花粉的概念：由花粉母細胞經過

分裂形成的單倍體的生殖細胞。發育過程、一、被子植物的花粉發育經歷

小孢子四分體時期

、

單核期雙核期時期。二、產生花粉植株的兩種途徑1．途徑差異：一種是花粉通過

胚狀體

階段發育為植株；另一種是花粉在誘導培養基上先形成

愈傷組織

，再將其誘導分化成植株。主要受材料的選擇與

培養基的組成的影響。一般說來，選擇

單核

期的花藥培養成功率最高。1．材料的選擇(1)不同種類植物的誘導成功率不同。(2)同一種植物，生理狀況對誘導成功率也有直接影響。

(3)適合的花粉發育時期：花期早期(即初花期)時的花藥最佳。(4)選擇最合適的花粉發育時期：單核期①不選擇單核期以前花藥的原因：此時花藥質地幼嫩，極易破碎。②不選擇單核期以后花藥的原因：花瓣已有些松動，給材料的消毒帶來困難。③挑選單核期花藥的方法：通常選擇完全未開放的花蕾三、影響花藥培養的因素四、實驗操作1．取材材料的選?。簩^大多數植物而言，適宜花粉培養的時期是

花期早期

?；ㄋ幇l育時期的確定：一般通過

鏡檢來確定花粉是否處于適宜的發育期。鏡檢方法：最常用的是

醋酸洋紅

法。但某些植物的花粉細胞核不易著色，需采用

焙花青—鉻礬法。2．消毒常用消毒液為

70%的酒精

和0.1%的氯化汞溶液，消毒時間分別為30

s和2～4

min。3．接種和培養剝取花藥：消毒后的花蕾，要在

無菌條件下除去花萼、花瓣。剝取花藥時，一是注意不要損傷花藥，原因是

容易從受傷部位產生愈傷組織

；二是要徹底除去花絲，原因是花絲不利于愈傷組織或胚狀體

的形成。接種花藥：剝取的花藥要立即接種到培養基上。每個培養瓶接種

7～10

個花藥。培養：溫度為

25

℃，幼苗形成之前

不需要

光照。培養20～30d后，花藥開裂，長出愈傷組織或釋放出

胚狀體

。前者還要轉移到

分化培養基

上進行分化培養成再生植株；后者要盡快分開并轉移到新的培養基上。鑒定和篩選：通過愈傷組織形成的植株，常常會出現

染色體倍性的變化，因而需要鑒定和篩選。1.植物組織培養的原理2.植物組織培養的過程3.影響植物組織培養的外因有哪些4.植物組織培養的培養基、植物激素5.植物激素的使用順序及結果6.植物激素的比例及結果7.生長素類有哪些？細胞分裂素有哪些？8.培養基、外植體、接種等怎樣消毒或滅菌基礎知識記憶表現全能性的條件：①離體條件；②無菌操作(防止雜菌污染)；③適宜物質的誘導和調節(激素主要是生長素、細胞分裂素等)；④種類齊全、比例適合的營養物質；⑤溫度、酸堿度、光照等條件的控制。愈傷組織：離體的植物器官、組織或細胞，在培養一段時間以后，通過細胞分裂，形成一種排列疏松無規則、高度液泡化、無定形態的薄壁細胞組成的組織。脫分化：已經分化的細胞，經過誘導后，失去其特有的結構或功能而轉變成未分化狀態的過程。再分化:經脫分化形成的組織或細胞在一定的培養條件下轉變為各種不同細胞或組織的過程。（一）概念二、植物組織培養的基本過程離體的植物組織、器官、細胞（外植體）脫分化愈傷組織再分化幼根、幼芽或胚狀體完整植物體二、植物組織培養的基本過程（二）植物組織培養的流程三、植物組織培養的因素1、內因不同植物組織、同一種植物不同組織（年齡、保存時間）培養難度不同2、外因（MS培養基+環境因子）大量元素：C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S微量元素：B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co有機物：甘氨酸、煙酸、肌醇、維生素、蔗糖等植物激素：生長素、細胞分裂素等環境因子：pH、溫度、光照1、植物激素的使用順序使用順序實驗結果先使用生長素，后使用細胞分裂素有利于細胞分裂，但細胞不分化先使用細胞分裂素，后使用生長素細胞既分裂也分化同時使用分化頻率提高使用的量及比例實驗結果生長素>細胞分裂素有利于根的分化，抑制芽的形成生長素<細胞分裂素有利于芽的分化，抑制根的形成2、植物激素使用量及比例四、植物培養的實驗操作流程1．制備MS固體培養基

(1)配制各種母液：將各種成分按配方比例配制成的濃縮液。使用時根據母液的

濃縮倍數

，計算用量，并加

蒸餾水

稀釋。(2)配制培養基：應加入的物質有

、，并用蒸餾水定容到1000毫升。在菊花組織培養中，可以不添加植物激素，原因是菊花莖段組織培養比較容易。(3)滅菌：采取的滅菌方法是

高壓蒸汽滅菌

。瓊脂

蔗糖

、大量元素、微量元素、有機物和植物激素的母液2．外植體消毒消毒工作臺，流水無菌無菌無70%的酒精氯化汞無菌水菌水3．接種：用體積分數為70%的酒精點燃酒精燈。注意所有接種工作都必須在酒精燈火焰旁進行，器械使用前后都要用火焰灼燒滅菌。接種過程中插入外植體時形態學

上端朝上，上每個錐形瓶接種

6～8

個外植體。4．培養：放在

無菌箱

中進行，并定期進行的蛭石或珍珠巖等環境中生活一段時間，進行

。最后進行露天栽培。溫度

消毒

，保持適宜的

光照

和。壯苗5．移栽：移栽前應先打開培養瓶的封口膜，讓其在培養間生長幾日，然后用

流水

清洗根部培養基。然后將幼