做實驗前要預習，實驗后認真完成實驗報告，真實準確記錄實驗結果（必須的）。堅持無菌操作；嚴禁將實驗物品帶出；進實驗室穿白大衣（必須的）。示教的實驗材料等不要亂動，看完后放回原處，在什么地方看的就要放回什么地方。實驗完畢，打掃衛生整理好實驗材料，將應回收物品放入回收器內，關好水電，然后離開（必須的）。微生物實驗報告于2次上完后以最快速度收齊按學號順序交于A2-624對面的書架子上（必須的）。油鏡的使用：光線要強，應將光圈開足；用畢要用二甲苯清洗物鏡。微生物學實驗須知實驗一微生物的生物性狀/遺傳變異一、細菌的形態與結構1、細菌的基本形態——球菌、桿菌、弧菌的形態觀察 示教2、細菌的特殊結構——芽胞、莢膜、鞭毛 示教3、細菌染色檢查法——革蘭氏染色 1份/組二、化膿性細菌1、金黃色葡萄球菌與表皮葡萄球菌在血平板上的菌落形態、溶血環、色素 示教2、甲、乙、丙鏈球菌、肺雙在血平板上的菌落形態、溶血環示教3、肺雙在血平板上的菌落形態、溶血環 示教一：細菌的形態結構與染色主要內容:細菌的基本形態：球菌、桿菌、弧菌（示教）細菌的特殊結構：芽胞、莢膜、鞭毛（示教）細菌染色檢查法：革蘭氏染色法1片/組球菌：葡萄球菌螺形菌弧菌：霍亂弧菌螺菌1、細菌的基本形態桿菌：大腸桿菌2、細菌的特殊結構芽胞——增強細菌對不良環境的抗性莢膜——抗吞噬、抗損傷、抗干燥鞭毛——運動器官，單生、雙生、叢生、周生。菌毛——在電鏡下才可以見到。細菌的特殊結構形態芽胞莢膜鞭毛肺炎雙球菌的莢膜傷寒桿菌的鞭毛破傷風桿菌的芽胞4.革蘭氏染色的原理G+菌胞壁結構致密。肽聚糖層厚，脂質含量少，乙醇不易透入。同時乙醇使細胞壁脫水形成一道屏障，阻止結晶紫—碘復合物從胞內滲出。G-菌較為疏松，肽聚糖層很薄，而外膜、脂蛋白、脂多糖又均含大量脂質，易被乙醇溶解，致使細胞壁通透性變大，使結晶紫--碘復合物被乙醇溶解析出而脫色。G+菌等電點（PH2~3）比G-菌（PH4~5）低。在相同PH下，G+所帶的負電荷比G-多。故與帶正電的結晶紫染料結合較多，不易脫色.核糖核酸鎂鹽的含量有關:G+多于G-上述兩者中以1更重要，如G+菌胞壁有破損，其染色性由G+G-涂片干燥固定涂片制備：

涂片------干燥------固定嚴格無菌操作涂片薄而均勻

固定時注意勿將標本烤枯固定目的：殺菌，粘附，通透性切忌緊靠火焰,以防菌體變形

1-2滴結晶紫初染１min

1-2滴碘液媒染1min2-3滴乙醇脫色30sec1-2滴復紅復染1min涂片固定革蘭氏染色法步驟（GramStain）吸水紙印干，鏡檢H2O輕輕沖洗H2O輕輕沖洗H2O輕輕沖洗H2O輕輕沖洗影響實驗結果的因素：菌齡,

G+G-如果細菌細胞壁破損

G+G-脫色過長G+G-，脫色過短G-G+結果:

陽性菌——藍紫色

陰性菌——紅色革蘭氏染色的意義：鑒別細菌指導用藥了解細菌的致病性，大多

G+,外毒素，G-內毒素二、化膿性細菌1.葡萄球菌根據色素，生化反應等不同類型，分為三種：主要性狀金黃色葡萄球菌表皮葡萄球菌腐生葡萄球菌菌落色素金黃色白色白色或檸檬色血漿凝固酶＋－－α溶血素＋－－SPA＋－－甘露醇發酵＋－－致病性強弱無血平板色素檸檬色葡萄球菌白色葡萄球菌金黃色葡萄球菌溶血現象檸檬色葡萄球菌白色葡萄球菌金黃色葡萄球菌2.鏈球菌屬(streptococcus)鏈球菌分類：根據溶血現象分類：甲型溶血性鏈球菌(α-hemolyticstreptococcus)----產生甲型溶血（α溶血），草綠色溶血環，條件致病菌乙型溶血性鏈球菌(β-hemolyticstreptococcus)----產生乙型溶血（β溶血），透明無色溶血環，致病菌丙型溶血性鏈球菌(γ-streptococcus)----無溶血環，一般不致病鏈球菌血平板菌落形態甲乙丙Hemolysis

alphabetagamma3.肺炎鏈球菌生物學性狀形態與染色G+球菌，菌體矛頭狀，成對排列，無鞭毛，芽孢，有莢膜培養特性營養要求較高(血平板)菌落：α-溶血，光滑（有毒株），后期呈臍狀（穩定期產生自溶酶）抵抗力：對消毒劑敏感，抗干燥（莢膜）肺炎雙球菌與甲型溶血性鏈球菌的鑒別鑒別項目肺炎球菌甲型溶血性鏈球菌菌落形態扁平或呈臍狀隆起莢膜有無膽汁溶菌試驗被溶解不被溶解菊糖發酵試驗分解菊糖產酸不分解小白鼠接種死亡存活實驗一微生物的生物性狀/遺傳變異一、細菌的形態與結構1、細菌的基本形態——球菌、桿菌、弧菌的形態觀察 示教2、細菌的特殊結構——芽胞、莢膜、鞭毛 示教3、細菌染色檢查法——革蘭氏染色 1