單克隆抗體技術

生物技術學院董文其

一、學習目的了解和掌握細胞培養基本知識和技能了解和掌握單克隆抗體制備技術有關培養的幾個概念細胞培養（cellculture）

組織培養（tissueculture）

器官培養（organculture）

離體細胞在培養過程中不出現分化、不形成組織。

取自動物的某類組織，在培養過程中細胞一直保持原本已分化的特性，該組織的結構和功能不發生明顯變化。

整個器官或器官的一部分在體外條件下的保存或生長。細胞系（cellline）細胞株（cellstrain）原代培養（primaryculture）傳代（passage或subcultuer）克隆（clone）

系原代培養物經首次傳代成功后即成為細胞系，強調細胞來源。

系通過選擇法或克隆形成法,從原代培養物或細胞系中挑選出單個細胞培養形成的具特定生長特性的細胞培養物，強調細胞特性。

指取自新鮮組織的細胞在傳代前稱為原代培養。

指由一個細胞增值形成的群體后代。有關培養細胞的幾個概念

體外培養的細胞繁值到一定程度就不再繁殖了（由于表面接觸抑制），此時將細胞按一定比例創新分配到新的培養體系中，細胞就可以重新生長，這樣就可一代一代傳下去。細胞培養技術基本條件無菌條件：超凈工作臺、紫外燈、高壓滅菌器、濾器、抗生素、電熱干燥箱等。細胞生長條件：CO2培養箱、純水裝置、培養板（瓶）等。細胞檢測條件：倒置顯微鏡、酶標儀等。細胞保存條件：液氮存儲裝置、-70度冰箱等。細胞營養條件：培養基、血清、pH等。細胞的長期保存與復蘇低溫冷凍保存（液氮）

10％二甲基亞砜（DMSO)慢速冷凍細胞程序降溫儀先4℃冰箱，后-20℃冰箱，最后液氮。細胞密度以2～5×106為宜。一定要作好標記

凍存細胞的復蘇

復蘇溫度：37～39℃水浴

快速復蘇1～3

℃/min至-30℃15～30℃/min至-196℃細胞培養物污染及其防治

細菌污染：用高濃度抗生素（青、鏈霉素）霉菌污染：用抗真菌藥（制霉菌素、兩性霉素）

支原體污染：比較棘手，有人建議用卡那霉素、慶大霉素。

一種抗原侵入人體后，在無數種淋巴細胞中，只有表面本來就帶有和這種抗原互補的受體的少數淋巴細胞能和抗原結合。一經結合，這種淋巴細胞就恢復了分裂的能力，連續分裂產生大量帶有同樣抗體的淋巴細胞群。這一群細胞由于是同一來源的，所以稱為克隆(clone)，這就是克隆選擇學說。

理論基礎技術基礎克隆選擇學說細胞融合技術微量蛋白檢測技術單克隆抗體技術來源：

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分子水平：？細胞水平：？個體水平：？社會生活：？克隆概念嫁接分子（基因）克隆細胞克隆動物克隆（無性繁殖）克隆是英文“clone”的音譯，來自希臘文klon，原意為苗或嫩枝

單克隆抗體的特點特異性均一性（重復性）可大量制備單克隆抗體的制備原理（融合細胞的篩選）

基于酶缺陷和藥物抗性篩選融合細胞：最常用HAT培養基篩選系統。H為次黃嘌呤（hypoxathine），A為氨基蝶呤（aminopterin），T為胸腺嘧啶（thymidine）。目的性創新性可行性二、實驗設計（條件、儀器）超凈工作臺二氧化碳培養箱倒置顯微鏡液氮儲存器高壓滅菌器器超純水儀電熱恒溫干燥箱三、實驗器材的消毒干烤：玻璃器皿高壓蒸汽滅菌：玻璃、橡膠、金屬等，有時培養液過濾除菌：培養基、試劑等紫外線殺菌：實驗室空氣、物臺，有時塑料制品射線殺菌：不耐熱物品熏蒸消毒：實驗室、無菌室等化學消毒劑消毒：手、物品表面等抗原致敏淋巴細胞骨髓瘤細胞融合選擇性培養抗體分泌細胞篩選克隆化單抗制備單抗純化單抗鑒定動物免疫分離脾細胞制備骨髓瘤細胞細胞融合（PEG