第三章

基因工程第二節

基因工程的基本操作程序基因A基因B基因C非基因片段放大基因的結構真核生物與原核生物基因組成不盡相同。原核生物基因的結構RNA聚合酶識別和結合位點啟動轉錄結束轉錄非編碼區:位于編碼區的上游和編碼區的下游

不編碼蛋白質，但可以調控基因的表達編碼區:可轉錄相應的mRNA，編碼蛋白質。真核生物基因的結構前體mRNA外顯子外顯子外顯子內含子內含子內含子:編碼區不編碼蛋白質的序列外顯子:編碼區編碼蛋白質的序列真核生物外顯子內含子原核生物筆記P76首端起始密碼子終端終止密碼子非編碼區:不編碼蛋白質，但可以調控基因的表達

編碼區:可編碼蛋白質。內含子:編碼區不編碼蛋白質的序列外顯子:編碼區編碼蛋白質的序列筆記P76（2）編碼相同數目氨基酸的蛋白質，原核細胞與真核細胞基因結構一樣長嗎？（1）基因結構中存在哪些非編碼序列？包括非編碼區和內含子【思考】真核細胞基因更長，因為其編碼區含內含子從社會中來1997年，我國政府首次批準商業化種植轉基因抗蟲棉。到2015年，我國已育成轉基因抗蟲棉新品種100多個，減少農藥用量40萬噸，增收節支社會經濟效益45億元1.你知道轉基因抗蟲棉抗蟲的機制是什么嗎？2.培育轉基因抗蟲棉一般需要哪些步驟？培育轉基因抗蟲棉的簡要過程

普通棉花（無抗蟲特性）棉花細胞抗蟲棉提取表達Bt基因導入與載體拼接重組DNA分子1.目的基因的篩選與獲取2.基因表達載體的構建（核心）3.將目的基因導入受體細胞4.目的基因的檢測與鑒定Bt基因蘇云金桿菌從社會中來在基因工程的設計和操作中，用于改變受體細胞性狀或獲得預期表達產物等的基因就是目的基因。根據需求的不同，目的基因也不同，主要指編碼蛋白質的基因第一步：目的基因的篩選與獲取一.篩選合適的目的基因1.目的基因2.實例與生物抗逆性相關的基因與優良品質相關的基因與生產藥物相關的基因與毒物降解相關的基因與工業用酶相關的基因資料：蘇云金桿菌通過產生蘇云金桿菌伴胞晶體蛋白（Bt抗蟲蛋白），破壞鱗翅目昆蟲的消化系統來殺死棉鈴蟲。4.方法：從相關的

和

的基因中進行篩選已知結構功能清晰一.篩選合適的目的基因

*隨著測序技術的發展，以及序列數據庫（GenBank）、序列比對工具（如BLAST）等的應用，越來越多的基因的結構和功能為人們所知，為找到合適的目的基因提供了更多的機會和可能4.方法：從相關的

和

的基因中進行篩選已知結構功能清晰一.篩選合適的目的基因實例：蘇云金桿菌的殺蟲作用于Bt基因有關掌握了Bt基因的序列信息對Bt基因的表達產物——Bt抗蟲蛋白有較為深入的了解蘇云金桿菌制劑可防治棉花蟲害Bt基因是培育轉基因抗蟲棉較為合適的目的基因思考：（P77）1.Bt抗蟲蛋白的抗蟲原理是什么？2.抗蟲棉中的Bt抗蟲蛋白是否會對人畜產生危害？為什么？

當Bt抗蟲蛋白被分解為多肽后，多肽與害蟲腸上皮細胞的特異性受體結合，導致細胞膜穿孔，最后造成害蟲死亡。

Bt抗蟲蛋白只有在某類昆蟲腸道的堿性環境中才能表現出毒性，而人和牲畜的胃液呈酸性，腸道細胞也沒有特異性受體，因此，Bt抗蟲蛋白不會對人畜產生上述影響二.目的基因的獲取目的基因的獲取方法：人工合成、

PCR擴增、從基因文庫獲取。1.人工合成☆前提：僅適用于較短的目的基因、核苷酸序列已知DNA合成儀用化學方法合成DNA2.PCR擴增(聚合酶鏈式反應)PCR儀☆前提：僅適用于較長的目的基因、核苷酸序列已知①基因文庫的構建過程

將含有某種生物不同基因的許多DNA片段，導入到受體菌的群體中儲存，各個受體菌分別含有這種生物的不同基因。②基因文庫類型基因組文庫部分基因文庫（主要是cDNA文庫）3.從基因文庫中直接獲取②基因文庫類型（1）基因組文庫的構建提取某生物全部DNA用適當限制酶切割許多DNA片段該生物基因組文庫每個受體菌含有一段不同的DNA片段與載體連接導入受體菌群含有某種生物全部基因片段的重組DNA的克隆群體。【說明】基因文庫中不是直接儲存相應基因，而是保存受體菌群，受體菌群中含有基因。基因組文庫含有某種生物部分基因片段的重組DNA的克隆群體。cDNA文庫的構建——mRNA逆轉錄形成mRNA雜交雙鏈單鏈DNA雙鏈cDNA(cDNA)該生物cDNA文庫基因組文庫中的基因含有啟動子、終止子，cDNA文庫中的基因不含以上結構。與載體連接導入受體菌群逆轉錄酶核酸酶HDNA聚合酶（2）部分基因文庫的構建文庫類型cDNA文庫基因組文庫文庫大小基因中啟動子基因多少物種間基因交流小大無有某種生物的部分基因某種生物的全部基因可以部分基因可以目的基因獲取方法1.人工合成2.利用PCR擴增3.從基因文庫中獲取基因組文庫：含某種生物的全部基因部分基因文庫（如：cDNA文庫）：含某種生物的部分基因筆記1.為從根本上解決水稻中的高植酸問題，可將植酸酶基因導人水稻,培育低植酸轉基因水稻品種。如下圖是獲取植酸酶基因的流程。據圖回答下列問題:(1)圖中基因組文庫

(填“小于”“等于”或“大于”)cDNA文庫。(2)通過基因組文庫篩選分離出的目的基因I與圖中通過cDNA文庫篩選分離出的目的基因Ⅱ

(填“相同”或“不同”)。大于不同

先對目的基因進行擴增思考:獲取一個Bt基因之后，是否就該立即開始準備轉基因操作？抗蟲基因快速獲得大量抗蟲基因蘇云金桿菌提取

三.利用PCR獲取和擴增目的基因1.PCR的概念PCR是

的縮寫，是一項根據

的原理，在

提供參與DNA復制的

與_______，對

進行

的技術；聚合酶鏈式反應DNA半保留復制體外各種組分反應條件目的基因的核苷酸序列大量復制

①全稱：______________________________②原理：______________________________③操作環境：__________________________④目的：______________________________⑤優點：______________________________聚合酶鏈式反應DNA半保留復制體外（PCR儀）對目的基因的核苷酸序列進行大量復制可以特異性的快速擴增目的基因回顧：DNA復制的過程2.復制所需的基本條件:參與的組分在DNA復制中的作用

解旋酶DNA母鏈

合成DNA子鏈的原料催化合成DNA子鏈

提供DNA復制的模板斷開氫鍵，打開DNA雙鏈使DNA聚合酶能夠從引物的3’端開始連接脫氧核苷酸（體外用耐高溫的DNA聚合酶）（體外用高溫代替）4種脫氧核苷酸DNA聚合酶緩沖溶液（含Mg2+）（實際用dNTP）（2種）引物維持反應體系pH穩定,激活DNA聚合酶dNTP水解能量AGCT4種脫氧核苷酸2.復制所需的基本條件:dNTP:脫氧核苷三磷酸脫氧含氮堿基三磷酸

腺嘌呤PPP~~脫氧核糖dATPdGTPdCTPdTTP2.復制所需的基本條件:

鳥嘌呤PPP~~脫氧核糖

胞嘧啶PPP~~脫氧核糖

胸腺嘧啶PPP~~脫氧核糖dATP與ATP有何區別？脫氧核糖核糖dATPATP

腺嘌呤PPP~~核糖

腺嘌呤PPP~~脫氧核糖dNTP:脫氧核苷三磷酸（dATP、dTTP、dCTP、dGTP）提供能量提供原料筆記水解

含氮堿基PPP~~脫氧核糖思考：體內DNA復制和PCR技術的能量來源分別是？體內DNA復制時能量來源：PCR技術能量來源：

由dNTP水解提供能量。解旋：由ATP提供合成子鏈：由dNTP水解提供2.復制所需的基本條件:參與的組分在DNA復制中的作用

解旋酶DNA母鏈

合成DNA子鏈的原料催化合成DNA子鏈

提供DNA復制的模板斷開氫鍵，打開DNA雙鏈使DNA聚合酶能夠從引物的3’端開始連接脫氧核苷酸（體外用耐高溫的DNA聚合酶）（體外用高溫代替）4種脫氧核苷酸DNA聚合酶緩沖溶液（含Mg2+）（實際用dNTP）（2種）引物維持反應體系pH穩定,激活DNA聚合酶3′5′DNA聚合酶3′5′模板鏈子鏈DNA聚合酶只能將單個核苷酸加到已有鏈的3′-端，不能直接將單個的核苷酸聚合成鏈PCR擴增需要引物的原因？引物是什么？PCR擴增需要引物的作用？

使耐高溫的DNA聚合酶能夠從引物的3’端開始連接脫氧核苷酸。引物的本質是什么？化學本質：DNA單鏈或RNA單鏈體內：引物一般為RNA單鏈體外：引物一般是DNA單鏈或RNA單鏈DNA復制目的基因DNA①受熱變性后解為單鏈，②引物與單鏈相應互補序列結合；然后以單鏈DNA為模板③在DNA聚合酶作用下進行延伸，即將4種脫氧核苷酸加到引物的3’端，如此重復循環多次。每次循環一般可以分為變性、復性、延伸三步。3.PCR的過程DNA模板3.PCR的過程AGCT4種脫氧核苷酸引物耐高溫的DNA聚合酶反應體系中必須一次性加全所有所需物3.PCR的過程待擴增的DNA片段3′3′3′3′1.變性：溫度上升到90℃以上，雙鏈DNA解聚為單鏈3′3′3′3′2.復性：溫度降到50℃左右，兩種引物通過堿基互補配對與兩條單鏈DNA結合待擴增的DNA片段1.變性3.PCR的過程AGCT待擴增的DNA片段4種脫氧核苷酸3′3′3′3′3′3′3′3′1.變性2.復性3.延伸：溫度升至72℃左右，溶液中4種脫氧核苷酸在耐高溫的DNA聚合酶作用下連接成新的DNA鏈3.PCR的過程3.延伸：耐高溫的DNA聚合酶(Taq酶）4種脫氧核苷酸（DNTP）引物待擴增的DNA片段（模板）5’5’

變性

復性

延伸溫度上升到90℃以上，雙鏈DNA解聚為單鏈當溫度下降到50℃左右時，兩種引物通過堿基互補配對與兩條單鏈DNA結合。溫度上升到72℃左右時，溶液中的4種脫氧核苷酸在耐高溫的DNA聚合酶的作用下合成新的DNA鏈。過程：3′3′3′3′3′3′3′3′3′3′3′3′3′3′3′3′3′3′3′3′3′3′3′3′第一輪循環的產物作為第二輪反應的模板，經過變性、復性和延伸三步產生第二輪循環的產物。第二輪循環的產物作為第三輪反應的模板，經過變性、復性和延伸三步產生第三輪循環的產物。6.PCR的結果由于一個循環得到的產物又可以作為下一個循環的模板，因而每一次循環后目的基因的量可以增加一倍。即成

形式擴增（約為

，其中n為擴增循環的次數）。指數2n7.PCR產物的鑒定常采用瓊脂糖凝膠電泳來鑒定PCR的產物。思考：1.變性過程破壞的是哪種鍵？是否需要酶？2.PCR擴增過程是否需要ATP供能？氫鍵

不需要酶，需要90℃以上的高溫不需要

由dNTP水解供能歸納：思考：3.引物是什么？在復性過程中引物結合部位？子鏈延伸的方向？4.耐高溫DNA聚合酶的作用？短單鏈核酸

引物結合模板鏈的3’端3′3′子鏈從5'端→3'端延伸將單個核苷酸加到引物的3'-端歸納：（1）PCR反應中溫度的周期性改變是為了DNA聚合酶催化不同的反應

（

）（2）PCR擴增技術中，需用解旋酶使雙鏈DNA解聚

（

）（3）PCR過程使用的DNA聚合酶的特點是耐高溫

（

）（4）PCR技術中，DNA模板鏈上堿基G和C的比例越高，DNA變性解鏈的溫度就越高

（

）判斷常考語句，澄清易混易錯思考：在利用PCR獲取和擴增目的基因時，至少幾輪循環才會獲得只含目的基因的片段？第一次循環90℃以上，DNA雙鏈解開50℃左右，引物與DNA結合72℃左右，新DNA合成3’5’5’3’5’5’3’5’5’5’第二次循環3’5’高溫變性、低溫復性5’3’5’5’3’3’中溫延伸第二次循環3’5’高溫變性、低溫復性第三次循環3’5’中溫延伸第三次循環3’5’思考：在利用PCR獲取和擴增目的基因時，至少幾輪循環才能從DNA分子中獲得只含目的基因的片段？至少3輪循環才會獲得只含目的基因的片段為何放入的是整個模板，卻可以只獲得目的基因引物具有特異性第n次循環，消耗

個引物相關計算如果循環n次，則形成

個DNA分子片段。

則形成

條脫氧核苷酸鏈。如果循環n次，則共需消耗

個引物。

則共需消耗

對引物。如果循環n次，含引物的DNA分子片段

。

含2種引物的DNA分子片段

。2n2n+12n2n－12n+1－22n2n－2復性變性延伸比較PCR擴增技術和體內DNA復制的異同項目體內DNA復制PCR擴增技術解旋方式解旋酶催化DNA在

下變性解旋場所細胞內PCR擴增儀內酶

溫度條件需控制溫度，在

下進行結果相同點（1）模板：均需要DNA的兩條單鏈作為

；（2）原料：均為4種

；（3）酶：均需

酶高溫作用（細胞核）解旋酶、DNA聚合酶耐高溫的DNA聚合酶較高溫度模板脫氧核苷酸DNA聚合細胞內溫和條件完整的DNA分子DNA片段或目的基因用PCR可以擴增mRNA嗎？（P79）mRNA不穩定不可以直接擴增，需要將它逆轉錄成cDNA再進行擴增。②設計引物的依據是：已知目的基因兩端的核苷酸序列關于引物那些事兒①使用的兩種引物的序列相同嗎？不相同，目的基因兩端具有不同的核苷酸序列

設計引物是否需要知道目的基因的序列？設計引物是PCR技術關鍵步驟之一。某同學設計的兩組引物(只標注了部分堿基序列)都不合理(如下圖)，請分別說明理由。(1)第1組:

第2組:(2)兩種引物與模板鏈如何配對?引物Ⅰ和引物Ⅱ部分堿基發生互補配對而失效引物Ⅰ自身部分堿基發生互補配對而失效引物與模板鏈3'端互補配對設計引物是PCR技術關鍵步驟之一。某同學設計的兩組引物(只標注了部分堿基序列)都不合理(如下圖)，請分別說明理由。(3)兩種引物的原則:③引物GC含量要適宜，否則影響復性溫度①引物自身及兩種引物之間不能互補配對②引物長度適宜設計引物是PCR技術關鍵步驟之一。某同學設計的兩組引物(只標注了部分堿基序列)都不合理(如下圖)，請分別說明理由。(4)延伸時需要加入2種引物，原因是：

DNA是反向平行的雙鏈，DNA聚合酶只能從引物3'端延伸，用兩種引物才能確保DNA兩條鏈同時被擴增設計引物依據③引物GC含量要適宜，過高復性溫度也要升高①引物自身及兩種引物之間不能互補配對②引物長度適宜原則已知目的基因兩端的核苷酸序列筆記獲得目的基因后直接轉入受體嗎？不是。

游離的DNA片段進入受體細胞，一般會直接被分解，就算可以進行轉錄和翻譯成蛋白質

游離的DNA片段也無法隨著細胞分裂進行復制，導致子代細胞不再含有目的基因。1.基因表達載體的作用？2.將Bt基因送入受體細胞的載體需要具備什么條件？3.Bt基因在受體細胞中穩定存在、遺傳給下一代，并表達和發揮作用還需有哪些結構？第二步：基因表達載體的構建第二步：基因表達載體的構建1.基因表達載體的作用：①讓目的基因在受體細胞中穩定存在，并遺傳給下一代；②使目的基因能夠表達和發揮作用。☆基因表達載體的構建是基因工程的核心工作。基因A基因B基因C非基因片段放大2.基因的結構真核生物與原核生物基因組成不盡相同。原核生物基因的結構RNA聚合酶識別和結合位點啟動轉錄結束轉錄非編碼區:位于編碼區的上游和編碼區的下游

不編碼蛋白質，但可以調控基因的表達編碼區:可轉錄相應的mRNA，編碼蛋白質。真核生物基因的結構前體mRNA外顯子外顯子外顯子內含子內含子內含子:編碼區不編碼蛋白質的序列外顯子:編碼區編碼蛋白質的序列真核生物外顯子內含子原核生物筆記P76首端起始密碼子終端終止密碼子非編碼區:不編碼蛋白質，但可以調控基因的表達

編碼區:可編碼蛋白質。內含子:編碼區不編碼蛋白質的序列外顯子:編碼區編碼蛋白質的序列筆記P76（2）編碼相同數目氨基酸的蛋白質，原核細胞與真核細胞基因結構一樣長嗎？（1）基因結構中存在哪些非編碼序列？包括非編碼區和內含子【思考】真核細胞基因更長，因為其編碼區含內含子啟動子終止子起始密碼子終止密碼子【區分兩組概念】位于基因上位于mRNA上翻譯的起始點翻譯的終點啟動轉錄終止轉錄本身不轉錄編碼氨基酸不編碼氨基酸第二步：基因表達載體的構建3.基因表達載體的組成：復制原點終止子目的基因啟動子標記基因3.基因表達載體的組成有時為了滿足應用需要，會在載體上人工構建誘導型啟動子，當誘導物存在時，可以激活或抑制目的基因的表達。第二步：基因表達載體的構建4.基因表達載體的構建過程基因表達載體構建模式圖第二步：基因表達載體的構建限制酶啟動子限制酶切割位點終止子標記基因復制原點質粒①首先用

切割載體（質粒），使它出現一個切口。限制酶4.基因表達載體的構建過程目的基因限制酶切割位點獲取目的基因限制酶限制酶啟動子限制酶切割位點終止子標記基因復制原點質粒4.基因表達載體的構建過程②然后用

限制酶或能產生

末端的限制酶切割含有目的基因的DNA片段。同種相同DNA連接酶目的基因限制酶切割位點獲取目的基因限制酶限制酶啟動子限制酶切割位點終止子標記基因復制原點質粒4.基因表達載體的構建過程③再利用

將目的基因的DNA片段拼接到

的切口處，

這樣就形成了一個重組DNA分子（即：基因表達載體）。DNA連接酶載體重組DNA分子【核心歸納】圖解限制酶的選擇原則4.基因表達載體構建過程①單酶切單酶切缺點:質粒重新環化目的基因自身環化質粒與目的基因反向連接【核心歸納】圖解限制酶的選擇原則abab②雙酶切的優點:防止質粒重新環化防止質粒與目的基因反向連接防止目的基因自身環化注意：不能用同尾酶【核心歸納】圖解限制酶的選擇原則（1）不破壞目的基因原則（2）保留標記基因、啟動子、終止子、復制原點原則（3）確保載體和目的基因出現相同黏性末端原則將生物的所有DNA直接導入受體細胞不是更簡便嗎？如果這么做，效果會怎樣？

這種方法針對性差，完全靠運氣，也無法確定哪些基因導入了受體細胞（1）基因工程操作程序的核心步驟是目的基因的獲取

（

）（2）基因表達載體中有的含有啟動子和終止密碼子

（

）（3）標記基因不一定是抗生素抗性基因

（

）（4）當誘導物存在時，誘導型啟動子可以激活或抑制目的基因的表達

（

）判斷常考語句，澄清易混易錯1．下列有關體內DNA復制與PCR技術比較的敘述，錯誤的是(

)A．二者子鏈的延伸方向相同，均為5′端→3′端B．二者均需要解旋酶破壞氫鍵來實現解旋C．體內DNA復制需要能量，PCR反應也需要能量D．二者遵循的堿基互補配對原則相同B2．圖甲、乙中的箭頭表示三種限制性內切核酸酶的酶切位點，AmpR表示氨芐青霉素抗性基因，neo表示新霉素抗性基因。下列敘述錯誤的是(

)A．在構建重組質粒時，可用PstⅠ和HindⅢ切割質粒和外源DNAB．在酶切過程中，不能破壞質粒中全部的標記基因C．若只用PstⅠ處理質粒和外源DNA分子片段，無法避免自身環化和反向連接D．導入重組質粒的大腸桿菌可以在含氨芐青霉素的培養基中生長D第三步：將目的基因導入受體細胞目的基因導入受體細胞的方法導入植物細胞：花粉管通道法、農桿菌轉化法導入動物細胞：顯微注射法導入微生物細胞：Ca2+處理法1.將目的基因導入植物細胞第三步：將目的基因導入受體細胞（1）花粉管通道法：我國科學家獨創操作方式①：用微量注射器將含目的基因的DNA溶液直接注入子房中。操作方式②：在植物受粉后的一定時間內，剪去柱頭，將DNA溶液滴加在花柱切面上，使目的基因借助花粉管通道進入胚囊。受體細胞為？受精卵子房花粉柱頭花粉管精子卵細胞胚囊②農桿菌特點：a.能在自然條件下侵染雙子葉植物和裸子植物，而對大多數單子葉植物沒有侵染能力；第三步：將目的基因導入受體細胞（2）農桿菌轉化法（常用）①轉化是指目的基因進入受體細胞內，并且在受體細胞內維持穩定和表達的過程。②農桿菌特點：b.農桿菌細胞內含有Ti質粒，當它侵染植物細胞后，能將Ti質粒上的T-DNA（可轉移的DNA）轉移到被侵染的細胞，并且將其整合到該細胞的染色體DNA上；可轉移的DNA第三步：將目的基因導入受體細胞（2）農桿菌轉化法（常用）可轉移的DNA第三步：將目的基因導入受體細胞③利用農桿菌進行轉化的思路：將目的基因插入

中，通過農桿菌的

作用，就可以使目的基因_______________Ti質粒的T-DNA轉化進入植物細胞④農桿菌轉化法的過程T-DNA目的基因構建表達載體含目的基因的重組Ti質粒轉入農桿菌含重組Ti質粒的農桿菌植物細胞將目的基因插入染色體DNA中導入植物細胞表現出新性狀的植物植物組織培養第三步：將目的基因導入受體細胞(1)第一次拼接(2)第二次拼接將目的基因拼接到Ti質粒的T-DNA上將含目的基因的T-DNA拼接到受體細胞染色體的DNA上（非人工操作）第一次拼接

第二次拼接農桿菌轉化法中涉及的兩次拼接、兩次導入分別是？(3)第一次導入(4)第二次導入將含目的基因的Ti質粒重新導入農桿菌含目的基因的T-DNA導入受體細胞（非人工操作）第一次導入第二次導入④農桿菌轉化的具體方法：a.可以將新鮮的從葉片上取下的圓形小片與農桿菌共培養，然后篩選轉化細胞，并再生成植株；體細胞b.可以將花序直接浸沒在含有農桿菌的溶液中一段時間，然后培養植株并獲得種子，再進行篩選、鑒定等。受精卵受體細胞為？受體細胞為？【說明】隨著轉化方法的突破，利用農桿菌侵染水稻、玉米等多種單子葉植物也取得了成功。第三步：將目的基因導入受體細胞2.將目的基因導入動物細胞——顯微注射法①過程：構建基因表達載體并提純利用顯微注射將基因表達載體注入動物的受精卵中早期胚胎培養胚胎移植獲得具有新性狀的轉基因動物《教材》P82第三步：將目的基因導入受體細胞2.將目的基因導入動物細胞——顯微注射法③受體細胞：受精卵受精卵容易表現出全能性《教材》P82第三步：將目的基因導入受體細胞3.目的基因導入微生物細胞——Ca2+處理法（1）受體細胞：常用原核生物作為受體細胞，其中以大腸桿菌最廣泛。優點：①遺傳物質少②易培養③繁殖快第三步：將目的基因導入受體細胞3.目的基因導入微生物細胞——Ca2+處理法（2）一般過程：一般先用Ca2+處理大腸桿菌使細胞處于一種能吸收周圍環境中DNA分子的生理狀態再將重組的基因表達載體導入其中Ca2+的作用：增加細胞壁的通透性這種細胞稱為感受態細胞第三步：將目的基因導入受體細胞實例：利用轉基因大腸桿菌生產藥物（3）將目的基因導入微生物細胞----Ca2+處理法第三步：將目的基因導入受體細胞成熟mRNA相應酶剪切內含子轉錄序列轉錄翻譯真核基因：編碼區（外顯子+內含子）多肽鏈前體mRNA蛋白質加工如果把一個真核生物的基因導入原核細胞中表達，一定會產生原來的蛋白質嗎？一般不能產生原來的蛋白質原因：①原核生物細胞里沒有相應的酶來去除內含子；②原核生物沒有真核的蛋白質加工系統（如內質網、高爾基體等）如果把真核基因導入原核細胞中表達，不考慮蛋白質加工的問題，如何產生與原來結構相同的蛋白質嗎？成熟mRNA去除內含子轉錄序列轉錄真核基因：編碼區（外顯子+內含子）前體mRNA把真核基因的cDNA導入到原核細胞中表達。【總結】將目的基因導入不同細胞的方法種類項目植物細胞動物細胞微生物細胞常用方法

受體細胞

轉化過程目的基因插入Ti質粒的T-DNA上→導入植物細胞→整合到受體細胞的染色體DNA中→表達目的基因表達載體提純→取受精卵→顯微注射→受精卵發育→獲得具有新性狀的動物Ca2＋處理細胞→能吸收周圍環境中DNA分子的生理狀態細胞→重組的基因表達載體導入細胞中農桿菌轉化法顯微注射法Ca2＋處理法體細胞或受精卵受精卵原核細胞在棉花細胞中，重組表達