ICS65.020.20B05DB22吉林省地方標準DB22/T2024—2014大白菜霜霉病抗性鑒定技術規范ThetechnicalstandardofresistanceidentificationtodownymildewforChineseCabbage吉林省質量技術監督局發布DB22/T2024—2014前言本標準按照GB/T1.1-2009給出的規則起草。本標準由吉林省農業委員會提出并歸口。本標準起草單位：吉林農業大學。本標準主要起草人：王曉梅、韓玉珠、張浩、馬貴龍、王薇、趙欣欣、劉樸、王雪。IDB22/T2024—2014大白菜霜霉病抗性鑒定技術規范1范圍本標準規定了大白菜霜霉病抗性鑒定的接種體制備、接種方法、室內抗性鑒定、病情調查、抗病性評價以及鑒定記載表格。本標準適用于大白菜資源對大白菜霜霉病抗性的室內鑒定及評價。2術語和定義下列術語和定義適用于本文件。2.1霜霉病cabbagedownymildew由卵菌門霜霉菌屬蕓薹叉梗霜霉菌（PeronosporaparasiticaFr.）引起的一種氣傳病害，屬專性寄生性卵菌病害，該病害是我省大白菜最重要的葉部病害之一,不同生育期均嚴重發生，流行重病年份造成大白菜減產50%～60%，導致大白菜品質下降、產量降低。參見附錄A。人工接種artificialinoculationscale在適宜條件下，通過人工操作將接種體置于植物體適當部位并使之發病的過程。病情級別diseaserating1DB22/T2024—2014人為定量植物個體或群體發病程度的數值化描述。2.7病情指數diseaseindex(Dl)通過對植物個體發病程度（病情級別）數值的計算所獲得的群體發病程度的數值化描述形式。3接種體制備3.1采集從田間采集具有典型霜霉病病斑的大白菜病葉，用清水沖洗掉病斑上老的霉層后，置于20℃、濕度（RH)100％的培養箱中，黑暗保濕24h，待長出灰色霉層后，將病葉浸于水中，用干凈的毛刷將病斑上新產生的孢子囊刷于盛有無菌水的燒杯中，獲得分離物。分離物經形態學鑒定確認為蕓薹叉梗霜霉菌PeronosporaparasiticaFr.后，直接用于接種或擴繁備用。3.2接種體繁殖和制備3.2.1接種體繁殖常用的繁殖方法為：在溫室內將霜霉病菌的分離物接種在感病品種上繁殖。3.2.2接種懸浮液制備接種前用干凈毛刷刷取葉片上長出的新鮮孢子囊于盛有無菌水的燒杯中，再滴加0.06g/LTween-20，高速攪拌（1200r/min)3min～5min后即得孢子囊懸浮液，用血球計數板計數稀釋至接種濃度。霜霉病菌孢子囊懸浮液放置時間最好不超過30min，從菌液制備到接種完成應限制在2h內。3.3.1活體植株保存法將霜霉病菌接種到易感霜霉病的大白菜品種葉片上，4d～5d后取發病葉，置于5%蔗糖液內保濕，這種方法可保存霜霉菌30d，可產生大量接種體。病葉存于-20℃條件下，保存60d后孢子囊仍有致病力。可將此法與寄主活體保存交替進行。4室內抗性鑒定4.1鑒定室人工接種鑒定室應具備人工調節溫度、濕度及光照的條件，使人工接種后具備良好的發病環境。鑒定設計2DB22/T2024—2014鑒定材料隨機排列或順序排列，重復3次，每一處理10株苗。4.3鑒定對照材料設高抗品種為抗病對照品種，設當地易感病品種為感病對照品種。4.4鑒定材料育苗4.4.1種子消毒鑒定種子經5%次氯酸鈉溶液浸種10min后，清水沖洗，放入墊有兩層濾紙的培養皿中，置于恒溫培養箱中28℃催芽。待胚根長至0.5cm時，播種于育苗缽內。4.4.2育苗基質育苗基質為草炭：蛭石：菜田土=2：1：1，經134℃高溫蒸汽滅菌30min。4.4.3育苗在日光溫室里育苗，室內溫度為20℃～25℃，每缽1苗。4.5接種4.5.1接種時期大白菜為9～10葉期。4.5.2接種體濃度5×104.5.3接種方法采用噴霧接種法。用小型手持噴霧器，將接種液均勻地噴于大白菜葉片正、反兩面欲下滴為止。3個孢子囊/mL。將植株置于18℃～20℃鑒定室內黑暗保濕（RH為100%)24h，每日天光照14h，不再保濕。接種后管理期間適時澆水（每五天澆一次水），溫度控制在20℃～24℃范圍內。5病情調查接種后7d調查病情。5.2病情級別劃分病情級別及其相對應的癥狀描述見表1。3DB22/T2024—2014表1大白菜霜霉病病情級別劃分病情級別癥狀描述012345無癥狀病斑面積占葉面積的1/10以下病斑面積占葉面積的1/10～1/4病斑面積占葉面積的1/4～1/2病斑面積占葉面積的1/2～3/4病斑面積占葉面積的3/4，以至干枯5.3調查方法調查接種株發病情況，根據病害癥狀描述，進行調查，記載單株病情級別，計算病情指數（DI）。病情指數按公式(1)計算：?(s×n)DI=×100...................................(1)N×S式中：DI—病情指數s―各病情級別代表數值；n―各病情級別病株（葉）數；N一調查總株（葉）數；病情指數（DI）DI=0抗性評價免疫（I）高抗（HR）抗病（R）中抗（MR）感病（S）高感（HS）4DB22/T2024—2014當感病對照材料達到其相應感病程度（DI>50），該批次抗霜霉病鑒定視為有效。7鑒定記載表格大白菜霜霉病抗性鑒定結果記載表格見表3。表3大白菜霜霉病抗性鑒定結果記載表品種/種質重復病情級別病情平均病指抗性評價編號來源名稱區號指數012345ⅠⅡⅢ播種日期接種日期接種生育期調查日期鑒定技術負責人（簽字）5DB22/T2024—2014AA附錄A（資料性附錄）大白菜霜霉病病原菌的相關資料A.1分類地位大白菜霜霉病病原菌（PeronosporaparasiticaFr.）屬管毛生物界(Stramenopila)，卵菌門(Oomycota)，卵菌綱（Oomycetes），霜霉目(Peronosporales)，霜霉科（Peronosporaceae），霜霉屬（Peronospora）。A.2形態描述菌絲體無色，無隔，在絲胞間生長，靠吸器伸入細胞內吸水分和營養，吸器為囊狀、球狀或分叉狀。無性繁殖時，從菌絲上生出孢囊梗，由氣孔伸出，無色，無隔，單生或2～4根束生，長260μm～300μm，主枝基部稍膨大，重復的兩叉分枝，頂端2～5次分枝，主軸和分枝呈銳角，頂端的小梗尖銳，彎曲，每端長一個孢子囊。孢子囊無色，單胞，長圓形至卵圓形，（24～27）μm×（15～20）μm，萌發時多從側面產生芽管，不形成游動孢子。卵孢子單胞，球形，黃褐色，直徑30μm～40μm，表面光滑，胞壁厚，表面皺縮或光滑，抗逆性強，條件適宜時可直接萌生芽管侵染寄主。A.3寄主范圍大白菜霜霉病菌可以侵染大白菜、小白菜、蘿卜、油菜、花椰菜、芥菜等十字花科蔬菜。A.4病害癥狀幼苗受害,子葉正面產生黃綠色斑點,葉背面有白色霜狀霉層；成株期發病,主要為害葉片,最初葉正面出現淡黃色或黃綠色不明顯病斑,后擴大變為黃褐色病斑,病斑因受葉脈限制呈多角形或不規則形,葉背密生灰白色霜狀霉層；留種株莖部、花梗發病呈肥腫彎曲畸形；種莢染病表現黑褐色壞死斑。大白菜霜霉病發病特性與環境濕度密切相關，天氣潮濕時，葉背面產生白色稀疏的霉層，病斑連片，常造成大白菜葉片變黃枯死，嚴重影響大白菜包心。低溫多雨、溫度忽高忽低、晝夜溫差大、露水大易發生霜霉病，而且病害癥狀易發生變化，為病害正確診斷造成了困難。A.5傳播途徑大白菜霜霉病菌主要由病斑上長出的孢子囊通過風、雨傳播，從植株的表皮和氣孔侵入，引起發病。病菌隨病殘體在土壤中或十字花科蔬菜植株上或冬貯種株的根頭上越冬，有時還可混在種子中越夏或越冬，次年春季條件適宜時萌發侵染幼苗，由春播十字花科蔬菜傳到白菜等秋播十字花科蔬菜上，混在秋播種子上的病菌，播后直接為害幼苗。南方全年種植十字花科蔬菜的地區，病菌可在寄主上全年傳播為害。A.6大白菜霜霉病發生規律6DB22/T2024—2014A.6.1侵染循環病菌主要以卵孢子隨病殘體在土壤中越冬，或以休眠菌絲潛伏在白菜留種株組織內越冬，也可以卵孢子附著在種子表面或隨病殘體混雜在種子中越冬。來年春季，越冬卵孢子萌發侵染小白菜、白菜、甘藍、薹菜等，以后再侵染大白菜，引起發病。秋季大白菜播種越早發病越重；病毒病流行年份霜霉病也大發生。A.6.2影響病害發生發展的主要因素A.6.2.1溫度菌絲生長溫度為20℃～24℃，產生孢子囊的適溫為8℃～12℃，孢子囊萌發適溫為7℃～13℃，侵入寄主的最適溫度為16℃。孢子囊形成、萌發和侵入均需要較高濕度，最好有水滴存在。孢子囊對光敏感，不耐干燥。A.6.2.2濕度高濕是孢子囊形成、萌發和侵染的重要條件，多雨時病害常嚴