理功能和生物活性 種子細胞種子細胞（角膜緣干細胞）（角膜緣干細胞）1.1.取材取材 取一塊大小為12mm2，深度為基質前的角膜緣組織一塊。tsai r,

5、 et al. n engl j med. 2000;343:86-932.2.培養培養 采用組織塊培養法和酶消化法。所用的培養基采用dmem與f12培養基1：1混合，加入10胎牛血清，5ng/ml的胰島素，10 ng/ml的上皮生長因子。消化酶使用0.25胰蛋白酶0.02edta的混合物。tsai r, et al. n engl j med. 2000;343:86-93 觀察培養細胞的生長情況 23天換液一次，在倒置顯微鏡下觀察角膜緣上皮細胞的生長情況。 培養細胞標記物染色 將培養的角膜緣上皮細胞固定，進行間接免疫組織化學染色。選用ae5抗角蛋白抗體，特異性識別角蛋白k3；4a4核轉錄因

6、子p63的特異性抗體,特異性識別p63。 3.3.移植移植tsai r, et al. n engl j med. 2000;343:86-93角膜緣干細胞理論的建立角膜緣干細胞理論的建立19711971年，年，davangerdavanger等研究發現角膜緣是角等研究發現角膜緣是角膜上皮增殖和移行的動力根源，據此提出膜上皮增殖和移行的動力根源，據此提出角膜緣干細胞存在的假說角膜緣干細胞存在的假說 。19861986年，年，schermerschermer等首次通過試驗發現角等首次通過試驗發現角膜緣基底細胞缺乏特異性分化蛋白膜緣基底細胞缺乏特異性分化蛋白k3k3，為，為角膜緣干細胞的解剖部位提

7、供了間接依據。角膜緣干細胞的解剖部位提供了間接依據。 角膜緣干細胞的解剖定位角膜緣干細胞的解剖定位角膜緣為角膜和結膜、鞏膜交界的部分角膜緣為角膜和結膜、鞏膜交界的部分 在基底部乳頭形成特殊的在基底部乳頭形成特殊的“柵欄柵欄”(limbal (limbal palisades of vogt)palisades of vogt)樣結構樣結構 結膜結膜 角膜緣角膜緣 周邊角膜周邊角膜 中央角膜中央角膜角膜緣干細胞理論建立的意義角膜緣干細胞理論建立的意義認知了多種眼表疾病的發病機理認知了多種眼表疾病的發病機理找到了許多眼表重建手術及角膜移植術找到了許多眼表重建手術及角膜移植術失敗的原因失敗的原因角膜

8、緣干細胞移植的意義角膜緣干細胞移植的意義角膜緣干細胞移植是角膜緣干細胞缺乏角膜緣干細胞移植是角膜緣干細胞缺乏患者恢復眼表完整性和重建邊緣屏障作患者恢復眼表完整性和重建邊緣屏障作用的有效方法。用的有效方法。 角膜緣干細胞移植的局限性角膜緣干細胞移植的局限性異體供眼來源有限，而且存在免疫排斥反應，可能異體供眼來源有限，而且存在免疫排斥反應，可能導致移植失敗。導致移植失敗。對單眼角膜緣干細胞受損患者的健眼取材（大于對單眼角膜緣干細胞受損患者的健眼取材（大于2/32/3圓周）有造成健眼角膜緣干細胞缺乏的潛在威圓周）有造成健眼角膜緣干細胞缺乏的潛在威脅脅 。因此目前認為對角膜緣干細胞先行體外培養擴增后因

9、此目前認為對角膜緣干細胞先行體外培養擴增后再行移植術是非常有前景的治療方法。再行移植術是非常有前景的治療方法。 chen j, et al. invest ophthalmol vis sci,1990;31:1301 載體支架載體支架 的特點的特點（1）生物相容性好 ；（2）細胞能夠正常生長且形成近似體內器官的正常結構 ；（3）具備角膜特有的透明，透光，透氧的特性 ；目前常用的載體支架1 羊膜羊膜 2 膠原膠原 3 纖維蛋白纖維蛋白4 脫細胞角膜基質脫細胞角膜基質 5 甲殼素與殼聚糖甲殼素與殼聚糖 羊膜當胚體下沉，其周圍的外胚層和中胚層向當胚體下沉，其周圍的外胚層和中胚層向上突起形成上突起形

10、成羊膜褶羊膜褶，頭褶、尾褶向上生長，頭褶、尾褶向上生長，側褶向胚體背中部集中，最后，這些褶全側褶向胚體背中部集中，最后，這些褶全部在胚體尾端背部會合，將胚體全包在膜部在胚體尾端背部會合，將胚體全包在膜內，內層稱羊膜，內，內層稱羊膜，羊膜腔羊膜腔內有羊水，外層內有羊水，外層稱漿膜，這兩層膜在會合處形成漿羊膜縫。稱漿膜，這兩層膜在會合處形成漿羊膜縫。 生物羊膜 羊膜的制備和保存羊膜的制備和保存將胎盤取出后，立即在層流罩下用含50mg/l青霉素、50mg/l鏈霉素、100mg/l新霉素及25mg/l兩性霉素的平衡鹽溶液清洗表面凝血塊.從絨毛膜間的潛在腔隙中鈍性分離出羊膜，將其上皮面朝上，平鋪于0.45m微孔硝酸纖維素膜上，切成3cm4cm大小，儲藏于-80，含有eagle基質和甘油（1 1）混合液的無菌瓶內備用。鑒于羊膜的制作和保存條件不足所帶來的醫用安全問題，滅菌生物羊膜已上市并投入使用. 羊膜作為移植底物，是提供基質，而不是移植上皮活細胞.羊膜中含有型膠原蛋白（與結膜中型膠原蛋白相同，可刺激杯狀細胞的分化）、整合素及板層體等多種成分，是結膜上皮化的合適附著物，為病變組織提供健康的上皮下基質環境. 展望