自身抗體的應用及研究進展,全自動自身抗體分析儀,自動化檢測 檢測定量化 單個項目隨時檢測 多個項目同時檢測 45-90分鐘報告結果 原廠質控和校正血清 精確溫度調控系統 五點定標、三重檢測,風濕病的實驗室診斷,血清學檢查 自身抗體特異性 非特異的免疫相關指標 滑液分析 一般的實驗室檢查項目,常見的自身抗體及其檢測方法,(1),(2),常見的自身抗體及其檢測方法,抗ku抗體（ku),抗mi抗體（mi-2）,抗pm-scl抗體,抗jo-1抗體（jo-1）,多發性肌炎、皮肌炎,抗線粒體抗體m2型（ama-m2）,原發性膽汁性肝硬化,抗nrnp抗體（u1-snrnp）,混合性結締組織?。╩ctd）,抗scl-70抗體（scl-70）,抗著絲點b抗體（cenp-b）,系統性硬化,抗ssb/la抗體,抗ssa/r052抗體,抗ss-a/r060抗體,干燥綜合征/系統性紅斑狼瘡,抗核糖體p蛋白（po）,抗增殖細胞核抗原抗體（pcna),抗sm抗體,抗組蛋白抗體,抗核小體抗體,抗雙鏈dna抗體igg抗體,系統性紅斑狼瘡,項 目 名 稱,疾 病,ana譜17項（免疫印跡法）,(3),常見的自身抗體及其檢測方法,(一)類風濕關節炎（ra）,類風濕因子（rf） 早期診斷的系列指標 抗ra33/36抗體 抗核周因子（apf） 抗角蛋白抗體（aka） 抗sa抗體 抗環瓜氨酸抗體（抗ccp）,抗角蛋白抗體（aka）,抗角蛋白抗體(aka)，1979年young等發現類風濕性關節炎(ra)血清中有一種能與鼠食管角質層反應的抗體，并對類風濕性關節炎(ra)具有特異性，命名為aka。1989年vincent等提出應將aka更名為抗角質層抗體更為恰當。aka可以在ra發病以前若干年出現，所以有早期診斷價值。 aka檢測方法：取6周齡雄性wistar大鼠食管中下1/3段作為抗原，做冰凍切片，厚4 m5 m-70 保存備用。加120稀釋血清，濕盒內37孵育30分鐘，pbs漂洗，吹干，加120稀釋的熒光素標記羊抗人igg，37孵育30分鐘，漂洗，吹干，緩沖甘油封片熒光顯微鏡下觀察。 判定標準：以角質層出現典型的規則的線狀或板層狀熒光為陽性。,gene filaggrin,類風濕因子（rf）,抗人igg分子fc片段上抗原決定簇的特異性抗體,分為igm、g、a、e型 rf在ra中的陽性率為70%，是診斷ra的重要標準之一 rf含量與病情的活動性和嚴重性成正比，持續高滴度的rf常提示ra病情活動，骨侵蝕發生率高，?？砂橛衅は陆Y節或血管炎等關節外表現，提示預后不良。,類風濕因子（rf）,rf并非ra獨有的特異性抗體，對ra的診斷不具特異性 sle 30% ss 70%90% ssc 20%30% mctd 50%60% 非風濕性疾病 5%以下的正常人 rf陽性不等于一定就是ra rf陰性也不等于一定就不是ra,rf常用檢測方法,rf 1：40陽性 乳膠凝集法（測igm-rf） rf 256 iu/ml 雙抗夾心elisa法(測總rf） rf-igg 110iu/ml -iga 18iu/ml elisa法 -igm 200iu/ml,ra早期診斷的系列指標,敏感性 特異性 抗ra33/36抗體 35.8% 99.6% apf 40%-80% 70%-90% aka 40%-55% 85%-95% 抗sa抗體 40%-60% 98.6% 抗ccp 46%-70% 96%,抗環瓜氨酸肽抗體（抗ccp）,瓜氨酸是ra血清抗聚角蛋白微絲蛋白相關 抗體的主要抗原決定簇 對ra診斷具有高度特異性（98%） 可在ra早期出現 預測早期關節炎發展為ra ra關節侵蝕破壞的早期識別及預測,(二)系統性紅斑狼瘡（sle）,是一種臨床表現有多系統損害癥狀的慢性系統性自身免疫性疾病，其血清有以抗核抗體為主的大量不同的自身抗體 自身抗體 （1）抗核抗體譜ana、抗ds-dna、抗ena抗體 （2）抗磷脂抗體 （3）抗組織細胞抗體抗rbc抗體 抗血小板相關抗體 抗神經元抗體 （4）其它rf、p-anca,抗核抗體（ana）,定義以細胞核內物質為抗原的抗體 臨床意義 sle的篩查抗體: 95%陽性，但滴度與sle活動性無相關 陰性基本可排除sle 陽性并非sle特異 陽性并非風濕病特異: 風濕?。╯le、ssc、ss、ra) 非風濕性疾?。ǜ腥尽⒙?、肺纖維化、腫瘤） 服用某些藥物（inh、苯妥英鈉、肼苯達嗪、普魯卡因酰胺）,抗核抗體（ana）,方法間接免疫熒光法 結果判斷: 滴度1：100為陽性 常見核型5種 不同核型的臨床意義不同,核膜型 與抗ds-dna有關， 多見于sle，特別是有腎炎者,均質型 與aha（抗組蛋白抗體）、抗dna有關，引起le形成主要見于sle、藥物性狼瘡,斑點型 與抗ena有關，應進一步查特異性抗體,核仁型 多見于硬皮病,著絲點型 多見于crest綜合征,ana常見五種核型及臨床意義,核膜型與抗ds-dna有關， 多見于sle，特別是有腎炎者 均質型與aha、抗dna有關，引起le形成 主要見于sle、藥物性狼瘡 斑點型與抗ena有關，應進一步查特異性抗體 核仁型多見于硬皮病 著絲點型多見于crest綜合征,ana檢測方法,間接免疫熒光法 印跡法 elisa法,抗核抗體譜（anas）,定義：以細胞核內物質為抗原的抗體 抗dna抗體抗ss-dna 抗ds-dna 抗組蛋白抗體h1，h2a，h2b，h3，h4 抗非組蛋白抗體抗ena抗體 抗著絲點抗體 抗核仁抗體 其它線粒體、溶酶體、高爾基體等,抗ds-dna抗體,臨床意義 對sle的診斷有較高特異性 滴度與sle活動相關，可作為病情監測及療效觀察指標 與sle腎損害有關 檢測方法 放免法（farr)敏感，有利于早期預測 檢測高親合力的抗ds-dna 間接免疫熒光法(if)特異 elisa可檢測低親合力的抗ds-dna 有助于中樞狼瘡的病情監測 金標免疫斑點法,抗ena抗體,抗rnp mctd100%陽性，且滴度高 雙手腫脹，雷諾現象，肌炎，指（趾）端硬化 腎臟保護性抗體？ 抗sm sle的標記性抗體，陽性率30% 有助于早期、不典型及治療緩解后sle的回顧性診斷 抗sm陽性一定伴抗rnp陽性，但抗rnp陽性可單獨存在 抗ssa 原發性ss：60-75% sle: 40-50% 與皮損、光過敏、白細胞減少、淋巴結腫大、 血管炎、紫癜相關 可造成新生兒狼瘡、嬰兒心臟傳導阻滯 抗ssb 原發性ss：40%，較抗ssa更特異 其它ctd伴抗ssb者常伴繼發性ss,抗ena抗體,抗scl-70 硬皮病標記性抗體 抗jo-1 多肌炎/皮肌炎標記性抗體 抗rib 胞漿抗原核糖體位于胞漿內 臨床意義 是sle的又一特異性抗體，陽性率10-20% 多見于sle活動期 與抗ds-dna抗體的消長相平行 但不會隨病情緩解立即消失 可持續1-2年后才轉陰,抗核小體抗體（anua）,核小體是細胞染色質中的一種成分，它是由dna和組蛋白以特殊的方式相連而組成，在sle的誘導和致病中起重要作用 對sle的早期診斷有重要意義 比抗ds-dna、抗組蛋白抗體更早出現 陽性率：50%90% 特異性98%,(三)皮肌炎/多發性肌炎（pm/dm）,免疫學檢查 ana ena抗jo-1陽性 其它檢查肌酶譜 肌酸磷酸激酶（cpk）: mm-心肌和骨骼肌 mb-心肌 bb-平滑肌和腦內 乳酸脫氫酶（ldh） 谷草轉氨酶（ast） 谷丙轉氨酶（alt） 堿性磷酸酶（alp）,(四)干燥綜合征（ss）,ana陽性率40%70% ena抗ssa抗體陽性率70%96% 抗ssb抗體陽性率50%87% 抗-fordrin對于pss或sss的診斷有一 定意義，但特異性和敏感性并不理想。 rf陽性率75%100% 高球蛋白血癥 wbc下降,(五)系統性硬化?。╬ss）,ana陽性率50%55% ena抗scl-70陽性率15%40% 抗著絲點抗體(aca)陽性,(六)混合性結締組織病（mctd）,ana陽性 ena抗rnp高滴度陽性,（七）血管炎,抗中性粒細胞胞漿抗體（anca）,anca的臨床意義,c-anca和pr3-anca 對韋格納肉芽腫有高度特異性（95%），敏感性80% 與病情活動性相關 常作為判斷藥物療效和病情復發的指標 p-anca和mpo-anca 不如c-anca具有診斷特異性 陽性者血管炎程度較高，其滴度也與病情活動相關 主要與顯微鏡下多血管炎 壞死性新月體腎小球腎炎 變應性肉芽腫性血管炎 相關,（八）抗磷脂抗體綜合征（aps）,是一種非炎癥性自身免疫病，臨床上以動/靜脈血栓形成、習慣性流產和血小板減少等癥狀為表現，血清中存在抗磷脂抗體 血清學檢查 抗心磷脂抗體（ aca ）igg、igm、iga（elisa） 抗2糖蛋白1抗體（抗2-gp1) 狼瘡抗凝物（la）凝血酶原時間（pt） 激活的部分凝血活酶時間（aptt） 白陶土凝集時間（kct） 蛇毒試驗（rvvt）,抗磷脂抗體,抗2-gp1抗體比la和aca在aps患者中更具有特異性，是導致aps的主要抗體 抗2gp1抗體只出現于自身免疫性疾病, 而aca也可出現于一些感染性疾病, 如梅毒、aids、肝炎、結核等,（九）自身免疫性肝病,抗核抗體（ana） 抗肝細胞膜抗體(抗lma) 抗平滑肌抗體（asma） 抗肝腎微粒體抗體（抗lkm抗體） 抗肝-胰抗體(抗lp抗體) 抗可溶性肝細胞抗體（抗sla） 抗線粒體抗體（ama）,自身免疫性肝炎（aih） ana 抗平滑肌抗體（sma） 抗肝腎微粒體抗體 原發性膽汁性肝硬化（pbc） 抗線粒體抗體（ama）m2 原發性硬化性膽管炎 anca陽性,自身免疫性肝病,風濕病的實驗室診斷,自身抗體特異性 非特異的免疫相關指標 一般的實驗室檢查項目 血常規 尿常規 肝功能 腎功能等,注意事項,選擇做哪些檢查項目時要重點突出 避免“大撒網” 解釋實驗結果時應考慮以下幾個問題 實驗方法本身的敏感性、特異性、 可靠性及實驗室之間的差異性 結合臨床 應把與之相關的一組實驗結果放在一起考慮,全國自身抗體檢測質量控制總結,由中華醫學會風濕病分會計劃 參與質控的醫院和檢測的項目逐年增多，多為三甲醫院,自身抗體的檢測對于風濕