JNK通路促進(jìn)大鼠腦缺血再灌注海馬神經(jīng)元凋亡

01摘要二、材料與方法四、討論一、引言三、結(jié)果參考內(nèi)容目錄0305020406摘要摘要本次演示研究了JNK通路在腦缺血再灌注（I/R）誘導(dǎo)的海馬神經(jīng)元凋亡中的作用。我們發(fā)現(xiàn)，在大鼠腦I/R模型中，JNK通路被顯著激活，并與海馬神經(jīng)元的凋亡密切相關(guān)。這些發(fā)現(xiàn)為JNK通路在腦I/R損傷中的重要性提供了新的見(jiàn)解，并可能為開(kāi)發(fā)新的治療策略提供靶點(diǎn)。關(guān)鍵詞：JNK通路，腦缺血再灌注，海馬神經(jīng)元，細(xì)胞凋亡關(guān)鍵詞：JNK通路，腦缺血再灌注，海馬神經(jīng)元，細(xì)胞凋亡Inthisarticle,weinvestigatetheroleoftheJNKpathwayinhippocampalneuronalapoptosisinducedbycerebralischemia-reperfusion(I/R)inrats.WefoundthattheJNKpathwayissignificantlyactivatedinaratmodelofcerebralI/Randiscloselyrelatedtohippocampalneuronalapoptosis.Thesefindingsprovidenewinsight關(guān)鍵詞：JNK通路，腦缺血再灌注，海馬神經(jīng)元，細(xì)胞凋亡sintotheimportanceoftheJNKpathwayincerebralI/Rinjuryandmayprovidetargetsfordevelopingnewtherapeuticstrategies.關(guān)鍵詞：JNK通路，腦缺血再灌注，海馬神經(jīng)元，細(xì)胞凋亡Keywords:JNKpathway,cerebralischemia-reperfusion,hippocampalneurons,apoptosis一、引言一、引言腦缺血再灌注（I/R）是一種常見(jiàn)的病理過(guò)程，可在心臟病、中風(fēng)和卒中等疾病中發(fā)生。海馬區(qū)域是大腦中負(fù)責(zé)記憶和空間認(rèn)知的部分，對(duì)缺血損傷特別敏感1]。在I/R過(guò)程中，海馬神經(jīng)元的死亡是一個(gè)關(guān)鍵事件，可導(dǎo)致認(rèn)知功能障礙和神經(jīng)退行性疾病。因此，對(duì)海馬神經(jīng)元在I/R過(guò)程中的死亡機(jī)制的研究具有重要意義。二、材料與方法1、動(dòng)物模型與處理1、動(dòng)物模型與處理本實(shí)驗(yàn)使用雄性SD大鼠作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，建立腦I/R模型。大鼠通過(guò)手術(shù)分離并暴露雙側(cè)頸總動(dòng)脈，然后縫合傷口。24小時(shí)后，進(jìn)行再灌注，即重新打開(kāi)雙側(cè)頸總動(dòng)脈。對(duì)照組大鼠進(jìn)行相同手術(shù)，但不進(jìn)行血管阻塞和再灌注。2、細(xì)胞培養(yǎng)與處理2、細(xì)胞培養(yǎng)與處理海馬神經(jīng)元分離自新生大鼠，用無(wú)血清培養(yǎng)基培養(yǎng)。細(xì)胞分為4組：對(duì)照組、I/R組、I/R+JNK抑制劑組、I/R+JNK抑制劑+p38抑制劑組。每組細(xì)胞在相應(yīng)處理后，用WesternBlot和免疫熒光檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)。三、結(jié)果1、JNK通路在腦I/R過(guò)程中的激活1、JNK通路在腦I/R過(guò)程中的激活通過(guò)WesternBlot檢測(cè)各組大鼠海馬組織的JNK、p-JNK、c-Jun和p-c-Jun蛋白的表達(dá)。結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，I/R組JNK通路關(guān)鍵蛋白的表達(dá)顯著增加（圖1）。這表明JNK通路在腦I/R過(guò)程中被激活。1、JNK通路在腦I/R過(guò)程中的激活圖1：腦I/R過(guò)程中JNK通路的激活（A）JNK、p-JNK、c-Jun和p-c-Jun的WesternBlot圖像；1、JNK通路在腦I/R過(guò)程中的激活（B）統(tǒng)計(jì)結(jié)果，*表示P<0.05相較于對(duì)照組，#表示P<0.05相較于I/R組2、JNK通路激活與海馬神經(jīng)元凋亡的相關(guān)性2、JNK通路激活與海馬神經(jīng)元凋亡的相關(guān)性為探究JNK通路與海馬神經(jīng)元凋亡的關(guān)系，我們對(duì)各組大鼠進(jìn)行了TUNEL染色和Bax/Bcl-2蛋白表達(dá)的檢測(cè)。結(jié)果顯示，I/R組海馬神經(jīng)元的凋亡顯著增加，同時(shí)Bax蛋白表達(dá)增加，Bcl-2蛋白表達(dá)減少（圖2）。這表明I/R過(guò)程中JNK通路的激活與海馬神經(jīng)元的凋亡密切相關(guān)。2、JNK通路激活與海馬神經(jīng)元凋亡的相關(guān)性圖2：JNK通路激活與海馬神經(jīng)元凋亡的相關(guān)性（A）TUNEL染色圖像；（B）Bax和Bcl-2的WesternBlot圖像；2、JNK通路激活與海馬神經(jīng)元凋亡的相關(guān)性（C）統(tǒng)計(jì)結(jié)果，*表示P<0.05相較于對(duì)照組，#表示P<0.05相較于I/R組。四、討論四、討論本研究發(fā)現(xiàn)JNK通路在腦I/R過(guò)程中被激活，并與海馬神經(jīng)元的凋亡密切相關(guān)。這些結(jié)果提示JNK通路可能是一個(gè)潛在的治療靶點(diǎn)，通過(guò)抑制其活性可能可以減輕腦I/R損傷。然而，本研究?jī)H提供了相關(guān)性證據(jù)，并未深入探討作用機(jī)制。未來(lái)研究可以進(jìn)一步解析JNK通路激活導(dǎo)致海馬神經(jīng)元凋亡的具體機(jī)制，以期為腦I/R損傷提供新的治療策略。參考內(nèi)容內(nèi)容摘要腦缺血再灌注是臨床上常見(jiàn)的病理過(guò)程，可導(dǎo)致神經(jīng)元損傷和凋亡。川芎嗪是一種中藥活性成分，具有抗炎、抗氧化、抗凋亡等作用，本實(shí)驗(yàn)旨在探討川芎嗪對(duì)腦缺血再灌注大鼠神經(jīng)元的抗凋亡作用及機(jī)制。1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組成年雄性SD大鼠60只，隨機(jī)分為假手術(shù)組、缺血再灌注組和川芎嗪組，每組20只。2、川芎嗪處理2、川芎嗪處理川芎嗪組大鼠在術(shù)前30min給予川芎嗪（5mg/kg）腹腔注射。3、腦缺血再灌注模型制備3、腦缺血再灌注模型制備采用改良的Longa線栓法建立大鼠腦缺血再灌注模型。4、神經(jīng)功能評(píng)分與組織損傷檢測(cè)4、神經(jīng)功能評(píng)分與組織損傷檢測(cè)在術(shù)前、術(shù)后及24h采用神經(jīng)功能評(píng)分評(píng)估各組大鼠神經(jīng)功能狀態(tài)，并進(jìn)行腦組織切片觀察細(xì)胞凋亡情況。5、細(xì)胞凋亡檢測(cè)5、細(xì)胞凋亡檢測(cè)采用TUNEL法檢測(cè)凋亡細(xì)胞，并通過(guò)免疫印跡法檢測(cè)Bcl-2、Bax、Caspase-3等凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)。6、RT-qPCR檢測(cè)相關(guān)基因表達(dá)6、RT-qPCR檢測(cè)相關(guān)基因表達(dá)通過(guò)RT-qPCR法檢測(cè)Cyt-c、Apaf-1、ATP6L、ATP5A等基因的表達(dá)情況。7、數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析7、數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS17.0進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果以xˉ±s表示，組間比較采用t檢驗(yàn)或單因素方差分析，P<0.05表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。1、神經(jīng)功能評(píng)分與組織損傷檢測(cè)1、神經(jīng)功能評(píng)分與組織損傷檢測(cè)與假手術(shù)組比較，缺血再灌注組大鼠神經(jīng)功能評(píng)分明顯降低（P<0.01），而川芎嗪組大鼠神經(jīng)功能評(píng)分有所提高（P<0.05）；組織切片觀察結(jié)果顯示，缺血再灌注組腦組織受損明顯，細(xì)胞凋亡數(shù)目增加，而川芎嗪組腦組織損傷明顯減輕，細(xì)胞凋亡數(shù)目減少。2、細(xì)胞凋亡檢測(cè)2、細(xì)胞凋亡檢測(cè)缺血再灌注組凋亡細(xì)胞數(shù)目顯著高于假手術(shù)組（P<0.01），而川芎嗪組凋亡細(xì)胞數(shù)目明顯低于缺血再灌注組（P<0.05）。免疫印跡法結(jié)果顯示，缺血再灌注組Bcl-2蛋白表達(dá)降低，Bax、Caspase-3蛋白表達(dá)增加，而川芎嗪組Bcl-2蛋白表達(dá)增加，Bax、Caspase-3蛋白表達(dá)降低（P<0.05）。3、RT-qPCR檢測(cè)相關(guān)基因表達(dá)3、RT-qPCR檢測(cè)相關(guān)基因表達(dá)與假手術(shù)組比較，缺血再灌注組大鼠Cyt-c、Apaf-1、ATP6L、ATP5A等基因表達(dá)均明顯升高（P<0.05），而川芎嗪組Cyt-c、Apaf-1、ATP6L、ATP5A等基因表達(dá)均有所降低（P<0.05）。4、討論4、討論本研究發(fā)現(xiàn)，川芎嗪可顯著改善腦缺血再灌注大鼠的神經(jīng)功能，減輕腦組織損傷，其作用機(jī)制可能與抑制細(xì)胞凋亡有關(guān)。細(xì)胞凋亡是細(xì)胞程序性死亡的一種形式，在腦缺血再灌注損傷中起著重要作用。本實(shí)驗(yàn)