河北地區漢族人群MEGSIN基因多態性與糖尿病腎病的相關性研究河北醫科大學學位論文使用授權及知識產權歸屬承諾本學位論文在導師或指導小組的指導下，由本人獨立完成。本學位論文研究所獲的研究成果，其知識產權歸河北醫科大學所有。河北醫科大學有權對本學位論文進行交流、公開和使用。凡發表與學位論文主要內容相關的論文，第一署名單位為河北醫科大學，試驗材料、原始數據、申報的專利等知識產權均歸河北醫科大學所有。否則，承擔相應的法律責任。研究生簽名會娟導師簽章揍二級學院領導盤章加LF年廠月羅。日河北醫科大學研究生學位論文獨創性聲明本論文是在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特別加以標注和致謝等內容外，文中不包含其他人已經發表或撰寫的研究成果，指導教師對此進行了審定。本論文由本人獨立撰寫，文責自負。研究生簽名余捅導師簽章例年R月；O日IIIFI刪Y1900532目錄中文摘要1英文摘要4研究論文河北地區漢族人群MEGSIN基因多態性與糖尿病腎病的相關性研究前言“”“”一“”一8日IJ舌”“”一”“”“”“”“”“”一”一毯材料與方法9實驗方法11結果”一“14附圖17附表”一20討論一一“”一“一”25結論一”“一“”一”“28參考文獻28綜述糖尿病腎病易感基因研究進展3L致謝一“”“”“”“”40個人簡歷41中文摘要河北地區漢族人群MEGSIN基因多態性與糖尿病瞥病的相關性研究摘要目的糖尿病腎病DIABETIC衰竭ESRD的主要病因之一。近年來，糖尿病腎病的發病率逐年升高，給社會和家庭都帶來的沉重的經濟和精神負擔。國內外多項研究表明，糖尿病腎病的發病與多元醇通路激活、蛋白激酶C激活、氧化應激、腎血流動力學改變、血管活性物質、細胞因子、易感基因背景等多方面因素有關，但糖尿病腎病的具體發病機制目前尚未確切明了。因此，探索DN的發病機制及防治策略成為目前國內外。腎臟病學者熱切關注的課題。AWITHTOCELLPREDOMINANTGENEHOMOLOGYMEGSINMESANGIALSE叩IN是一種在系膜細胞優勢表達的基因，屬絲氨酸蛋白酶抑制劑超家族。MEGSIN和7個內含子。研究證實MEGSIN在糖尿病腎病的腎組織中表達增強，與腎臟細胞外基質積聚、腎臟肥大及腎功能受損程度相一致，提示MEGSIN在糖尿病腎病的發生發展中起一定作用。本課題擬通過聚合酶鏈反應邛艮制性片段長度多態性探討河北地區漢尿病腎病的診斷及防治提供分子遺傳學的理論依據?？萍皟确置诳谱≡旱?型糖尿病患者158例，按尿微量白蛋白將其分為單純糖尿病組84例和糖尿病腎病組74例。在糖尿病腎病組中，又根據其尿蛋白及肌酐水平分為微量蛋白尿組42例、臨床蛋白尿組15例和腎功能不全組17例。同時隨機選取在我院進行體檢的健康無糖尿病對照者80例作為正常對照組。分別取各受試者的肘靜脈血3ML，用于提取基因組DNA及檢測各項生化指標。用聚合酶鏈反應限制性酶切片段長度多態性法中文摘要油三酯、肌酐、尿素氮等生化指標，測量血壓、身高、體重，計算體重指MASS數BODYC2093T各基因型分布頻率進行檢驗。對所有計量資料均進行正態性檢驗，正態分布的資料以均數標準差叉S表示，非正態分布的資料采用中位數及四分位數間距表示，計量資料的組間比較用方差分析或秩和檢驗；計數資料組間比較用X為有統計學意義。結果L各組間的生化指標及臨床指標分析與健康對照組相比，2型糖尿病組的BMI、收縮壓、舒張壓、肌酐、尿病組相比，糖尿病腎病組的收縮壓、舒張壓、肌酐、尿素氮明顯升高白尿組相比，腎功能不全組的病程、收縮壓、舒張壓、肌酐、尿素、尿蛋白均明顯升高PO05或O01。2PCR擴增產物電泳結果及對各基因型HARDYWINBERG平衡檢驗與限制性內切酶HAEIII反應后，經聚丙烯酰胺凝膠電泳，結果分為以下三2值分別為222、型分布頻率符合HDARYWEINBGER平衡，三組研究對象的X334、287，P值均大于O05，說明該研究對象具有較好的群體代表性。3各組中基因型及等位基因的分布率均無明顯差異。在糖尿病組中，單純糖尿病組和糖尿病腎病組的C2093T基因型有顯著性差異，糖尿病腎病組的CT基因型頻率顯著高于單純糖尿病組4865VS腎病組中，微量蛋白尿組、臨床蛋白尿組和腎功能不全組三組間C2093T中文摘要基因型及等位基因無顯著性差異。4各基因型間的生化指標、臨床指標和糖尿病。腎病發生率的分析。糖尿病患者的各基因型組間年齡、性別、病程、BMI、血壓、血糖、HBALC、肌酐、尿素、甘油三酯、膽固醇、尿蛋白排泄率均無顯著性差異P值均O05。在糖尿病患者中，糖尿病腎病發生率在CT基因型中為5806，顯著高于TT基因型的25OOX腎病發病率的危險度0R_4145，95CI病腎病發病率的危險度OR_1938，95CIO9973770，即CT基因型的患糖尿病腎病的風險是CC基因型的1938倍。5糖尿病發生糖尿病腎病的危險因素分析型糖尿病發生糖尿病腎病的危險因素。結論1河北地區漢族人群存在MEGSIN基因C2093T多態性。2因型可能是2型糖尿病發生糖尿病腎病的易感基因。關鍵詞糖尿病腎??；2型糖尿病；MEGSIN基因；基因多態性英文摘要ASSOCIATIONOFWITHDIABETICMEGSINGENEPOLYMORPHISMIN2DIABETESMEUITUSINTHENEPHROPATHYTYPEHANSOFHEBEIPR0VLNCEABSTRACTONEOFTHEMOSTCOMMONANDOBJECTIVEDIABETICNEPHROPATHYDNISCHRONICOFSERIOUSHASBEENONEOFTHECOMPLICATIONDIABETES，WHICHALREADYMAINFACTORSOFRENALDISEASEINRECENTTHEETIOLOGICALENDSTAGEYEARS，OFDIABETICINCREASEDHAVEMORBIDITYNEPHROPATHYYEARBYYE碣WHICHBROUGHTTHEFLNANCIALANDEMOTIONALBURDENTOMEANDNUMBERHEAVYSOCIETYF鋤ILYAOFTHATDIABETICISSTUDIESINDICATEASSOCIATEDWITHACTIVATIONOFNEPHROPAMYANDKINASESTRESS，RENALPOLYOLPROTEINC，OXIDATIVEHEMODYN鋤ICPAMWAYCHANGES，VASOACTIVEANDOTHERSUBSTANCES，CYTOKINES，SUSCEPTIBLEGENEMANYFACTORSHO、VEVER，THEOFDIABETICHASNOTBEENPATHOGENESISN印MOPATHYSTUDIEDTHEANDCONTROLOFCLE2URLYTHEREFORE，TOEXPLOREPATLLOGENESISSTRATEGIESDIABETICARENEPHROPATHYVE巧IMPORTANT。WITHATOAMEGSINMESANGIALCELLPREDOMINANTGENEHOMOLOGYSE叩INISTOINHIBITORMESANGIUMPREDOMINAMGENE，BELONGSSE印INSERINEPROTEASELOCATESONHUMANCHROMOSOME113，ABOUT8MEGSINGENE8Q220KB，INCLUDINGEXONSAND7INTRONSSTUDIESCONFIMEDTHATMEOFISEXPRESSIONMEGSINRENALENHANCEDINDIABETICWHICHISCONSISTWITHTHEOFNEPHROPAMMDEGREEEXTRACELLULARMATRIXANDRENALACCUMULATION，RENALHYP咖HYDYS如NCTIONTHESESTUDIESTHATANROLEINT11EMECHANISMSUGGESTEDMEGSINPLAYSIMPORCANTTHEOFOFOCCUNENCEANDDI2LBETICDEVELOPMENTNEPHROPATHYIN也ISWEOBSERVEDT11EBETWEENDIABETICSTUDMRELATIONSHIPNEPHR叩AMYANDOFLIVEDCHINESEHANSINHEBEIMEGSINGENEPOLYMO叩HISMPROLVINCEBYCHAINREACTIONRESTRICTIONUSINGFAGMENTLEN舒HPOLYMO印HISMPOLYMERASEWOULDTOBASISOFTHERESULTWHICHBETHETHEORETICALHELP缸LPROVIDEFOR仃EMOLECULARDIAGNOSIS，ANDATMENTOFDIABETICGENETICSPREVENTIONNEPHROP砒Y4英文摘要ANDMETHODS158WITH2DIABETESMELLITUSWERESUBJECTSPATIENTSTYPERECMITED行OMANDRANDOMLYNEPHROLOGYDEPARTMENTINTHIRDTHEOFHEBEIMEDICALPATIENTSDEPANMENTHOSPITALUNIVERSI夠THESET、VOWEREDIVIDEDINTOTOTHEIREXCRETIONRATEGROUPSACCORDINGURINA巧ALBUMIN84WITHOUTAND74WITHDIABETICPATIENTSNEPHROPATHYPATIENTSNEPHROPATHYTHEPATIENTSINDIIBETICWEREDIVIDEDINTO3NEPHROPATHYGROUPGROUPSTOTHEIRLEVELSOFANDSERUMCREATININE42ACCORDINGURINA拶PROTEINPATIENTSWITH5WITHCLINICALAND17MICROALBUMINURIA，1PATIENTSPROTEINURIAPATIENTSWITHRENALTHESAMETIME，80WHOHADMEDICALINSUMCIENCYATPEOPLEEXAMINATIONINOURWERESELECTEDANDWERPENROLLEDASHOSPITALRANDOMLYTHEYNORMALCONTROLBLOODWERETAKENFROMTHEIRCUBITALVEINFORGROUP3MLDNAANDTHEBIOCHEMICALINDICATORSGENOMICDETECTINGEXTRACTINGREACTIONCHAINRESTRICTIONPOLYMERASE1JRAGMENTLEN舀HPOLYMO印HISMUSEDFORC2093TDETECTINGPCRRFLPWEREMEGSINGENETHESAMETIME，THELEVELSOF1C，SEMMUREAANDOTHERBIOCHEMICALMARKERSWERECREATININE，NITROGEN，GLUCOSEWEREMEASUREDANDMASSINDEXDETECTED，BLOODPRESSURE，HEIGHT，WEIGHTBODYWASUSEDFORBMIWASCOUNTEDCHISQUAREANALYSISTESTINGOFMEASUREMENTDA協WEREEQUILIBRIUMMEGSINGENOT，PE丘EQUENCYA11TESTINGFOROFNOMLALDISTRIBUTIONWASASMEAN士S協DARDNORNLALI吼DATAPRESENTEDDATAOFDISTRIBUTIONWASASNONNO咖ALDEVIATIONX士SANDPRESENTEDMEDIANANDOFINTERQUANILERANGEONEWAYANALYSISVARIANCEONEWAYDATATESTWAUSTOMEASUREMENTPERFO肌EDCOMPAREAN0、，AORNONPAR鋤ETRICBETWEENWASUSEDTOENUMERATIONDATAGROUPSCHISQUAREANALYSISCOMPAREWASTORISKBETWEEN黟OUPSLOGISTICREGRESSIONANALYSISPE墑MEDANALYZEFACTORSOFDIDBETICIN2DIABETESALLWERECARRIEDNEPHROPATHYTRPEOPERATIONSWASCONSIDEREDTOBEOUTTHESPSS17OSTATISTICALSORWAREPVALUEO05BYSIGNIFICAMSTATISTICALLYRESULT1BIOCHEMICALANDCLINICALTHEPAURAMETERS鋤ONGGROUPSCONTROLOFBLOODWITHTHELEVELSCOMPAREDHEALTHYGROUP，THEBMI，SYSTOLIC英文摘要_一BLOODCREATININE，UREAPRESSURE，SENJMPRESSURE，DIASTOLICINWITH2WEREHIGHERPATIENTSTYPESIGNI6CANTLYTRIGLYCERIDES，CHOLESTEROLOFBLOODOROO1THELEVELSDIABETESPO05SYSTOLICLMINWITHDIABETICBLOODCREATININE，UREANITROGENPATIENTSPRESSURE，SELLWITHOUTWERET112U1THOSEINDIABETESSIGNIFICANTLYHI曲ERNEPHROPATHYWITHMICROALBUMINURIAOROOGROUP，A_THYPO051COMPAREDNEPHROP一O，11BLOODURINEWASMCLMLCALSVSTOLICPRESSURE，PROTEINSLGNLNCANTLYHLGHERWITHANDRENALCOMPAREDPROTEINURIAGROUPINSU伍CIENCY鏟OUPDISEASEANDCLINICALLEVELSOFMICROALBUMINURIAPROTEINURIA鏟OUP，THEGROUPBLOODBLOODCREATMME，PRESSURE，SEMMDURATION，SYSTOLICPRESSURE，DIAST01ICWEREINCREASEDINRENALUREAPROTEINSIGNIFICANTLYNITROGEN，URINA巧OROO1INSUMCIENCYGROUPPO05OFANDTESTOFTHETHERESULTS2ELECTROPHORESISGENOTYPESOFAOF25THEREACTIONPCROFHADLENGM6BPARERMEGSINGENEFRAGMENTHAETHERESULTSOFRESTRICTIONENDONUCLEASEIII，PCRWITHPRODUCTSWEREMEONGELFOLLOWINGELECTROPHORESIS8POLYAC巧LAMIDE25TTTWOPRODUCESTT6BP；GENOTYPEONE行AGMEN昏OFPRODUCESONLYCTO士11AND1THREE廳AGMEN舀SOFPRODUCES行AGMEN鱸S4BP42BP；GENOTRPEANDOF11NLEGSINGEN噸，PE42BP256BPEACH4BP，1OFTHE缸EEWEREVALUESGROUPS222，334，287，PEQUILIBRIUMTHECHISQUARETHEWERESHOWSTHATREPRESEMATIVEVALUESO05THERESEARCHSUBJECTSINV撕OUSOFANDALLELESGROUPS3THEDISTRIBUTIONGENOTYPESOFC2093TDIFFERENCEGENO咖ESTHEREWASNOSIGNIFIC觚TMEGSINGENE2DIALBETICANDANDBETWEENGROUPHEALNLYTYPE行EQUENCIESALLELE仔EQUENCIES2DI2LBETICWASADIFIERENCEMESIGNIFICANTTYPEGROUP，THERECOMROL星RROUPINOFC2093TBETWEENDMANDDIABETICGENOTYPESGROUPINDIALBETICWASOFCTGROUPTHEGENOTYPENEPHROPATHY行EQUENCYIN也EDIABETICTHAN也E疳EQUENCYHI曲ERSIGNIFLCANTLYOFWASNOT3O95，PO05DIFFERENCEALLELE廳EQUENCYOFC2093TWASNODI行ERENCEDIABETICGROUP，THERESIGNIFICANTNEPHROPATHY英文摘要ANDA11ELESMICROALBUMINURIAGENOTYPESAMONGCLINICALGROUP，PROTEINURIAANDGROUPRENALINSU佑CIENCYGROUP。4BIOCHEMICALCLINICALANDA駐DTHEINCIDENCESOFPARAMETERSDIABETICTHENEPHROPATHYTHREEAMONGGENOTYPESINTHEDIABETICWASNOOFGROUP，THERESIGNIFICANTAGE，SEX，DISEASEDURATION，BMI，BLOODPRESSURE，GLUCOSE，SEMMCREATININE，UREA1THECHOLESTEROL，HBAC，URINETHLEEPROTEINVALUESAMONGGENOTYPESGROUPSPDIABETICWHOO05ININCIDENCEPATIENTSOFDIABETICCALTYGENOTYPECT，THEWAS5WAS806，WHICHTHANTHATNEPHROPATHYSIGNI6CANTLYIN25OOHI曲ERPATIENTS、HOCAR巧GENOTYPE7IT5806VS25OO，貯441O，PO05ANDGENOTYPEINCIDENCEOFDIABETICINCTIS4145TIMESTHANTHATNEPHROPATHYINGENOTYPEGENO鑼PE10241193845，95CITIMESTHANTHATTT0R416855ANDINGENOTYPECC0R1938，95CIO99737705THERISKFACTORSOFDIABETICIN2DIABETESNEPHROPATHYTYPESHOWEDTHATC2093TLOGISTICRE妒ESSIONANALYSISMEGSINNUCLEOTIDESINGLEDISEASEDURATIONP01YMO巾HISM，ANDBLOODWERETHESYST01ICPRESSURERISKFACTORSOFINDEPENDENTDILBETICIN2DIABETESNEPHROPATHYTYPECONCLUSIONC2093TEXISTSINHEBEIHAN1MEGSINGENEPOLYMO印HISMPOPULATIONC2093TISASSOCIATEDWITH2MEGSINGENEPOLYMO印HISMDIABETICNEPHROPATHY2CTISAIN帥EOF2DIABETES，GENOTYPEPROBABLYSUSCEPTIBILITYGENETYPEDIABETICNEPHROPATHYWORDSDIABETIC2KEYNEPHROPATHY；夠PEDIABETES；MEGSINGENEPO】YMO巾HISM7研究論文I河北地區漢族人群MEGSN基因多態性與糖尿病腎病的相關性研究前言糖尿病腎病DIABETICMELLITUS，DM的最常見和最嚴重慢性并發癥之一。近年來，隨著社會經濟發展，飲食結構改變和社會老齡人群的比例增加，DN的發病率越來越高，已成為西方發達國家終末期腎衰竭的首位病因，也是我國維持性透析人群的主要病因之一。因此，探索DN的發病機制及其防治策略具有極其重要的意義。BASEMENT糖尿病腎病的病理特點為腎小球基底膜GLOMEML2URMATRIX，ECM沉積，最終導致腎小球硬化。DN的具體發病機理尚不清楚，目前認為，DN是多因素綜合作用引起的疾病，其發病機制與糖代謝紊亂及由此所致的非酶糖化、多元醇通路激活、蛋白激酶C激活、脂代謝紊亂、高血壓所致的腎血流動力學改變、氧化應激、血管活性物質及細胞因子、易感基因背景等方面有關。就其易感基因方面，目前國內外學者已經篩選出了一系列的糖尿病腎病遺傳易感基因，如醛糖還原酶基因、載脂蛋白E基因、血管緊張素1轉換酶基因、葡萄糖轉運蛋白1基因等等。日本學者MIYATA等人從系膜細胞的基因表達庫中分離出一種在系膜細胞優勢表達的基因MEGSINMESANGIALCELL巾REDOMINANTGENEWITLLAHOMOLO西TOPROTEASE細胞外基質代謝，炎癥反應，細胞分化、增殖和凋亡等。已有研究發現，MEGSIN基因在以系膜細胞增生、系膜基質積聚為主要病理改變的糖尿病腎病中水平顯著上調，因此推測MEGSIN基因有可能是糖尿病腎病的候選基因。本研究擬通過聚合酶鏈式反應限制性片段長度多態性CHAINREACTIONRESTRICTION仔AGMENTPOLYMERASELENGTHPOLYMO印HISM，研究論文腎病的發病機制及防治提供分子遺傳學的理論依據材料與方法1病例資料11糖尿病組從2009年10月2010年10月河北醫科大學第三醫院腎內科、內分泌科住院患者中隨機選擇2型糖尿病患者158例，均符合2010年美國糖尿病協會ADA的糖尿病診斷標準。全部患者按其尿微量白蛋白分為單純糖尿病組和糖尿病腎病組。糖尿病腎病組又按尿蛋白排泄率及血肌酐水平分為微量白蛋白尿組、臨床白蛋白尿組和腎功能不全組。所有研究對象均選擇河北地區漢族人。其中男性81例，女性77例，年齡58081242歲。FPG126MDL7OMMOL1或4在伴有典型的高血糖癥狀或高血糖危象的MDL111患者，隨機血糖200MDL111MMOL1。在無高血糖癥狀時，應通過重復檢測來證實標準13。排除標準1妊娠期糖尿病2L型糖尿病3由其他病因導致的其他特殊類型糖尿病如P細胞功能遺傳性缺陷、胰島素作用遺傳缺陷、胰腺外分泌疾病如囊性纖維化病及藥物或化學品所致糖尿病如治療AIDS或器官移植后。根據尿蛋白排泄率UAE和血肌酐水平將糖尿病組分為單純糖尿病組和糖尿病腎病組1單純糖尿病組在6個月內檢測3次，每次間隔2周以上，UAE均20UMIN者為非糖尿病腎病組。入選病例84例，男性43例，女41例。年齡56631271歲。2糖尿病腎病組在6個月內檢測3次，每次間隔2周以上，若2次或2次以上UAE20UMIN，且排除其他引起尿白蛋白增加研究論文的原因如糖尿病酮癥酸中毒、泌尿系感染、運動、血尿、發熱、妊娠等者為糖尿病腎病組。入選病例74例，男性39例，女35例。年齡59721196歲。根據尿蛋白排泄率及血肌酐水平將糖尿病腎病組分為微量蛋白尿組、臨床蛋白尿組和腎功能不全組。尿蛋白定量持續在30300MG，且肌酐、尿素氮均在正常范圍者。915638年。2臨床蛋白尿組UAER持續200UMIN或24H小時尿蛋白定量持續300MG，且肌酐、尿素氮均在正常范圍者。入選病例15例，3腎功能不全組BUN及CR連續2次高于正常者，除外酮癥酸中毒的暫時性升高者。入選病例17例，男性7例，女10例。年齡60121313歲，病程1559731年。進行體檢的無糖尿病者80例，所有入選者均為河北地區漢族人，其中男性43例，女性37例，年齡5649951歲。正常對照組的年齡及性別比例均與糖尿病組相匹配。排除標準有糖尿病、高血壓、冠心病、妊娠、腦卒中病史者及心肝腎功能不全者有糖尿病家族史者空腹或餐后血糖異常但尚未達到糖尿病診斷標準者正在服用任何可以影響糖代謝的藥物者2儀器及試劑21儀器全自動生化分析儀OLYMPUSAU600，日本OLYMPUS公司電子天平北京賽多利斯天平有限公司紫外分光光度計UV2550PCX型，寧波新芝生物科技公司壓力蒸汽滅菌器博迅實業有限公司醫療設備廠超低溫冰箱MDF382E，日本三洋公司電熱恒溫箱上海醫療器械七廠研究論文超純水系統MILLIQS，美國MILLIPORE公司低溫冰凍離心機LABOFUGE400R，德國HERAEUS公司臺式小型高速低溫離心機5417R型，德國EP公司PCR擴增儀MASTERCYCLEGRANDIENT，德國EP公司電腦三恒多用電泳儀DYVL2型，北京六一儀器廠凝膠成像分析系統BIOPROFIL，法國公司22主要試劑引物上海捷瑞生物工程有限公司DNA聚合酶普洛麥格北京生物技術有限公司TAQDNTP普洛麥格北京生物技術有限公司MARKER北京索來寶生物科技公司HAEIIIFEMLENTAS公司溴化乙錠上海生工生物工程有限公司丙烯酰胺上海生工生物工程有限公司亞甲雙丙烯酰胺上海生工生物工程有限公司TEMED上海生工生物工程有限公司過硫酸銨上海生工生物工程有限公司實驗方法1標本的采集抗凝，保存在80以下，用于抽提基因組DNA。其余2ML用于檢測甘油三酯、膽固醇、血糖、血肌酐、尿素氮等生化指標。2基因組DNA的制備21全血基因組DNA的提取無菌重蒸水，顛倒混勻，使用離心機12000RMIN離心2MIN，棄上清，重復1次。212加飽和碘化鉀溶液200“L，旋渦振蕩混勻30S。研究論文振蕩混勻30S。2141的EP管中；215加異丙醇1ML，顛倒混勻，直至DNA沉淀析出。10000RMIN離心1MIN，棄上清。216加70的冷乙醇溶液1OML洗滌，10000RMIN離心1MIN。棄去乙醇溶液。度水浴箱中將DNA溶液水浴10分鐘。離心管中的液體即為基因組DNA，將DNA溶液置于4冰箱保存備用。22基因組DNA濃度及純度測定值，并得出DNA的濃及純度。純度接近18時說明提取的DNA純度較好。L，并將222根據測得的DNA濃度調整DNA溶液的濃度至LOONU調整好濃度的DNA溶液放置于20冰箱保存備用。3引物合成根據MEGSIN基因序列數據庫資料，并且參照文獻報道，由上海捷瑞生物工程有限公司合成，上游及下游引物序列分別為TTGACCTATGAAGATTTTAGAG3上游引物5TTGCTTATAAACTACACAGCATATGA3下游引物5AAA擴增片段長度為256BP。4U5UL，PCR反應PCR反應體系總體積為50L，包含LOBU仃ER25MMOLL5UUUL，10MMOLLL，上下游引物100MOLL各1MGCL2DNTPS1ULU4PL，5UUL模板DNAL，剩余量TAQ酶LL，100NU用超純水補足。PCR反應體系10BU艉R5UL5ULMGCL225MMOLLUMOLL1UL上游引物100UMOL幾LUL下游引物100DNTPS10MMOLL1UL研究論文L1ULTAQ酶5UUL4UL模板DNA100NU32L超純水U合計50ULPCR反應在PCR擴增儀MASTERCYCLEGRANDIENT，德國EP公司退火15S，72延伸30S，進行35個循環，72延伸5MIN。電泳，溴化乙錠染色，BIOPROFIL凝膠成像系統中觀察并照相。PL5限制性內切酶酶切取10PCR產物，加入限制性內切酶HAEIII1OPL2UL、10BU艉R2U8L、超純水1UL，于37水浴箱中孵育6H，酶切產物行聚丙烯酰胺凝膠電泳，溴化乙錠染色，BIOPROFIL凝膠成像系統中觀察并照相，判定基因型。酰胺凝膠電泳分離，在256BP處出現1條條帶。2酶切產物電泳結果在256BP處出現L條帶者為TT型純合子，在114、142和256BP處各出現3條條帶者為CT型雜合子。6臨床與生化指標檢測型全自動生化分析儀上進行。糖化血紅蛋白玎ALC的測定采用上海羅氏公司糖化血紅蛋白儀。62記錄所有受試者的年齡、性別、病程，測量受試者身高、體重，靜休息坐位時上臂肱動脈部位的血壓，在不同的時段測量三次，取平均值。否具有群體代表性。對所有計量資料均進行正態性檢驗，符合正態性分布的資料用XS表示，不符合正態性分布的資料用中位數及四分位數間距表示。組間計量資料比較采用單因素方差分析或秩和檢驗。各組間基因型及等位基因頻率比較采用X2檢驗，相對風險率采用比研究論文值比ODDS尿病腎病發病危險因素采用LOGISTIC回歸分析。所有數據均輸入計算機，使用SPSS17O統計軟件進行統計分析，PO05為有統計學意義。結果L各組間的生化指標及臨床指標分析正常對照組和2型糖尿病組的年齡、性別無顯著性差異，說明兩組資料具有可比性，與正常對照組相比，2型糖尿病組的體重指數、收縮壓、舒張壓、肌酐、尿素、血糖、甘油三酯、膽固醇均明顯升高腎病組的年齡、性別、病程無顯著性差異，說明兩組資料具有可對比性，與單純糖尿病組相比，糖尿病腎病組的收縮壓、舒張壓、肌酐、病腎病組中，微量蛋白尿組、臨床蛋白尿組和腎功能不全組三組之間的年齡、性別無顯著差異，與微量蛋白尿組相比，臨床蛋白尿組和腎功能不全組的收縮壓、尿蛋白明顯升高，與微量蛋白尿組及臨床蛋白尿組相比，腎功能不全組的病程、收縮壓、舒張壓、肌酐、尿素、尿蛋白均明顯升高PO05或O01，具有統計學意義見表3。2PCR擴增產物電泳結果及各基因型HARDY、斫NBE瑪平衡檢驗結果142BP的兩條片斷；2093T等位基因不含該酶切位點，不能被酶切。所研究對河北地區漢族健康人群、糖尿病、糖尿病腎病人群研究對象進均有C、T兩種等位基因及TT、CC、CT三種基因型。各基因型分布頻XK334，糖尿病腎病組X因是群體中穩定存在的基因，具有較好的群體代表性，可對該基因與糖研究論文尿病腎病的關聯性做進一步研究。3各組中基因型及等位基因的分布2093CC基因型、CT基因型、TT基因型頻率31健康對照組的MEGSIN2093CC基因型、CT基因型、TT基因型頻率為30糖尿病組的MEGSIN基因頻率均無明顯差異基因型頻率X頻率X20407，PO523見圖3，表5。2093CC基因型、CT基因32在糖尿病組中，單純糖尿病組的MEGSIN2093CC為7381，T等位基因頻率為2619，糖尿病腎病組的MEGSINC等位基因頻率為7162，T等位基因頻率為2838。兩組間的C2093T基因型有顯著性差異XCT基因型頻率明顯高于糖尿病組4865VS3095，等位基因頻2O190率無明顯差異XPO663見圖4，表5。2093CC基因型、CT33在糖尿病。腎病組中，微量蛋白尿組的MEGSIN2093CC基因型、CT基因型、TT基因型頻率分別為5333、40、2093尿病組的MEGSINCC基因型、CT基因型、TT基因型頻率分別為因型頻率X21245，PO87L；等位基因頻率X圖5，表5。4各基因型間的生化指標、臨床指標和糖尿病腎病發生率的分析。糖尿病患者的各基因型組間年齡、性別、病程、BMI、血壓、血糖、HBALC、肌酐、尿素、甘油三酯、膽固醇、尿蛋白排泄率均無顯著性差異P值均O05見表6。在糖尿病病人中，糖尿病腎病發研究論文24410，PO05和CC基因型的4167X病的風險是TT基因型的4154倍。CT基因型和CC型基因相比，糖尿病3770，即CT基因型的患糖尿病腎病的風險是CC基因型的1938倍。5糖尿病發生糖尿病腎病的危險因素分析是2型糖尿病發生糖尿病腎病的危險因素，其LO西STIC回歸系數分別為1872，1052，1038。見表8。256BPOFA25INTHEC2093TFIG1PCR鋤PLICATION6BPEAGMENTMEGSINGENESMP01YMO印HI234567896OOBP50OBP4OOBPO3OBP256BP2OOBP142BP114BPLOOBPOFTHEPCRRESTRICTION行AGMENTLENGTHPOLYMO印HISMANALYSISFIG2MEGSINC2093TGENEP01YMO印HISMLANE1，DNALADDER；LANE24CT；7，GENOTYPELANE358，GENO夠PECC；LANE6TT9，GENO勺，PE17DISTRIBUTIONOFOFTHEECTSINDMANDFIG4MEGSINGENOTYPESUBJGROUPDN鱸OUP18DISTRIBUTIONOFTHEINFIG5OFMEGSINGENOTYPESUBJECTSMICROALBUMINURIAANDRENALGROUP，CLINICALPROTEINURIAGROUPINSU伍CIENCY鏟OUPBETWEENC2093TANDDIABETICFIG6RELATIONSHIPMEGSINP01YMO印HISMNEPHROPATHY研究論文附表1OFCLINICALINV撕OUSTABLECHARACTERISTICS鋤ONGSUBJECTSCOMP撕SONGROUPS正常對照組糖尿病組例數男女8043371588L77年齡歲564995L58081242病程年83，1424512882625349群BMIKGM2收縮壓咖HG123401270132781541群舒張壓姍HG752674380OO856尿素氮衄OL154312558L501，713撐肌酐1LM011648613297260，87群血糖咖LL502O4785650，1096群膽固醇姍OLL468O99499116拳152109，209群甘油三酯衄01L127O90，143VSCONTROL1木PO05撐POOHEALTHYGROUPINDMOFCLINICALECTSTABLE2SUBJCOMPARISONCHARACTERISTICS鋤10NGANDDNGROUPGROUP單純糖尿病組糖尿病腎病組例數男女844341743935年齡歲5663127159721196病程年652，10LO5，16BMIKG225772792680409收縮壓MMHG128451186137691745撐20一一研究論文舒張壓衄HG78608178159877木血糖姍OLL908687，1118803637，1084HBALC829214833155尿素氮衄OL1564146619537，768群肌酐ILM01167401607786775，12625拌膽固醇衄01L499111499122甘油三酯衄01L155114，286136103，191VSDM1GROUP木PO05拌POO1ABLE3OFCLINICALCHARACTERISTICSINCOMPARISONAMONGSUBJECTSMICROALBUMINURIAANDRENALGROUP，CLINICALPROTEINURIAGROUPINSU伍CIENCY微量蛋白尿組臨床蛋白尿組腎功能不全組2L一_I_一一一378296，563木J|J017O05O64O38，197木尿白蛋白ING24H一_VSMICROALBUMINURIAGROUP木PO05VSCLINICALGROUPFIPO05PIOTEINURIAHANANDOFINHEBEIPOPULATION4THEGENOTYPESTABLEMEGSINFKQUENCIES望竺塑里翌壘堡嬰壘翌旦墨堡一_一一基因型CCCTTT一一觀測頻數422810正常對照組理論頻數39233772X2222PO14觀測頻數49269理論頻數45763248576單純糖尿病組XPO072334觀測頻數35363糖尿病腎病組理論頻數35963008596PO09X生287OFTHEECTSANDSUBJOFAUELE仔EQUENCIES5DISTRIBUTIONGENOTYPE曲IEMEGSIN正常對照組425250802835OO84531612759糖尿病組1586239248491071單純糖尿病組263095495833研究論文RABLE6OFCLINICALWITHCOMPARISONCHARACTERISTICS鋤ONGSUBJECTSDIFRERENTGENOTYPESTIABLE7BETWEENANDDIABETICRELATIONSHIPMEGSINGENEPOLYMO叩HISMNEPHROPATHY單純糖尿病例糖尿病腎病例塹壅壘查一一L_一一CC495833354167CT264194365806TT97500325OO一_FATORSFOR2DIABETICOFRISKTYPETABLE8ANALYSISREGRESSIONLOGISTIC呈已墜2里堂Z一一BSEWALDDFSIGEXPB一基因型O627O29445791O0321872O0503746LO0531052病程O026收縮壓O037O01288381O0031038L_一研究論文討論糖尿病腎病是糖尿病最嚴重和最常見的慢性并發癥之一，也是導致終末期腎衰竭的主要病因之一。隨著社會經濟的發展，糖尿病腎病的發病率逐年升高。糖尿病腎病的病理特點為腎小球基底膜增厚、腎小球系膜區細胞外基質沉積，系膜細胞增生，最終導致腎小球硬化。根據MOGENSEN建議，按照糖尿病腎病的發展及臨床表現將糖尿病腎病分為五期I期，腎小球高濾過期，主要表現為腎小球濾過率增高及腎體