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要：分析了培養基模擬灌裝試驗的培養結果，對模擬灌裝試驗異常結果的調查內容與樣品管理進行了初步探討，以評估模擬灌裝試驗結果對無菌產品生產結果評估的可靠性。關鍵詞：培養基模擬灌裝試驗；異常結果；結果觀察；樣品管理

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引言在GMP中，培養基模擬灌裝試驗是無菌藥品生產管理的重要組成內容。從國內外模擬灌裝試驗的一般法規到具體的指導原則，都體現出了對培養基模擬灌裝試驗的高度關注。尤其需要關注的是，這些法規和指導原則都提出，應對灌裝生產過程中的各種考察因素和最差條件進行試驗考察，以確保模擬灌裝試驗的微生物培養結果能真正代表無菌藥品灌裝生產的微生物污染水平。筆者結合多年的實際操作經驗，得出以下基本結論：培養基模擬灌裝試驗絕對不是單純對模擬試驗這個生產過程進行管理，而是將模擬灌裝試驗所得到的培養基樣品的微生物培養結果與無菌產品生產的無菌檢查結果相結合進行互動管理才是有意義的。關于模擬灌裝過程的考察因素及試驗方案設計的研究有很多，本文擬對培養基模擬灌裝試驗的結果與樣品管理進行初步探討。《GMP指南：無菌藥品》給出了較詳細的“無菌工藝模擬試驗結果解讀”，對模擬灌裝試驗的結果處理及污染調查提出了指導意見：當培養基灌裝結果出現污染時，不管是否符合標準，都必須進行調查，科學評估無菌工藝的可靠性以及上市產品可能存在的風險。對于超出標準的結果，應當在調查清楚培養結果超標的原因后，再次進行培養基模擬灌裝生產。也就是說，培養基模擬灌裝試驗的結果更多地要用于評估生產線的無菌操作工藝的可靠性以及上市產品可能存在的風險。因此，有必要強調建立將模擬灌裝試驗的微生物培養結果與產品生產的無菌檢查結果評價相結合的管理規程及操作規程。比如，在模擬灌裝試驗方案和報告中明確要求，將培養基模擬灌裝試驗的結果與該生產周期中的所有生產批次產品的灌裝檢查結果進行對比分析，確認兩者之間的差異情況，進而評估模擬灌裝試驗結果與產品生產結果評估的相關程度和可靠性。

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培養基模擬灌裝試驗的培養與結果觀察培養基模擬灌裝試驗所要考察的因素應當包括可能影響產品無菌性能的每一個要素（應注意這里是一個數學上的全集概念，缺少其中任何一個因素的子集都很可能會被認為是無效的），一般灌裝好的培養基樣品在進行恒溫培養前需要進行反復（3～5次，每次停留2～3

s）倒置與振搖，這樣做的目的是確保所有的產品部件都接觸到了培養基，使可能攜帶的微生物可以很好地進入到灌裝好的培養基中，并且得到有效培養并最終表現出來。此外，需注意的是，在培養基模擬灌裝過程中已經發生異常的培養基樣品的結果可以不納入培養基試驗結果中，不用于試驗結果的評估，但是仍需要按照正常程序進行處理，并且按照既定分組觀察其污染情況。對于與密封性無關的缺陷（如外觀缺陷）樣品也應進行培養，不得簡單地直接將這部分樣品（或其微生物培養結果）剔除。有密封性缺陷的樣品可作廢品剔除，但應當記錄剔除數量和原因。培養過程中發現的任何損壞樣品，也應列入培養基灌裝試驗的批記錄數據中。如果要將這類已培養的樣品從最后的結果判定計算中剔除，則必須充分說明理由，并在培養基灌裝試驗報告中做出合理解釋。通常培養基樣品的培養溫度應適宜于一般微生物和環境分離菌的恢復生長，藥品生產企業采用的常規做法是PIC/S推薦的先在20～25℃下培養7天，然后將培養基樣品倒置，在30～35℃下培養7天，在樣品倒置處理過程中注意觀察樣品培養結果。當培養結果出現陽性時，需要對樣品進行拍照（照片上應保存當前時間和地點），并將樣品移出培養間直至遠離生產區域再作處理。需要注意的是，陽性培養基樣品的進一步處理及微生物種屬的鑒定都需要額外處理，必要時，還要評估確保這些處理方法不會對生產車間、產品生產、無菌試驗等產生不良影響。培養基樣品就是模擬灌裝試驗的產品，經過兩個階段的培養，參照常規產品的結果檢查事項，對培養基的培養結果進行檢查，除了需要關注污染、長菌的結果之外，還要關注產品灌裝的常規異常，比如加塞異常、軋蓋異常、玻璃瓶裂紋、黑點、纖毛、玻璃碎屑等。對于各種異常，應建立賬本進行登記，并保存相應的樣品或者照片。將培養基模擬灌裝試驗的結果與該生產周期中的所有生產批次產品的灌裝檢查結果進行對比分析，以便確認兩者之間的差異情況。在樣品培養檢查過程中發現的所有被懷疑可能受到污染的樣品，應立即交給質量檢測試驗室的微生物專業人員進行鑒定處理。假如難以判斷微生物污染是由損壞引起，還是本身就存在，則應進行調查，以確定原因。為評估產品正式灌裝前的污染風險，可將用于先期調試的樣品全部單獨培養以獲得有價值的信息。這些樣品的培養結果可以不計入最后的培養基模擬灌裝試驗結果。培養基灌裝記錄應包括對一整批灌裝過程中報廢數量的詳細說明。

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培養基模擬灌裝試驗異常結果的調查與樣品管理培養基培養完成后，目檢培養基是否渾濁，是否有微生物生長。培養基樣品的檢查要由經過培訓、有資質的能夠發覺微生物生長跡象的人員負責。需要注意的是，并不是所有的污染都會明顯表現出來，當出現疑似污染時，應進一步培養觀察，并做增菌試驗。結合GMP要求，總結出了培養基模擬灌裝試驗失敗調查的內容，包括：生產環境的監控數據評估、對培養基污染的評估、替代粉末無菌測試的評估、對氣體取樣結果的評估、對水的微生物的評估、對培養基的評估、懸浮粒子監控評估、清潔和消毒評估、模擬灌裝用無菌消毒劑的配制檢查、人員評估、干預操作的評估、灌裝生產設備的評估等。培養基模擬灌裝試驗檢查結果合格后，一般都會將培養基樣品進行報廢處理，具體程序參照產品報廢程序進行。筆者認為，即便是培養結果正常的無污染培養基樣品的報廢，也應保存到下一個生產周期之后再進行處理比較合適。對于無微生物污染的其他檢查結果異常的產品，比如加塞異常、軋蓋異常、玻璃瓶裂紋、黑點、纖毛、玻璃碎屑等，應保存樣品且拍照。樣品可以用于對檢查過程的可靠性進行重復考察。對于這些異常樣品，可以按照GMP認證周期進行管理，保存5年。對于微生物污染的樣品，拍照后及時清理生產區，并對培養環境做必要的清潔消毒。然后送到質量檢測試驗室進行微生物鑒別考察，以便確定污染來源。鑒別結果也應拍照，所有拍照結果有必要向模擬灌裝試驗的相關人員進行講解，增強對無菌灌裝生產與培養基模擬灌裝試驗的微生物污染風險的認識，以便更好地控制微生物污染。

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結語培養基模擬灌裝試驗用于生產周期內產品生產的無菌保障能力的評估，毫無疑問，在模擬灌裝試驗的管理過程中，需要結合生產線的具體情況，建立培養基樣品的微生物培養檢查結果與產品生產的無菌檢查灌裝結果之間的關聯性，這樣才能確保這種評估的可靠性和實際的生產管理意義。相反，如果沒有完成這項工作，再多的、生產規模再大的模擬灌裝試驗只能是徒增企業管理生產成本，毫無價值可言。對于培養基樣品的異常結果，應給予與產品異常結果同等的關注，