標準解讀

《DB31/T 955-2015 豬圓環病毒2a/2b亞型實時熒光PCR檢測和分型方法》是一項地方標準，由上海市質量技術監督局發布，旨在提供一套標準化的豬圓環病毒（PCV）2a與2b亞型的檢測及分型流程。該標準詳細規定了從樣本采集到結果分析的一系列操作步驟，確保實驗過程的準確性和可重復性。

首先，在樣本準備階段，標準指出了適用的樣本類型包括但不限于血液、組織液等，并明確了樣本保存條件以及運輸要求，以保證樣本質量不受影響。接著，對于核酸提取部分，提供了推薦使用的商業化試劑盒或自制試劑方案，強調了操作過程中需要注意的關鍵點，如避免交叉污染等。

在引物設計方面，《DB31/T 955-2015》給出了針對PCV2a和PCV2b特異性區域設計的引物序列，同時建議使用內部對照來監控反應體系的有效性。此外，還列出了適用于此實驗的最佳反應條件參數，包括退火溫度、循環次數等，以指導實驗室人員進行優化設置。

關于熒光探針的選擇，標準推薦了幾種市場上常見的熒光標記物質，并對其性能進行了比較說明，幫助使用者根據實際情況做出合適的選擇。同時，也提到了如何通過調整熒光通道來提高檢測靈敏度和特異性。


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  • 已被新標準代替，建議下載現行標準DB31/T 955-2022
  • 2015-12-11 頒布
  • 2016-03-01 實施
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DB31/T 955-2015豬圓環病毒2a/2b亞型實時熒光PCR檢測和分型方法_第1頁
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文檔簡介

ICS6502030

B42..

備案號49129—2016

:

上海市地方標準

DB31/T955—2015

豬圓環病毒2a/2b亞型實時熒光PCR

檢測和分型方法

Methodofthereal-timePCRforthedetectionandgenotypeof

porcinecircovirussubtype2a/2b

2015-12-11發布2016-03-01實施

上海市質量技術監督局發布

DB31/T955—2015

前言

本標準按照給出的規則起草

GB/T1.1—2009。

本標準由上海市畜牧獸醫辦公室提出

。

本標準由上海市畜牧業標準化技術委員會歸口

。

本標準起草單位上海市動物疫病預防控制中心

:。

本標準主要起草人劉佩紅周錦萍王建劉健鞠厚斌葛菲菲楊德全李鑫楊顯超徐鋒

:、、、、、、、、、。

Ⅰ

DB31/T955—2015

豬圓環病毒2a/2b亞型實時熒光PCR

檢測和分型方法

1范圍

本標準規定了豬圓環病毒亞型實時熒光檢測和分型方法

2a/2bPCR。

本標準適用于豬圓環病毒型的檢測和豬圓環病毒亞型的分型

22a/2b。

2規范性引用文件

下列文件對于本文件的應用是必不可少的凡是注日期的引用文件僅注日期的版本適用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件

。,()。

分析實驗室用水規格和試驗方法

GB/T6682

基因檢驗實驗室技術要求

SN/T1193

3縮略語

下列縮略語適用于本文件

。

31Ct值

.

熒光信號量達到設定的閾值時所經歷的循環數

cyclethresholdvalue,。

32PCV-2

.

豬圓環病毒型

porcinecircovirustype2,2。

33PCV-2a

.

豬圓環病毒亞型

porcinecircovirussubtype2a,2a。

34PCV-2b

.

豬圓環病毒亞型

porcinecircovirussubtype2b,2b。

4原理

本方法是根據的兩個不同亞型和的序列設計能同時擴增這兩種

PCV-2PCV-2aPCV-2bORF2,

亞型的引物和并設計了能分別檢測兩種亞型的熒光探針和其中僅能

C1C2,TypeATypeB,TypeA

檢測僅能檢測建立了二重實時熒光檢測方法

PCV-2a,TypeBPCV-2b,PCR。

5設備和器材

51多通道熒光儀至少包括可檢測和

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