克氏原螯蝦procam59sclarkii試驗初報

在水產養殖中，有越來越多的適應因素受到影響，如水質污染、冷熱、環境破壞、運輸、營養不良、有害物質入侵、管理不足等。這種不同的類型和程度的適應性直接影響水生動物的正常生長發育。嚴重的情況下，身體的酶濃度會降低，相應的疾病和死亡也會停止。因此,減少或消除水產動物的應激因素是養殖者不可忽視的重要問題。有關研究表明,要減少和消除應激因素,除了實行科學飼養管理外,還可以根據具體情況在飼料中添加一些抗應激添加劑有些生物活性物質既可增強魚類的抗應激能力,又可增強免疫功能。因此,開發抗應激免疫增強劑能提高魚類生產性能和降低其發病率,具有廣闊的應用前景。殼聚糖作為免疫增強劑能提高水產動物免疫功能的研究和報道已不少1材料和方法1.1克氏原螯蝦殼聚糖的制備克氏原螯蝦、試驗飼料原料購自南京市水產科學研究所養殖試驗場。挑選健壯活潑、無病無傷的克氏原螯蝦,平均體重(22.05±2.15)g。殼聚糖為低聚殼聚糖,由上海海洋大學食品學院提供,殼聚糖質量分數為100%。葡萄糖、AKP和CAT試劑盒購自南京建成生物工程研究所。1.2方法1.2.1飼料的制備試驗用基礎飼料配方(質量分數)為:魚粉5.00%、豆餅35.00%、菜餅5.00%、棉餅5.00%、次粉35.00%、麥麩5.00%、皮糠5.00%、磷酸氫鈣1.50%,沸石粉2.00%、食鹽0.50%、預混料1.00%。3種試驗飼料為在基礎飼料中分別添加質量分數為0.50%、1.00%、1.50%的殼聚糖,相應減少次粉的質量分數。將各種原料分別粉碎后過40目篩,按配比精確稱量、采用逐級放大法使微量原料充分混勻,加適量水、用小型絞肉機加工成直徑為1.5mm的顆粒飼料,60℃恒溫干燥后置-20℃冰箱中保存備用。將試驗分成陰性對照組、陽性對照組和3個試驗組共5組,每組3個重復。陰性對照組投喂基礎飼料,飼養試驗結束后不進行低溫應激處理;陽性對照組投喂基礎飼料,飼養試驗結束后與試驗組一起進行低溫應激處理;3個試驗組分別投喂在基礎飼料中添加0.50%、1.00%、1.50%殼聚糖的試驗飼料。1.2.2試驗用水和飼養試驗在南京曉莊學院生態學省級重點建設學科水產動物生理生態研究室內的15個水族箱(每個大小為60cm×45cm×38cm)中進行。試驗開始前先將克氏原螯蝦馴養7d,馴養期投喂另外配制的精制飼料。馴養結束后,挑選健康狀況良好、大小基本相同、四肢健全的克氏原螯蝦,稱重后隨機放入15個水族箱中,每箱8只,雌雄各半,并放置適量水草和帶孔的磚塊供其躲避和休息。各箱隨機排列,經檢驗各組克氏原螯蝦的初始體重差異不顯著。試驗用水為曝氣后的自來水。試驗期間水溫為室內自然溫度,全天持續充氣增氧。分別于每天清晨和傍晚投喂等量的飼料并做記錄,每次投喂前1h吸凈前次糞便,投喂量為每箱蝦體重的5%,每周調整一次投喂量。試驗期間每周換水一次,每次換水1/2,以保證水質清潔。飼養試驗從2011年8月30日開始至2011年10月28日結束,飼養試驗結束后將陽性對照組和3個試驗組的蝦放入4℃冰箱中低溫處理5min,然后取其血清待測。1.2.3血清酚活力的測定葡萄糖(即血糖)含量采用葡萄糖氧化酶-過氧化物酶法測定。AKP活力采用酚氧化比色法測定,酶活力單位定義為100mL血清在37℃與基質作用15min產生1mg酚為1個金氏單位。CAT活力采用鉬酸銨可見光比色法測定,酶活力單位定義為37℃下每毫升血清每秒分解1μmo的H1.3數據處理與分析試驗測定的數據結果采用SPSS17.0分析軟件進行單因素方差分析(One-wayAnova)分析,Duncan’s法進行多重比較。2結果與分析2.1殼聚糖對兩組血糖含量的影響殼聚糖對低溫應激下克氏原螯蝦血糖含量的影響如表1所示。從表1可以看出,與陰性對照組相比,陽性對照組的血糖含量顯著升高,比陰性對照組提高了183.19%;與陽性對照組相比,0.50%、1.00%及1.50%殼聚糖組的血糖含量均顯著降低,其中1.00%殼聚糖組血糖含量降低的幅度最大,0.50%殼聚糖組次之,1.50%殼聚糖組最小,3個試驗組之間血糖含量差異顯著。試驗結果表明,飼料中添加適量的殼聚糖對低溫應激下克氏原螯蝦的血糖含量有顯著影響。2.2殼聚糖對cat活力的影響從表1可以看出,飼料中添加殼聚糖對低溫應激下克氏原螯蝦血清中CAT、AKP活力有顯著影響。與陰性對照組相比,陽性對照組克氏原螯蝦血清中CAT、AKP活力顯著降低。與陽性對照組相比,0.50%殼聚糖組、1.00%殼聚糖組及1.50%殼聚糖組血清中CAT活力均顯著升高,其中0.50%殼聚糖組和1.00%殼聚糖組血清中CAT活力之間無顯著差異,均顯著高于1.50%殼聚糖組,但3個試驗組CAT活力均顯著低于陰性對照組。與陽性對照組相比,0.50%殼聚糖組和1.00%殼聚糖組血清中AKP活力均顯著升高,其中0.50%殼聚糖組血清中AKP活力顯著高于1.00%殼聚糖組,而飼料中添加1.50%殼聚糖不能顯著提高低溫應激下克氏原螯蝦血清中AKP活力。3后記和討論3.1應激程度與續升率應激反應中能量代謝上的改變突出表現為血糖含量的持續升高,其幅度也與應激程度呈正相關。由于應激時血糖升高的時效比血漿皮質醇更遲緩,也更容易測定,因此血糖含量被廣泛用來監測和量化魚類應激反應3.2低溫處理對克氏原螯蝦免疫功能的影響CAT是抗氧化系統的終端酶,是細胞內清除自由基的主要酶類,它主要通過將細胞代謝產生的毒性物質H從本研究結果看,陽性對照組的CAT、AKP活力顯著低于陰性對照組,說明低溫處理使克氏原螯蝦的免疫功能嚴重受損;而添加殼聚糖各組的CAT、AKP活力明顯高于陽性對照組,說明添加殼聚糖能夠提高低溫應激狀態下克氏原螯蝦的免疫功能,其中0.50%殼聚糖組和1.00%殼聚糖組CAT活力較高,0.