臨床細菌培養的正確采集方法以及相關注意事項體液細菌培養的采集及注意事項昆明醫科大學第一附屬醫院重癥醫學科（SICU）——胡仁政

細菌培養（BacterialCulture）血培養（BloodCulture）痰培養（SputumCulture）尿培養（UrineCulture）其他體液（腦脊液、胸腔積液等）4123細菌培養是指用人工方法使細菌生長繁殖的技術，即將其接種于培養基上，使其生長繁殖，用于研究、鑒定和應用。一般細菌可在有氧條件下，37℃中放18～24小時生長。厭氧菌則需在無氧環境中放2～3天后生長。個別細菌如結核菌要培養1個月之久。血培養（BloodCulture）血培養的概念血培養采集的指征血培養采集的時機4123

血培養采集的套數及采血量血培養采集的操作步驟56血培養采集的部位血培養（BloodCulture）的概念即采集患者的血液或無菌體液標本，送至微生物實驗室培養檢測。檢測原本無菌的血液及體液中是否有細菌存在。如有細菌，則極有可能為致病的細菌。以便進一步進行鑒定/藥敏試驗。

血培養的采集指征

1.寒戰、發熱（>=38℃、低溫<=36℃）2.白細胞增多（>10×10^9/L）3.粒細胞減少（<1×10^9/L）4.血小板減少、皮膚、粘膜出血5.低血壓或高血壓、呼吸頻率加快6.心率異常加快、昏迷、多器官衰竭7.休克，寒顫，僵直8.嚴重的局部感染(腦膜炎，心內膜炎，肺炎，腎盂腎炎，腹部術后感染…)9.當懷疑血流感染或膿毒癥時血培養采集的時機

發熱高峰前12-2.5小時發熱高峰前2.5-0.5小時發熱高峰期間發熱高峰后1-12小時9%+14%+9%+11%+166人105人99人258人在患者接受抗生素治療前采血如患者已經應用抗菌藥物進行治療，應在下一次用藥之前采血培養盡可能在患者寒戰或開始發熱時采血數據來源：Thomsonetal.1991.ASCP.MayoClinicStudy血培養采集的套數及采血量

2－3套血培養，有助于污染的判斷表皮葡萄球菌的臨床意義Tokars,JI.ClinInfectDis2004;39:333采集1套無法判斷是病原菌還是污染菌。Weinsteinetal.DetectionofBloodstreamInfectionsinAdults:HowManyBloodCulturesAreNeededJClinMicrobiol.2007;45:3546-3548結論：1.絕對不能只用一瓶，寒顫-

發熱之間

2.每位患者每次采血最少2套，采集3套更好

3.初發患者，絕不能只采1套血培養標本

4.采集2－3套血培養，有助于污染的判斷血培養采集的套數及采血量結論2結論1血液與肉湯最佳比例1:4－1:10采血量

采血量(ml)與檢出率的關系血培養每增加一毫升，真性菌血癥成年人微生物的檢出率增加3％但并非越多越好，超過一定數量采血量會稀釋培養瓶內的肉湯，使肉湯無法有效中和血中的抑制物質（補體、抗體、抗生素）。血培養采集的套數及采血量

采血量是影響靈敏度最關鍵因素12兒童一般只需采集需氧瓶，在保證采集血量＜1％總血量下，一般為1－3ml。采血量不足時應優先保證需氧瓶，因臨床90％以上的感染為需氧菌或兼性需氧菌感染成人一份標本2個培養瓶（需氧＋厭氧），每瓶8－10ml，共20ml；要求至少采兩份標本，即40ml。血培養采集的操作步驟

洗手（可手消）、戴口罩↓

75%酒精消毒培養瓶的橡膠塞，待干60秒（無菌紗布或棉簽清潔表面殘余酒精）

↓75%酒精消毒穿刺部位，由內向外劃圈，作用（待干）30s↓

以碘酊或碘伏消毒穿刺部位（碘酊作用30s，碘伏作用1.5-2min）從穿刺點由內向外劃圈，消毒范圍為8×10cm↓

用75%酒精消毒作用60s，待干↓

持穿刺針按常規方法刺入靜脈，另一頭刺入相應血培養瓶內成人采血量10-20ml，嬰幼兒1-5ml（嚴格無菌操作，不允許在皮膚消毒后用手接觸靜脈，除非帶有無菌手套）↓

血液注入血培養瓶后顛倒輕搖瓶子混勻標本與肉湯，以避免血液凝集↓

用75%酒精重新消毒血培養瓶橡皮塞并蓋好塑料蓋↓

立即送檢（切忌將培養瓶冷藏或冷凍）↓

洗手、摘口罩血液采集的注意事項

1.理想的采集時間采集血標本的時間是早晨7∶00～8∶00。2.禁止從輸液三通管采血，一般在輸液結束30分鐘以后再采血。避免從正

在輸液的肢體上采血，輸液時采血應當遵從“遠端原則”：選擇在輸液的

對側肢體或無輸液的其他肢體（如足部）靜脈采血。在四肢靜脈都輸液時，

可以選擇在輸液靜脈的遠心端（靜脈血流的上游）采血。急診、搶救過程

中在輸液的同時采血，應在檢驗申請單上注明。3.采血順序是：血培養、不含添加劑的采血管（血清標本管，紅色、桔紅色

或黃色）、凝血標本管（淺藍色）、其他標本管。如果同時作厭氧培養和

需氧培養，應先將血標本接種厭氧培養瓶，然后再接種需氧培養瓶。4.采靜脈血時止血帶結扎不能過久，可引起誤差。如以結扎1min的樣品結果

為基數，則結3min，可使血漿總蛋白增加5％，膽固醇增加5％，鐵增加6％，

膽紅素增加8％，乳酸則不能使用止血帶。血液采集的注意事項

5.禁止拍打手臂或反復握拳屈肘及反復穿刺等，否則會使血鉀上升0.8mmol/L。

采血用針頭過細會使血K+升高。6.采集標本時患者坐位或臥位對檢驗結果無較大差異，但以靜坐5~10分鐘后

坐位（從肘靜脈）采血為最佳;站立時，血液中成分濃縮，蛋白、酶類、鈣、

鎂等結果偏高。7.標本的送檢時間血標本采集后應盡快送檢，時間最好不超過2h。血沉應于2h內測定完畢，否則血沉減慢。心肌損傷標志物檢驗要求總周轉時間小于1h。血氣分析、細菌培養標本等應該在30min內測定。血糖測定應于半小

時內送檢，采血后室溫放置，由于糖酵解作用，每小時可降解0.05mmol/L,

夏季采血后血糖將以每小時7%～10%的速度分解，標本留置時間過久易影響

血糖的檢驗結果。痰培養（SputumCulture）

氣道吸痰采樣經支氣管鏡采樣其他咳痰標本的采集經氣管穿刺吸引（transtrachealaspiration,TTA）經胸壁針刺吸引（transthoracicneedleaspiration,TNA經人工氣道吸引分泌物（endotrachealaspirates，ETA）支氣管肺泡灌洗（bronchoalveolarlavage,BAL）經支氣管鏡直接吸引防污染樣本毛刷（protectivespecimenbrush,PSB）自行咳痰采樣痰液采集的方法咳痰標本的采集及注意事項

在抗生素應用前采集痰標本;應摘去牙托，清潔口腔如刷牙和漱口深咳。經氣管吸痰時注意無菌。無痰可用3％～5％NaCl5ml霧吸約5min導痰也可用物理療法、體位引流、鼻導管抽吸等法取痰4123標本采集后1～2h內必須立即進行實驗室處理，如不能及時送達，應將標本暫存于4℃冰箱內，但放置時間不可超過24h。厭氧培養標本的最佳運送時間取決于標本量。被口咽部菌群污染的標本如咳痰等不可用于厭氧菌培養尿培養（UrineCulture）清潔中段尿導尿導管尿、留置尿管經恥骨上皮膚穿刺采集膀胱內尿液（一）、新鮮晨尿（這時的尿標本較濃縮和酸化，不受運動及進餐等影響。適用于尿蛋白、尿沉渣、尿亞硝酸鹽檢驗及細菌培養）和隨機尿（尿液可能被稀釋或受進餐、藥物以及新陳代謝等影響，尿中成分檢出情況不盡相同。餐后尿檢測易出現糖尿）。（二）、尿膽原檢測以14：00～16：00時間段內留取的尿液為好。（三）、尿液定量檢查需要留取12h或24h的混合尿液，留取時應按規定時間內排出之尿液裝入含有合適防腐劑的潔凈容器內，混勻后記錄總量，取10ml送檢。

SICU：尿路感染（15%）、創傷（10%）

肺炎（8%）、交叉感染（8%）MICU：尿路感染（10%）、肺炎（10%）

交叉感染（5%）導致院內感染的常見原因尿液采集的注意事項

尿液培養采集注意1.尿液通常是無菌的或一過性有少量微生物，但是尿道內或尿道周圍皮膚的菌群會污染尿液標本，從而可能導致錯誤的培養結果。2.診斷癥狀明顯的病人（如尿急、尿頻、尿痛），一份標本就已足夠，治療48-72小時后再采集第二份標本。對于癥狀不明顯的病人，需采集2-3份標本。懷疑腎結核時，應連續3天采集晨尿。標本以晨起第一次尿為佳。3.多次收集或24小時尿不能用作培養。4.申請單上必須注明病人癥狀是否明顯，這對于定量培養分析非常重要，尤其只有少量尿液標本。5.室溫都有利于病原菌和污染菌會生長繁殖，因此如果

30min內不能及時培養尿液則必須冷藏，可暫存4℃冰箱，但保存也不能超過8h。清潔中段尿液

尿標本采集操作步驟一、女性病人收集標本前用清洗液沖洗干凈，從前向后仔細擦洗尿道區域分開陰唇，開始排尿，排出幾毫升后，不停止尿流，采集中段尿。二、男性病人回縮包皮并清洗龜頭，排出幾毫升后，不停止尿流，采集中段尿。1.盡量取早晨第一次尿液2.詳細告知病人操作步驟3.棄去開始流出的尿液，以沖刷尿道口的細菌，取能代表膀胱部位病原菌的中段尿導尿管尿液

集尿袋內的尿液不能用作培養；導尿管末端的尿液也不能用于培養，因為很難避免沒有尿道菌群污染。留置導管尿液標本常通過專門的采樣端口采集，不能把導尿管與尿袋拔開后收集尿液。采樣端口用酒精消毒；必要時，可先夾住導尿管但不能超過30分鐘；將注射器針頭插入采樣端口，抽吸出尿液；注入無菌杯或試管中。恥骨上穿刺吸取尿液

可避免尿道或會陰細菌的污染，但對膀胱內少量尿液的小兒難以實施。方法：消毒自臍以下至尿道之間區域的皮膚，局麻穿刺點部位；在恥骨聯合與臍連線上，高于恥骨聯合2cm處進針刺入膀胱；取20ml尿液；置于無菌容器中并送往實驗室。可用于厭氧菌檢測常用于患兒、泌尿道厭氧菌感染或脊柱損傷病人等。1234厭氧標本的采集及注意事項

臨床厭氧菌感染的指正厭氧標本采集注意事項1）肺分泌物和痰標本：在支氣管鏡

下或環甲膜穿刺術取材。2）膿胸或未潰破的膿腫：局部消毒

后用無菌注射器抽取，立即排

盡空氣，將針頭插入橡皮塞中

送檢。3）尿：恥骨上緣行膀胱穿刺術下抽

取尿液。4）血液：直接抽取，盡量減少空氣

進入培養瓶內。5）竇道，深部膿腫：可通特別采樣

器采取。1）感染局部產生氣體，腫脹，壞死，

皮下有捻發音。2）有惡臭，呈膿性并含有壞死組織

的分泌物應考慮厭氧菌感染，但