附件：一次性使用聚氯乙烯輸血器中可瀝濾物鄰苯二甲酸二（2-乙基己基）酯（DEHP）增塑劑的研究一、概述DEHP，是Di-(2-ethylhexyl)phthalate的縮寫，全名為鄰苯二甲酸二（2-乙基己基）酯。分子式：C24H38O4結構式：分子量：390.6CAS編號：117-81-7物理狀態：常溫下為無色無臭液體。不溶于水，溶于乙醚、乙醇、礦物油等。熔點：-50℃或-55℃沸點:在5mmHg時大約230℃(BASF1994b;Clayoton1981,inHSDB2005)在1013hP時385℃蒸汽壓：0.000034Pa在20℃水溶性：0.003mg/L在20℃醇溶性：>100mg/mL(95%乙醇，22℃)密度：0.986g/cm3at20℃(IARC1982，inHSDB2005)由于聚氯乙烯（PVC）材料本身質地較硬且加工難度較大，為了使PVC制品柔軟往往加入大量的增塑劑。在常用的增塑劑中，DEHP由于其與優異的增塑性能、易獲得性以及和PVC的良好相容性，使得其在成為輸血器中最常見的增塑劑。DEHP一般先與PVC樹脂以及其他添加劑通過共混等方式制備含有DEHP的PVC粒料，在此共混過程中，其不以共價鍵結合而是物理結合于PVC分子上。一般來說，在軟質PVC粒料中DEHP的質量百分比可高達20%~50%。注：材料組成及牌號等信息可能涉及企業專利等信息，此處省略。但在正式的遞交文件中應予以明確（如適用）。二、浸提液制備的論述2.1總則由于輸血器中的DEHP為脂溶性物質，易溶于乙醇，其輸血器中含量可高達21.60%-33.37%。一次性使用輸血器在臨床上為只接觸血液的器械，對于材料中可瀝濾物DEHP的研究，原則上應選擇血液作為浸提介質，采用臨床相同使用條件進行滴注。由于難以收集足夠的血液或招募足夠的志愿者用于研究，因此使用血液或血液成分作為浸提介質來評估器械釋放的DEHP不是很實際。因而需選擇一個合適的替代溶劑，本研究擬選擇密度為0.9373至0.9378g/mL的乙醇/水混合溶液作為替代浸提溶劑，為了驗證乙醇/水混合溶液的浸提能力嚴于血液，進行了以下試驗驗證。同時一次性使用塑料血袋的國際標準（ISO3826-1）中采用密度為0.9373-0.9378g/mL的乙醇水混合物作為血液替代溶劑測定血袋中DEHP的釋放量。2.2浸提能力的驗證為了驗證乙醇/水混合溶液的浸提能力嚴于血液，收集來自三名健康志愿者的血液樣品，用EDTA鹽抗凝并儲存在玻璃容器中。這些血樣作為第一組用于模擬實際使用情況。第二組采用密度（ρ）為0.9378g/mL（20℃）的水/乙醇混合物在相同條件下浸提DEHP（相同的提取介質體積，相同的滴落速率和相同的滴度、相同環境溫度）。測定結果見表1。表1血液和水/乙醇混合物提取能力比較血液(DEHP釋放量,mg)乙醇/水(DEHP釋放量,mg)1a2a3a0.1100.0680.0732.84a:數字1,2和3對應于來自三名志愿者的全血樣品。由上述結果可以看出乙醇/水混合溶液的提取能力遠高于血液。因而，對該產品選擇乙醇/水混合溶液作為浸提溶液。解讀：應結合器械臨床使用情況選擇合適的浸提方式，若選擇使用替代溶劑進行浸提，適用時，應結合可瀝濾物的性質通過論述或試驗方式證明，替代溶劑的浸提能力嚴于臨床接觸的介質。三、分析方法3.1儀器及參數：氣相色譜質譜聯用儀：安捷倫7890GC和配備電子電離（EI）源和四極桿分析儀的安捷倫5975C質譜儀。色譜柱:HP-5MS（30m×0.25mm×0.25μm，AgilentJ＆WGC柱，USA）；掃描方式：溶劑延遲時間3.5min，全掃模式45-450amu（定性）和選擇離子掃描m/z=149（定量）；分流模式：分流比5:1；流速:1.5mL/min；進樣量：1μL/樣品；柱溫箱條件：起始溫度150℃，保持0.5分鐘，然后將以20℃/分鐘升至280℃，保持7分鐘。3.2方法學驗證3.2.1專屬性分別取DEHP標準溶液、乙醇/水空白對照和正己烷溶劑進行分析。色譜圖如下：圖1SIM模式下DEHP標準溶液（10μg/mL）的色譜圖圖2SIM模式下乙醇/水空白對照的色譜圖圖3在SIM模式下篩選的正己烷試劑的色譜圖由于各種鄰苯二甲酸酯的廣泛使用，使得其在環境中廣泛分布，如空氣、水、土壤、灰塵、沉積物、海產品和人體組織。在測試過程中，乙醇/水的空白對照有DEHP的響應，但是因其響應值較低不會對結果測定造成干擾。解讀：確認試驗中所用到的溶劑體系及浸提液基質均未對DEHP的測定產生影響。3.2.2線性及范圍以正己烷作為溶劑時，DEHP的線性范圍為0.1-200μg/mL。相關系數大于0.999。實際工作中應根據待測物濃度選擇合適的工作標準曲線范圍。解讀：DEHP血液接觸途徑TI值為0.6mg/kg/day，由于輸血器可用于嬰兒，按臨床最嚴格應用人群計算，根據GB/T16886.17，取嬰兒的默認體重為3.5kg,則嬰兒的可耐受暴露量=2.1mg/day（0.6mg/kg/天*3.5）。嬰兒一天最大輸血量按臨床最差情況350mL計，則溶液中最低濃度為6μg/mL。線性最低點0.1μg/mL可以滿足最具挑戰性人群的評價要求。3.2.3重復性為了驗證重復性，使用具有四種不同濃度水平的樣品溶液來表示0.1-200μg/mL的線性范圍內的高，中，低和極低濃度，并且在每種濃度重復測定3次。結果見表2。表2重復性驗證結果濃度(μg/mL)乙醇/水（n=3）RSD（%）血液（n=3）RSD（%）極低(0.1)2.333.88低(1.0)4.516.71中(10)8.800.57中（100）7.162.24高(180,200a)5.027.86a:乙醇/水和血液樣本中DEHP加入量分別為180μg/mL和200μg/mL解讀：覆蓋線性范圍內高、中、低三種濃度。注：乙醇/水和血液樣本中部分較高濃度水平的3份樣品的測定RSD值在5.02%-8.80%之間，該結果來自乙醇/水和血液樣本的浸提溶液，樣本本底較為復雜，除此之外，該RSD值還涵蓋了樣本的真空干燥、復溶等復雜處理過程。同時考慮到對某些醫療器械，已知可瀝濾物的浸提結果本身存在個體差異，因而，本指導原則在考慮方法精密度時，描述為“同一份均勻供試品溶液，經多次取樣測定所得結果之間的接近程度”，重點考察在“同一均勻供試品檢驗液”下，檢驗方法能夠達到的精密度。3.2.4回收率此外，采用回收率來評估方法的準確。回收率測定為測定5個不同濃度水平的加標樣品，每個濃度水平重復3次，結果見表3。表3回收率驗證結果加標濃度μg/mL回收率乙醇/水(n=3)血液(n=3)回收率(%)RSD(%)回收率(%)RSD(%)0.194.232.3392.433.88194.234.5191.046.7110101.538.8098.900.5710089.587.1698.152.24180，200a94.605.0295.357.86a:乙醇/水和血液樣本中DEHP加入量分別為180μg/mL和200μg/mL解讀：覆蓋線性范圍內高、中、低三種濃度，并同時獲得樣本中精密度驗證結果。3.2.5檢測限（LOD）和定量限（LOQ）由于環境背景中存在的DEHP背景水平影響LOD和LOQ評估。當使用經過篩選并發現幾乎沒有背景DEHP的正己烷時，制備一系列極低濃度水平的DEHP標準品，采用信噪比法3：1和10：1估計LOD和LOQ，SIM模式下方法的LOD和LOQ分別約為1ng/mL和2.5ng/mL。然而由于乙醇/水中存在DEHP采用信噪比法評估可能不是很準確。因此本研究中關于LOD和LOQ值評估參考ICHQ2（R1）6.3和7.3中規定的方法，并分別使用如下計算公式：其中δ=響應的標準偏差，S=校準曲線的斜率本研究通過進樣空白樣品（乙醇/水混合物和全血），每種空白樣本重復10次計算響應的標準偏差來獲得δ值。本研究中計算的LOD和LOQ值分別為：血液樣本為3.08ng/mL和9.35ng/mL，乙醇/水混合物為2.91ng/mL和8.81ng/mL。試劑篩選結果表明，相同級別試劑可能存在不同的DEHP背景水平。因此，可能需要在供應商變更甚至批號更改時逐個報告DEHP的LOD和LOQ值。解讀：血液樣本和乙醇/水樣本中檢測限均可滿足臨床最挑戰應用人群的毒理學評估要求。3.3樣品測定結果使用乙醇/水混合溶液和血液分別模擬臨床使用方式進行樣品制備，采用所建立的GC-MS方法測定對浸提液進行測定，測定結果見表5。表5樣品測定結果產品名稱浸提溶劑DEHP釋放量，mg一次性使用輸血器乙醇/水混合溶液2.84血液0.068-0.073注：使用100mL提取介質（水/乙醇混合物和血液）。試驗用血液來自三名健康志愿者解讀：根據乙醇/水樣品液中濃度為：28.4μg/mL，血液樣本中濃度為：0.68-0.73μg/mL，線性范圍0.1μg/mL-200μg/mL，供試品溶液中測定濃度在線性范圍內。四、結論本研究建立了GC-MS方法用于測定替代溶劑和全血中DEHP的量，產品中DEHP的釋放量為2.84mg/套（乙醇/水混合溶液）。根據FDADEHP安全性評估文件，腸外途徑的DEHP耐受攝入量（TI）值為0.6mg/kg（體重）/天，取成人體重70kg，兒童10公斤，新生兒3.5公斤（ISO10993-172002）作為默認值。計算人體D