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大豆疫霉病菌檢疫檢測與鑒定方法INY/T2114—2012本標準按照GB/T1.1—2009給出的規(guī)則起草。1下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文GB/T6682—2008分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法3原理大豆疫霉病菌(PhytophthorasojaeKaufmann&.Gerdemann)屬藻菌界(Chromista),卵菌門(Oo-孢子囊及卵孢子形態(tài)特征進行鑒定；PCR檢測中，利用特異引物對病菌DNA擴增時獲得的特異DNA在大豆生長期進行田間癥狀目測踏查，重點調查田邊地頭及地勢低洼積水處27.3.2葉碟誘捕方法3取種子中青癟的可疑籽粒，清洗后用10%KOH水溶液浸4h,取種皮在100倍～400倍顯微鏡下檢查是否有卵孢子，以內種皮大豆疫霉病菌卵孢子存在與否為標準。大豆疫霉病菌卵孢子圓形，淡黃褐種子樣品不少于1kg,置于低溫干燥處至少保存6個月，以備復檢。土壤樣品不少于100g經室溫分離并鑒定為大豆疫霉病菌的菌株可轉接到胡蘿卜培養(yǎng)基斜面上，置于10℃冰箱中保存，必要時45678NY/T2114—20129NY/T2114—2012表F.1大豆疫霉病菌PCR檢測引物引物序列片段大小退火溫度ATCTTGGCGACTGAGGCTGCT引物名稱194℃5min;94℃30s,60℃30s,294℃5min;94℃30s,60℃30s,394℃5min;94℃30s,44℃30s494℃5min;94℃30s,58℃30s,594℃5min;94℃30s,58℃30s樣品PCR擴增產物經凝膠成像系統(tǒng)的紫外光下觀察，凝膠上陽性對照出現一條特異性條帶(根據以上5種不同引物，特異性位置也不同),而陰性對照或空白對照沒有該特異性DNA條帶。供試樣品G.2.1土壤樣品采用FastDNAOSPIN試劑盒進行DNA的提取。G.2.1.1加500mg的土壤到LysingMatrixEtube中。在管中加入978μL的磷酸鈉緩沖液和G.2.1.2將LysingMatrixEtube在FastPrep@Instrument以55000g的速度震動40s;同時以NY/T2114—2012

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