火炬果樹粗提物抗氧化活性的研究

0基于過剩自由基造成的不確定反應自由基是生物氧化過程中產生的中間代謝產物。水體繼續產生自由基，并立即去除自由基。當機體清除自由基的能力下降或體內自由基生成過多時,過剩的自由基在體內堆積,作用于生物膜多不飽和脂肪酸,使之發生脂質過氧化而引起膜結構和功能的紊亂;攻擊蛋白質引起蛋白質交聯、酶活性改變;損傷DNA引起突變等等火炬樹(RhusTyphinaLinn)系漆樹科(Anacardiaceae)植物,其樹皮、葉含有單寧,是制取鞣酸的原料。果實含有檸檬酸和Vc,可作飲料1材料和方法1.1試劑與儀器火炬果穗:采于青島大學校園,室溫下自然干燥,粉碎過40目篩備用;亞油酸:上海來澤精細化學品公司;茶多酚:福建松溪生化工廠,純度>95%;乙醇、乙酸乙酯、三氯醋酸等其他試驗所用試劑:均為分析純;豬油:市售新鮮板油文火熬制,過濾后備用。721型分光光度計:上海第三分析儀器廠產品;7530G型紫外分光光度計:上海惠普;SHA-C水浴恒溫振蕩器;ZFQ-8HA型真空旋轉蒸發器。1.2實驗方法1.2.1水浸率的測定稱取粉碎干燥的火炬果穗各5g,按固液比1∶10的比例分別加入95%乙醇、60%乙醇、水、氯仿-95%乙醇(1∶1)溶液,于40℃恒溫水浴振蕩浸提6h,過濾。濾渣再分別加等量溶劑用同法提取,過濾。合并濾液,混勻,減壓濃縮蒸至粘稠,然后轉移到真空干燥器,干燥,稱重,計算浸出率。用無水乙醇溶解定容,于冰箱存放,用時逐級稀釋。1.2.2火果提取物的抗氧化性測定1.2.2.硫代巴比妥酸法檢測脂肪酸氧化產物丙二醛生成量配制0.5%的亞油酸磷酸緩沖液作為底物,分別加入底物質量0.05%、0.1%的火炬果穗95%乙醇提取物、BHT及茶多酚,用力攪勻,同時以底物作為空白。將上述各樣置于(40±1)℃恒溫培養箱中,定期取樣用硫代巴比妥酸法測定亞油酸氧化產物丙二醛的生成量。丙二醛生成量以反應液吸光度值表示,吸光度越小,丙二醛的生成量越少,即抗氧化劑的抗氧化能力越強。1.2.2.抗氧化活性的測定各稱取一定量的火炬果穗95%乙醇提取物,用少量乙醇溶解,加入100g溫熱豬油,用力攪拌均勻。使其在豬油中的含量分別為0.2%和0.02%。另稱取0.02g茶多酚和BHT各一份,用少量乙醇溶解,加入100g同樣豬油,用力攪勻。同時做樣品空白。將所有樣品放入(65±1)℃恒溫箱中,定時攪拌、并交換在恒溫箱中的位置。定期取樣測定豬油的過氧化值(POV),并以此來表示油脂的氧化速度,進而衡量提取物的抗氧化活性。POV值測定:取雙份平行樣,按照GB5009.37-85方法測定。1.2.2.%紅細胞懸液的制備雞斷頸取血,制成抗凝血,3000×g離心得紅細胞,冷生理鹽水洗3次,制成2%的紅細胞懸液。取2%的紅細胞懸液1.5mL于各管中,分別加入不同濃度火炬果穗提取物,再分別加入終濃度為0.078mol/L的H1.2.2.火炬果穗提取物對tda含量的影響雞斷頸取血,迅速取出肝臟,在0～4℃下用生理鹽水制成2%的肝勻漿。實驗分為對照組和3個劑量組。取2%肝勻漿各2.0mL加入各管中,分別加入不同濃度的火炬果穗提取物,最后用生理鹽水補充體積至3.0mL。置于37℃恒溫水浴加熱1.5h,取出加2.0mL10%TCA終止反應,再加入2.0mL0.67%TBA,置于沸水浴中顯色15min,冷卻后離心,取上清液測532nm處吸光值,以吸光值表示MDA含量多少。吸光值越大,MDA含量越高。抑制率(%)=(MDA對照-MDA處理)/MDA對照×100%1.2.2.半胱氨酸和硫酸亞鐵對mda含量測定的影響實驗分為對照組和3個劑量組。各管中先分別加入肝勻漿2mL,3個劑量組分別加入不同濃度的提取物,對照組加入1.0mL生理鹽水,再向各管分別加入半胱氨酸和硫酸亞鐵(終濃度分別為0.16mmol/L和0.032mmol/L),以硫代巴比妥酸法測定MDA含量,計算抑制率。1.2.2.6、進口實驗分為對照組(加相應的組織勻漿)和6個劑量組(分別加入不同濃度的提取物和相應組織勻漿1.0mL),加入FeSO2結果2.1提取物對脂質過氧化反應的阻斷作用以95%乙醇粗提物為試樣,用硫代巴比妥酸比色法測定火炬果穗粗提物對亞油酸脂質過氧化的抑制作用。由圖1可見,火炬果穗粗提物對亞油酸的脂質過氧化反應有阻斷作用,其阻斷作用隨提取物濃度增加而增加,呈量效關系。與常用抗氧化劑相比,0.1%的火炬果穗粗提物對亞油酸自動氧化反應的抑制能力強于0.05%的茶多酚,但弱于同濃度的茶多酚和BHT。值得注意的是本實驗所用茶多酚、BHT基本上為純品,而火炬果穗試樣為粗提物,其有效成分含量較低,純化后是否有助于提高其抗氧化作用,有待于進一步研究。2.2抗氧化能力的測定火炬果穗乙醇提取物對豬油的抗氧化效果如表1所示。火炬果穗乙醇提取物對豬油的自動氧化有一定的抑制作用,且隨著提取物濃度的增加,其抗氧化能力逐漸增強,這與硫代巴比妥酸比色法測定的結果相符。當火炬樹果穗提取物在豬油中的添加量為0.2%時,在測定時間內其抗氧化性優于0.02%茶多酚和0.02%BHT,但添加量為0.02%時其抗氧化作用不如同濃度的茶多酚和BHT。2.3火果提取物與h由表2可見,火炬果穗提取物對H2.4火煮食品對雞肝臟自發脂質過氧化的影響由表3可見,火炬果穗提取物對雞肝臟自發性脂質過氧化產物MDA的生成有抑制作用,隨提取物濃度增加,抑制率相應增加。2.5fe公司由表4可見,試驗組雞肝中的MDA吸光度值均低于由Fe2.6入量：由入量的變化而增加出入量加入火炬樹果穗提取物后,對雞肝MDA生成的抑制率隨