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文檔簡介

大腸桿菌的檢測及原理檢測原理：大腸菌群是一群能發酵乳糖、產酸產氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽抱桿菌，該菌主要來源于人畜糞便，故以此作為糞便污染指標來評價食品的衛生質量，推斷食品中有否污染腸道致病菌的可能。食品中的大腸菌群數系以100ml(g)檢樣內大腸菌群最可能數(MPN)表示。儀器設備與器具：2.1恒溫培養箱：36±1°C。2.21000ml三角燒瓶、1ml、10ml移液管。2.3接種針。2.4顯微鏡。2.5超凈工作臺。2.6玻片、酒精燈、洗耳球、試管架。2.7天平：感量0.01g。2.8滅菌釜。2.9培養皿(直徑為90mm)、試管，經121C、30分鐘滅菌。2.10試管夾、酒精燈、秒表、載玻片3.培養基及試劑：3.1乳糖膽鹽發酵管：按照制造廠家使用說明進行配制，滅菌。3.2伊紅美蘭瓊脂平板：按照制造廠家使用說明進行配制，滅菌。3.3乳糖發酵管：按照制造廠家使用說明進行配制，滅菌。3.4革蘭氏染色液。3.4.1結晶紫染色液：結晶紫1g95%乙醇20ml1%草酸銨水溶液80ml將結晶紫溶解于乙醇中，然后與草酸銨溶液混合。3.4.2革蘭氏碘液：碘1g碘化鉀2g蒸餾水300ml將碘與碘化鉀先進行混合，加入蒸餾水少許，充分振搖，待完全溶解后，再加蒸餾水至300ml。3.4.3沙黃復染液:沙黃0.25g95%乙醇10ml蒸餾水90ml將沙黃溶解于乙醇中，然后用蒸餾水稀釋。3.5生理鹽水。檢驗程序：檢樣稀釋I乳糖膽鹽發酵管，36±1°C,24±2hr；不產氣產氣I大腸菌群陰性伊紅美蘭瓊脂平板，36±1C,24±2hr報告II革蘭氏染色乳糖發酵管，36±1C,24±2hr ；；；G+G-，無芽抱桿菌產氣不產氣大腸菌群陰性大腸菌群陰性報告大腸菌群陽性報告測定方法：5.1檢樣稀釋：5.1.1以無菌操作將檢樣25ml（或25g）放于含有225ml滅菌生理鹽水的滅菌塑料燒杯中，經充分振搖成1：10均勻稀釋液。5.1.2用1ml滅菌吸管吸取1：10稀釋液1ml，注入含有9ml滅菌生理鹽水的試管中，振搖成1：100稀釋液。5.1.3重復5.1.2的操作，使成1：1000稀釋液。5.2乳糖膽鹽發酵試驗：根據食品衛生標準要求或對檢樣污染情況的估計，選擇二個稀釋度，每一稀釋度接種3管，接種量在1ml以上者，用雙料乳糖膽鹽發酵管。1ml及1ml以下者，用單料乳糖膽鹽發酵管。然后置于36±1C培養箱內，培養24±2hr，如所有乳糖膽鹽發酵管都不產氣，則可報告為大腸菌群陰性；如有產氣者，則可按以下程序進行。5.3分離培養：將產氣的發酵管分別接種于伊紅美蘭瓊脂平板上，置36±1C溫箱內，培養24hr后取出，觀察菌落形態，并作革蘭氏染色。5.4證實試驗：在上述平板上，挑取可疑大腸菌群菌落1?2個進行革蘭氏染色同時接種乳糖發酵管，置于36±1°C溫箱內培養24±2hr，觀察產氣情況。乳糖發酵管產氣，革蘭氏染色為陰性的無芽抱桿

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