辛伐他程序開發糖尿病慢性老齡化鼠模型的實驗研究

這種支持是一種常見的抗高血壓藥物。抑制顆粒酶hmg-coa的代謝酶限制用于膽固醇合成，從而降低血清中的蛋酸酯。在最近的腎臟疾病的臨床和實驗研究中，發現這些藥物對腎臟的保護并不完全取決于降脂效果。中脂纖維具有嚴格的組織特異性，來自同一基因家族，具有高度的同源性。中脂纖維與細胞的形成密切相關。波形蛋白是一種由單一多酚鏈組成的中間纖維，主要分布在中胚胎層的來自組織中。角質纖維存在于上皮細胞和結蛋白纖維存在于肌肉細胞中。研究發現腎臟固有細胞轉分化在腎臟纖維化發生發展中起十分重要作用。其轉化程度與腎功能下降的程度相平行。通過老齡鼠單腎切除后,給予一次性腹腔注射40mg/kg鏈脲佐菌素,破壞胰島β細胞,制成糖尿病模型,辛伐他汀(8mg/kg/day)溶于CMC液灌胃干預治療,探討他汀類藥物不依賴降血脂的腎臟保護作用。1.材料和方法1.1材料測試1.1.1實驗動物和設備健康、雄性、15月齡、清潔級SD大鼠32只,體重480-550克,動物生產許可證號:SCXK(蘇)2007-0023由南通大家動物實驗中心提供。1.1.2光學顯微鏡以及圖像分析系統LKB-V超薄切片機,LKB公司(瑞士),顯微數字圖像分析系統,ZEISS公司(德國),倒置顯微鏡IX70,OTYMUPS公司(日本),OTYMPUSBX50光學顯微鏡,OTYMUPS公司(日本),IBAS2.5全自動圖像分析系統,IBM公司(日本)。1.1.3主試劑1.2標本與觀察方法1.2.1動物模型的制備和分組:32只15月齡清潔級SD大鼠隨機分為正常對照(N組),腎切對照(C組),糖尿病組(D組),新伐他仃組(S組)。1.2.2標本收集和處理。1.2.3血尿生化指標及肥大指數的測定。1.2.4電鏡觀察。1.2.5光鏡檢查:石蠟切片的制備(通大附院臟病理室),PASM染色(通大附院病理教研室)。1.2.6免疫組化。1.2.7統計方法:運用stata8.0統計軟件分析,所有數據均采用x±s表示,多組間兩兩比較采用q檢驗,差異顯著性:P<0.05。2.結果2.1糖尿病大鼠一般情況正常對照組大鼠飲食飲水情況、精神狀態、日常活動均正常;腎切對照組飲食飲水情況、精神狀態、日常活動正常;糖尿病組大鼠在注射STZ后2天即出現多尿,多飲,多食癥狀,隨病程的延長,上述癥狀更加顯著,毛發色澤暗淡,精神萎靡,活動減少;治療組一般情況與同期糖尿病組相比明顯的改善。2.2各組均有大小嶺血、甘油三油tg、膽固醇tc、尿素氮、肌肉注射體重和24小時尿蛋白2.2.1mlo/lD組、S組大鼠血糖在實驗期均維持在較高水平>16.67mmlo/L,兩組間無明顯差異(P>0.05);N組、C組大鼠血糖在試驗期均維持在正常水平,兩組間無明顯差異(P>0.05),D組與N組、C組相比有明顯差異(P<0.05)。2.2.2血液中的血液2.2.3各組、d組、p組、c組蛋白比較S組同單腎切除糖尿病模型組相比減少(P<0.01),N組、C組相比比較明顯差異(P>0.05),D組與N組、C組相比明顯差異(P<0.05)。2.2.4氮肥指數腎重量D組較同期N組均顯著升高,(P<0.05),S組同D組相比明顯減少(P<0.01),N組、C組相比無明顯差異(P>0.05)。2.2.524小時尿蛋白測量D組較同期N組均顯著升高(P<0.05),S組同D組相比明顯減少(P<0.01),N組、C組相比無明顯差異(P>0.05)。2.3各組均大便組織病理學2.3.1各組細胞數、系膜形態變化腎組織基底膜呈黑色,腎小球基質系膜呈棕黑色,D組腎小球內細胞數減少腎小球囊壁增厚,系膜增生,基底膜斷裂,系膜寬度超過毛細血管徑,呈彌漫分布,小管結構紊亂,S組較D組病變減輕,C組與N組病理改變無明顯差異,(圖3-2)。2.3.3基底膜的變化D組可見系膜區系膜基質增生,上皮細胞足突融合,使原來附在基底的排列有序的足狀突起貼附基底膜上,毛細血管基底膜增厚,基底樣物質均勻增多,基底膜細微結構消失;S組較D組病變減輕,基質增生減輕,上皮細胞足突融合減輕(P<0.01);C組與N組病理改變無明顯差異(P﹥0.01)(圖3-3)。2.3.4胞胞漿內表達波形蛋白只在正常大鼠血管壁、、腎小球、間質少量表達,近曲小管上皮細胞胞漿內無表達;D組腎小球少量表達,近曲小管上皮細胞胞漿內大量陽性表達,間質表達增加(P<0.05);C組腎小球、間質、小管上皮細胞胞漿內少量陽性表達,與N組相比,差異無統計學意義(P﹥0.01)。3.對腎間質及肝腎上皮細胞的作用CorsiniA等研究發現,辛伐他仃對單側腎切除STX誘導的糖尿病大鼠,可減少尿蛋白量,抑制細胞外基質形成。本實驗12周大鼠腎臟組織病理學檢查顯示D組較C組、N組大鼠出現明顯的腎臟肥大、腎小球體積增加、基底膜增厚。免疫組化發現,N組、C組腎臟vimentin在腎小球,小管、間質病變在糖尿病腎病中的作用也越來越引起重視。D組免疫組化顯示小管波行蛋白表達增加,而N組和C組腎小管波行蛋白質表達不明顯,推測腎小管上皮受損后可能發生表型轉化,表達間充質來源的波行蛋白質,而波形蛋白質(vimentin)是一種中間纖維蛋白,由單一多肽鏈構成。腎小管上皮細胞在損傷因素的作用下可能轉化為肌纖維母細胞而參與間質纖維化,肌成纖維細胞除了表達特征性的α-SMA外,可表達多種中間絲蛋白,如波形蛋白、結蛋白、膜突蛋白和根蛋白以及肌凝蛋白重鏈。MyoFb來源于成纖維細胞的分化,血管外周圍細胞的遷移、局部增殖、小管上皮細胞的轉化以及系膜細胞的增殖、轉化。TGF-β具有促進成纖維細胞及腎小管上皮細胞發生表型轉化、促進細胞外基質分泌增加、促進腎小管上皮細胞凋亡等多方面纖維化相關作用,還能促進骨橋蛋白、彈性蛋白等多種物質共同作用促進梗阻性腎病的進展。在腎小球疾病慢性進展過程中,腎間質內表達a-SMA的肌成纖維細胞是腎間質纖維化過程中細胞外基質沉積的最主要的來源。他汀類藥物通過抑制系膜細胞增生,減少TGF-β和胞外基質蛋白分泌、延緩DN進展的作用。本研究通過糖尿病大鼠模型證明,辛伐他汀可能有獨立于調脂作用之外抑制TGF-β,可能間