人類疾病的動(dòng)物模型一、概念人類疾病的動(dòng)物模型是指各種醫(yī)學(xué)科學(xué)研究中建立的具有人類疾病模擬表現(xiàn)的動(dòng)物。動(dòng)物疾病模型主要用于實(shí)驗(yàn)生理學(xué)、實(shí)驗(yàn)病理學(xué)和實(shí)驗(yàn)治療學(xué)（包括新藥篩選）研究。人類疾病的發(fā)展十分復(fù)雜，以人本身作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象來深入探討疾病發(fā)生機(jī)制，推動(dòng)醫(yī)藥學(xué)的發(fā)展來之緩慢，臨床積累的經(jīng)驗(yàn)不僅在時(shí)間和空間上都存在局限性，而且許多實(shí)驗(yàn)在道義上和方法上也受到限制。而借助于動(dòng)物模型的間接研究，可以有意識(shí)地改變那些在自然條件下不可能或不易排除的因素，以便更準(zhǔn)確地觀察模型的實(shí)驗(yàn)結(jié)果并與人類疾病進(jìn)行比較研究，有助于更方便，更有效地認(rèn)識(shí)人類疾病的發(fā)生發(fā)展規(guī)律，研究防治措施。二、動(dòng)物模型在生物醫(yī)學(xué)中的意義.可復(fù)制臨床上一些疾病不常見,如放射病、毒氣中毒、烈性傳染病、外傷、腫瘤等。還有一些如遺傳性、免疫性、代謝性和內(nèi)分泌、血液等疾病，發(fā)生發(fā)展緩慢、潛伏期長，病程也長，可能幾年或幾十年,在人體很難進(jìn)行3世代以上的連續(xù)觀察。人們可有意選用動(dòng)物種群中發(fā)病率高的動(dòng)物，通過不同手段復(fù)制出各種模型，在人為設(shè)計(jì)的實(shí)驗(yàn)條件下反復(fù)觀察和研究，甚至可進(jìn)行幾十世代的觀察，同時(shí)也避免了人體實(shí)驗(yàn)造成的傷害。.可按需要取樣動(dòng)物模型作為人類疾病的“復(fù)制品”,可按研究者的需要隨時(shí)采集各種樣品或分批處死動(dòng)物收集標(biāo)本，以了解疾病全過程，這是臨床難以辦到的。.可比性一般疾病多為零散發(fā)生,在同一時(shí)期內(nèi),很難獲得一定數(shù)量的定性材料,而模型動(dòng)物不僅在群體數(shù)量上容易得到滿足，而且可以在方法學(xué)上嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)條件，在對(duì)飼養(yǎng)條件及遺傳、微生物、營養(yǎng)等因素嚴(yán)格控制的情況下，通過物理、化學(xué)或生物因素的作用，限制實(shí)驗(yàn)的可變因子，并排除研究過程中其它因素的影響，取得條件一致的、數(shù)量較大的模型材料，從而提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可比性和重復(fù)性，使所得到的成果更準(zhǔn)確更深入。.有助于全面認(rèn)識(shí)疾病的本質(zhì)在臨床上研究疾病的本質(zhì)難免帶有一定局限性。許多病原體除人以外也能引起多種動(dòng)物的感染，其癥狀體征表現(xiàn)可能不完全相同。但是通過對(duì)人畜共患病的比較，則可以充分認(rèn)識(shí)同一病原體給不同機(jī)體帶來的各種危害，使研究工作上升到立體的水平來揭示某種疾病的本質(zhì)。因此，一個(gè)好的疾病模型應(yīng)具有以下特點(diǎn)：①再現(xiàn)性好，應(yīng)再現(xiàn)所要研究的人類疾病，動(dòng)物疾病表現(xiàn)應(yīng)與人類疾病相似。②動(dòng)物背景資料完整，生命周期滿足實(shí)驗(yàn)需要。③復(fù)制率高。④專一性好，即一種方法只能復(fù)制出一種模型。應(yīng)該指出，任何一種動(dòng)物模型都不能全部復(fù)制出人類疾病的所有表現(xiàn)，動(dòng)物畢竟不是人體，模型實(shí)驗(yàn)只是一種間接性研究，只可能在一個(gè)局部或一個(gè)方面與人類疾病相似。所以，模型實(shí)驗(yàn)結(jié)論的正確性是相對(duì)的，最終還必須在人體上得到驗(yàn)證。復(fù)制過程中一旦發(fā)現(xiàn)與人類疾病不同的現(xiàn)象，必須分析差異的性質(zhì)和程度，找出異同點(diǎn)，以正確評(píng)估。四、人類疾病動(dòng)物模型的分類自發(fā)性動(dòng)物模型是取自動(dòng)物自然發(fā)生的疾病,或由于基因突變的異常表現(xiàn)通過定向培育而保留下來的疾病模型。如大鼠的結(jié)腸腺癌、肝細(xì)胞癌模型，家犬的基底細(xì)胞癌、間質(zhì)細(xì)胞癌模型等十余種。突變系的遺傳性疾病很多,可分為代謝性疾病、分子性疾病、特種蛋白合成異常性疾病等。這類疾病的發(fā)生在一定程度上減少了人為因素，更接近于人類疾病，因此近年來十分重視對(duì)自發(fā)性動(dòng)物疾病模型的開發(fā)。誘發(fā)性動(dòng)物模型誘發(fā)性動(dòng)物模型是通過物理、生物、化學(xué)等致病因素的作用，人為誘發(fā)出的具有類似人類疾病特征的動(dòng)物模型。誘發(fā)性動(dòng)物模型制作方法簡便，實(shí)驗(yàn)條件容易控制，重復(fù)性好，在短時(shí)間內(nèi)可誘導(dǎo)出大量疾病模型，廣泛用于藥物篩選、毒理、傳染病、腫瘤、病理機(jī)制的研究。但誘發(fā)性動(dòng)物模型是通過人為限定方式而產(chǎn)生的，多數(shù)情況下與臨床所見自然發(fā)生的疾病有一定差異,況且許多人類疾病目前還不能用人工誘發(fā)的方法復(fù)制,因而又有一定的局限性。第二節(jié)自發(fā)性人類疾病動(dòng)物模型一、免疫缺陷動(dòng)物疾病模型淋巴細(xì)胞缺陷疾病模型臨床常表現(xiàn)為免疫球蛋白缺失，細(xì)胞免疫正常。如小鼠，起源于品系，為染色體隱性遺傳，其基因符號(hào)為。純和型雌鼠和雜合型雄鼠對(duì)n型抗原非胸腺依賴性抗原以及雙鏈等沒有反應(yīng)。對(duì)胸腺依賴性抗原缺乏抗體反應(yīng)，、低下。如果移植正常鼠的骨髓到宿主，細(xì)胞缺失可得到恢復(fù)。而將鼠的骨髓移植到受射線照射的同系正常宿主，其仍然表現(xiàn)為不正常的表型。淋巴細(xì)胞缺陷動(dòng)物疾病模型胸腺分泌淋巴細(xì)胞缺陷導(dǎo)致細(xì)胞免疫功能喪失，臨床表現(xiàn)為毛發(fā)缺乏和胸腺發(fā)育不全。196年6在蘇格蘭的一群小鼠中發(fā)現(xiàn)了一種突變種-自-發(fā)無毛小鼠，該鼠生長不良，繁殖力低下，易發(fā)生嚴(yán)重感染，到196年8對(duì)無毛小鼠進(jìn)行縱膈連續(xù)切片，顯示出胸腺缺失，遺傳檢查為常染色體隱性遺傳，這種動(dòng)物能接受同種或異種組織移植。現(xiàn)在有多種遺傳性無胸腺動(dòng)物，如裸小鼠、裸大鼠、裸豚鼠和遺傳性無脾癥小鼠動(dòng)物模型。.淋巴細(xì)胞聯(lián)合免疫缺陷動(dòng)物疾病模型這是最嚴(yán)重的免疫缺陷疾病動(dòng)物臨床表現(xiàn)為低Y球蛋白血癥、低淋巴細(xì)胞血癥，由于淋巴細(xì)胞缺乏，在淋巴結(jié)內(nèi)生發(fā)中心消失，由于淋巴細(xì)胞缺乏，在脾動(dòng)脈周圍細(xì)胞鞘和淋巴結(jié)副皮質(zhì)區(qū)縮小、淋巴細(xì)胞減少。小鼠由美國于年首次發(fā)現(xiàn)，年由實(shí)驗(yàn)室引入我國。遺傳檢查為第號(hào)染色體上隱性突變基因?yàn)椤⑼唇幌怠６⑦z傳14高血壓大鼠疾病模型自發(fā)^生高血壓是年在日本由岡本和從大鼠中篩選培育而成血壓呈持續(xù)升高，雄性還拌有廣泛結(jié)節(jié)性動(dòng)脈周圍炎被用作結(jié)節(jié)性動(dòng)脈周圍炎動(dòng)物模型。用遺傳育種法已純化了八個(gè)品系遺傳性高血壓大鼠即遺傳性高血壓品系、鹽敏感品系、自發(fā)性高血壓品系、中風(fēng)型高血壓品系R高血壓品系N品系、高血壓品系和高血壓品系病理生理及組織病理學(xué)變化與人類高血壓疾病有相似之處。三、自發(fā)腫瘤疾病動(dòng)物模型幾乎所有人類腫瘤疾病在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中都可以有相似的腫瘤疾病，腫瘤在不同種系動(dòng)物中發(fā)病率有差異，利用高發(fā)病率品系動(dòng)物來研究自發(fā)性腫瘤疾病，更接近人群發(fā)病情況。小鼠乳腺癌在、、、發(fā)病率較高在雌性動(dòng)物年齡超過個(gè)月后乳腺腫瘤發(fā)病率可高達(dá)％肺腫瘤多在、皮膚腫瘤在、肝臟腫瘤在、、、淋巴網(wǎng)狀系統(tǒng)腫瘤在、，血管內(nèi)皮瘤在、等發(fā)病率較高，在實(shí)際工作中應(yīng)進(jìn)行針對(duì)性選擇。第三節(jié)誘發(fā)性動(dòng)物模型的復(fù)制方法誘發(fā)性動(dòng)物模型的復(fù)制不外是以生物的、物理的及化學(xué)的因素作用于動(dòng)物，使動(dòng)物產(chǎn)生類似于人類疾病的生理改變。物理因素包括機(jī)械力、溫度和壓力的改變、放射線、噪音等。復(fù)制模型時(shí)要注意選擇適宜的刺激強(qiáng)度、時(shí)間和頻率。例如要觀察I度燒傷，若作用時(shí)間過長，溫度過高，則會(huì)出現(xiàn)深度燒傷，達(dá)不到觀察I度燒傷所引起的病理生理改變的目的，模型將失去價(jià)值。生物因素，如病毒、細(xì)菌、真菌、寄生蟲、生物制品、細(xì)胞、毒素等各種致病原，通過注射或接種使動(dòng)物產(chǎn)生相應(yīng)疾病。用該方法進(jìn)行復(fù)制時(shí)首先要注意易感動(dòng)物與人臨床癥狀的異同處，選用易感動(dòng)物。如輪狀病毒可引起嬰兒急性壞死性腸炎，而犬感染該病毒后僅出現(xiàn)亞臨床癥狀。人畜共患病動(dòng)物模型是研究人類疾病的極好材料，現(xiàn)有15多0種人畜共患病資料，為流行病學(xué)、病理學(xué)和臨床癥狀學(xué)的研究提供了依據(jù)。化學(xué)因素的作用有兩方面，一是通過化學(xué)物質(zhì)的燒傷、腐蝕，二是通過化學(xué)物質(zhì)參與代謝實(shí)現(xiàn)的。在復(fù)制過程中要注意不同品種、不同年齡、體重的動(dòng)物存在著劑量、耐藥性和副作用的差異。如用四氯化碳復(fù)制肝脂肪變性動(dòng)物模型，量過大會(huì)引起肝壞死，乃至出現(xiàn)急性中毒而死亡，因此，在試驗(yàn)前要摸出穩(wěn)定的實(shí)驗(yàn)條件。一、心血管系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型（一）心肌缺血的動(dòng)物模型急性心肌缺血?jiǎng)游锬Ｐ偷闹苽浞椒ê芏啵筛爬ǚ譃閮深悾皇情_胸法諸如冠脈結(jié)扎法、冠脈夾閉法、微量直流電刺激法、化學(xué)灼燒法及冠脈局部滴敷藥物法；二是閉胸法，通過注射或接種使動(dòng)物產(chǎn)生相應(yīng)疾病。包括異物法如微珠堵塞法和球囊堵塞法及冠脈內(nèi)注射藥物誘發(fā)冠脈痙攣法。開胸法直觀省時(shí)，易掌握，冠脈病變的部位恒定，個(gè)體間差異小,但需行開胸手術(shù)并要求以呼吸機(jī)輔助呼吸,創(chuàng)傷大,動(dòng)物死亡率高達(dá)30-％6。0閉胸法簡便易行，手術(shù)創(chuàng)傷小，動(dòng)物死亡率低，術(shù)后動(dòng)物恢復(fù)迅速，可以選擇任何一支冠脈，定位準(zhǔn)確，且動(dòng)物處于較少的生理擾亂下，用這種方法制備的模型進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究，結(jié)果相對(duì)準(zhǔn)確，誤差小。齊淑英等利用銅圈置入法制備急性心肌缺血?jiǎng)游锬Ｐ停錂C(jī)理可能在于銅圈作為異物被置入冠脈內(nèi),會(huì)誘發(fā)冠脈內(nèi)血栓形成，堵塞冠脈而發(fā)生急性心肌缺血。選健康雜種犬，體重土，硫噴妥鈉靜脈注射麻醉動(dòng)物，左側(cè)臥位固定于實(shí)驗(yàn)臺(tái)上。右頸部常規(guī)備皮消毒，橫行切開皮膚，逐層分離皮下組織，暴露右側(cè)頸總動(dòng)脈，結(jié)扎其遠(yuǎn)心端，近心端剪開直徑約,送入動(dòng)脈穿刺器，X線下沿穿刺器送入預(yù)塑形左冠脈主干，注射％泛影葡胺顯影證實(shí)后沿導(dǎo)管送入長導(dǎo)絲至左前降支遠(yuǎn)端，撤出導(dǎo)管、將自制銅圈（用直徑銅絲，以號(hào)注射針頭繞制圈而成）套在導(dǎo)絲上再用導(dǎo)管將銅圈推送至左前降支第一分叉處撤出導(dǎo)管導(dǎo)管及長導(dǎo)絲，銅圈留于局部，連續(xù)心電監(jiān)護(hù)，間斷注射造影劑。在實(shí)驗(yàn)中，于送入導(dǎo)管前靜脈給予肝素鈉，置銅圈前靜注利多卡因，然后維持靜滴g其結(jié)果犬于放置銅圈后出現(xiàn)急性心肌缺血冠脈造影顯示銅圈遠(yuǎn)端不顯影心電圖出現(xiàn)定位的改變成功率％。犬于實(shí)驗(yàn)結(jié)束后內(nèi)均存活死亡率為。（二）動(dòng)脈粥樣硬化動(dòng)物模型除田鼠和地鼠外，一般溫血?jiǎng)游镏灰椒ㄟm當(dāng)都能形成動(dòng)脈粥樣硬化的斑塊病變。常選用兔、豬、大鼠、雞、鴿、猴和犬等動(dòng)物。常用的復(fù)制方法有高膽固醇、高脂肪飼料喂養(yǎng)法，免疫學(xué)方法，兒茶酚胺類藥物注射法，同型半胱氨酸注射法，幼乳大白鼠法及膽固醇－脂肪乳劑靜脈注射法等。家兔是使用最廣的動(dòng)物，它對(duì)造病膳食的敏感性高，容易造成高膽固醇血癥與動(dòng)脈粥樣硬化。缺點(diǎn)為家兔的脂質(zhì)代謝與人類不同，病變的解剖分布以胸動(dòng)脈為主，小動(dòng)脈常有病變；病理組織以血源性巨噬細(xì)胞吞噬脂質(zhì)為主，形成泡沫細(xì)胞，不容易形成粥樣斑塊，亦難以形成復(fù)合性病變；網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)常伴有脂質(zhì)沉積。在含黃豆粉10％、麥粉38％、麩皮50％，鹽1％及魚粉1％的基礎(chǔ)飼料中加進(jìn)豬油與蛋黃粉，每天每只家兔喂基礎(chǔ)飼料5豬油和蛋黃粉g以上述造病膳食飼喂周。在喂食后周內(nèi)血漿膽固醇濃度從實(shí)驗(yàn)前的逐漸上升，第周達(dá)到最高水平，平均值為。繼后膽固醇濃度明顯下降，停喂造病膳食后下降更為明顯，降至。主動(dòng)脈病變niv級(jí)者達(dá)%,其中miv級(jí)病變占%病變雖以細(xì)胞內(nèi)外脂質(zhì)沉積為主，但網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的脂質(zhì)沉淀及肝臟損傷明顯減輕，死亡率降低。以該方法復(fù)制的動(dòng)脈粥樣硬化模型，比較符合人類的飲食情況，實(shí)驗(yàn)中動(dòng)物健康狀態(tài)穩(wěn)定，死亡率較低。二、消化系統(tǒng)動(dòng)物模型（一）肝硬化動(dòng)物模型選體重的大鼠，將氨基半乳糖配制成0的生理鹽水溶液，用將調(diào)節(jié)至以的劑量行腹內(nèi)注射，每天一次，每周6天，約半年左右即可形成肝硬化。在復(fù)制過程中，自股動(dòng)脈取血作肝功能試驗(yàn)，包括血清蛋白測(cè)定、濁度試驗(yàn)、轉(zhuǎn)氨酶、乳酸脫氫酶（）H單胺氧化酶、5核苷酸酶、Y谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶Y一及膽鹼酯酶。分批處死動(dòng)物進(jìn)行尸解，觀察腹水，心、肝、脾、肺腎等器官形態(tài),用4％甲醛溶液固定,石蠟包埋,切片厚5微米,進(jìn)行、網(wǎng)狀纖維（與法、膠原纖維（法及彈力纖維法染色。在采用上述劑量氨基半乳糖長期多次注入大鼠腹腔時(shí)，動(dòng)物耐受性較好。逐漸出現(xiàn)進(jìn)食活動(dòng)減少，有時(shí)解稀糖大便，腹部較為膨隆。半年內(nèi)與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組體重平均增長顯著延緩。尸檢時(shí)可見腹腔內(nèi)有腹水，不等。心、脾、肺、腎、無明顯改變。與對(duì)照組相比，早期肝明顯增大、重量增加，色澤較灰黃，以后體積逐漸縮小，質(zhì)地變硬，邊緣較鈍，肝表面可見彌漫性分布的細(xì)顆粒狀結(jié)節(jié)，結(jié)節(jié)大小不一，直徑約為結(jié)節(jié)間可見彌漫分布的纖維間隔，間隔一般較細(xì)小，其凹凸程度隨病變而加深。切片染色、光鏡下檢查，在注射氨基半乳糖個(gè)月后，肝小葉結(jié)構(gòu)開始紊亂形成大小不等的肝細(xì)胞團(tuán)，有的仍見好的中央靜脈，但其周圍門脈區(qū)膽管上皮高度增生，其間夾有殘留的個(gè)別肝細(xì)胞及少量單核多核白細(xì)胞及褐色素沉著。隨著病程的延長，增生的膽管及纖維母細(xì)胞向四周呈星芒狀伸展，有的與中央靜脈相連。一般肝細(xì)胞變性壞死少見，大多呈增生表現(xiàn)。與法染色顯示肝細(xì)胞團(tuán)中網(wǎng)狀纖維少見而周圍組織中存在著大量疏松的網(wǎng)狀纖維。膠原纖維及彈性纖維均未見增多。除肝外，其余實(shí)質(zhì)器官切片無異常發(fā)現(xiàn)。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在出現(xiàn)肝硬化時(shí)血清白蛋白含量稍有降低濁度試驗(yàn)略增高血清、、、核Y與膽鹼脂酶均無明顯改變。（二）動(dòng)物大腸癌模型動(dòng)物大腸癌的自然發(fā)病率很低，僅田鼠較易發(fā)生大腸息肉和腫瘤。早期使用誘癌的化學(xué)劑多是芳香胺類，年應(yīng)用蘇鐵素及其配基甲基偶氮氧甲醇成功地誘發(fā)了大鼠大腸癌之后,又合成一系列類似物。目前用以誘發(fā)大腸癌的致癌劑主要是間接致癌劑二甲阱及直接致癌劑亞硝胺類。選用的動(dòng)物有小鼠、大鼠及豚鼠等。這里重點(diǎn)介紹二甲阱誘發(fā)小鼠大腸癌的方法。選體重為的雌性昆明種小鼠，飼以常規(guī)飼料，任意飲水。致癌劑:對(duì)稱的二甲肼iid為白色粉狀結(jié)晶，每次臨注射前以無菌生理鹽水配成％溶液，并用將其調(diào)至。每周給小鼠頸部皮下注射即％溶液一次，連續(xù)20或（16次為。于注射日起6（或節(jié)為個(gè)月末處死動(dòng)物，檢查大腸的腫瘤。據(jù)資料報(bào)導(dǎo)，大腸癌的發(fā)病率為81氨1％0。0誘發(fā)的大腸腫瘤均系惡性腫瘤。腫瘤發(fā)生在腸壁的粘膜面，大多向腸內(nèi)突出，腫瘤表面光滑，少數(shù)有糜爛。全部腫瘤均分布在距肛門范圍內(nèi)，以距肛門處最密集。腫瘤的組織學(xué)檢查，絕大多數(shù)為腺癌。實(shí)驗(yàn)中還誘發(fā)了一定量的肛門腫瘤，切片檢查均為鱗癌。亦可用純系小鼠誘癌，方法同上，但誘癌率低，僅％，每鼠帶瘤數(shù)亦少，說明此系小鼠對(duì)不敏感。用誘癌法，小鼠較大鼠合適，因?yàn)榍罢咧饕T發(fā)大腸癌，后者除誘發(fā)出大腸癌外，小腸癌發(fā)病率較高，說明大鼠大腸組織對(duì)敏感性不如小鼠高。此外誘癌率與小鼠的種系亦有關(guān)系，一般認(rèn)為純系小鼠誘癌率低。注射及處理小鼠、墊料時(shí)需戴手套。加強(qiáng)防護(hù)措施。三、呼吸系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型的復(fù)制急性呼吸窘迫綜合征（）關(guān)于該模型復(fù)制方法，除國內(nèi)外多數(shù)采用的油酸法外，尚有靜脈注射致死量大腸桿菌內(nèi)毒素、出血性休克、高濃度氧吸入等等。但目前認(rèn)為用油酸法制備模型比較理想，因?yàn)檫@種模型的病理形態(tài)及病理生理的改變和臨床所見者甚為相似，具有某些臨床的特點(diǎn)，可以做為臨床研究的對(duì)象。從病理上說，注射油酸與臨床誘發(fā)的因素差異較大；誘發(fā)的因素多種多樣，表現(xiàn)在肺并無特異性，且本法變化迅速，典型，簡便易行，故不失為一種較理想的方法。油酸是一種毒性很強(qiáng)的脂肪酸，注入后首先通過神經(jīng)、體液因素使肺微血管強(qiáng)烈收縮。隨后，由于脂肪栓子阻塞肺毛細(xì)血管，造成肺微循環(huán)障礙;油酸尚可直接刺激血管,損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞及肺泡上皮，增加通透性，導(dǎo)致間質(zhì)水腫，出血等病理改變。還有人指出，油酸有破壞肺泡表面活性物質(zhì)的作用。取體重的家兔，將動(dòng)物背位固定于實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，在％普魯卡因局部麻醉下分離一側(cè)頸總動(dòng)脈以備取血用。待動(dòng)物安靜后觀察其一般狀態(tài)，著重觀察呼吸運(yùn)動(dòng)、舌粘膜顏色，并記錄呼吸頻率。由頸總動(dòng)脈取血注射針管預(yù)先用％肝素鹽水沖洗用丹麥微量血?dú)夥治鰞x測(cè)定、、，并計(jì)算肺泡一動(dòng)脈氧分壓差（D用結(jié)核菌素注射器從耳緣靜脈注射油酸（化學(xué)純，分子量）,劑量為m注射后除觀察呼吸頻率、呼吸運(yùn)動(dòng)等一般變化外，分別于、、、分鐘時(shí)取血，重復(fù)測(cè)定血?dú)饧白兓c注射油酸前相比較。注射油酸后小時(shí)將動(dòng)物放血處死，開胸取肺，用生理鹽水沖洗其表面血液，并用濾紙吸去表面水分，然后在普通藥物天平上稱重，計(jì)算肺系數(shù)。肉眼觀察肺組織大體變化后，將標(biāo)本用1、％中性福爾馬林固定液固定，按常規(guī)作病理切片鏡檢。所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物注射油酸前呼吸頻率在4、-次6/、分之間用注入油酸后1、分鐘左右最快用可達(dá)14、分/；2小時(shí)后仍保持呼吸過速，但已有減慢趨勢(shì)。此外動(dòng)物有明顯吸氣性呼吸困難，有的在6、分鐘自鼻腔溢出淡紅色泡沫樣液體，類似臨床急性肺水腫。注射油酸后血?dú)馔怀鲎兓敲黠@下降，一分鐘時(shí)比開始下降左右。與值變化不大，但在實(shí)驗(yàn)過程中一般可看到初期值偏低值偏高，后期則相反，可能與機(jī)體代謝情況及呼吸頻率變化有關(guān)。注射油酸后肺泡與動(dòng)脈分壓差明顯加大。正常值在吸空氣條件下為差值加大提示肺泡氧彌漫入動(dòng)脈血發(fā)生障礙，是診斷的重要依據(jù)。時(shí)因肺水腫、充血、出血等影響通氣與血流灌注比率，增加了無效灌注，導(dǎo)致重低氧血癥，這種情況不能單純用提高吸入氧分?jǐn)?shù)糾正。計(jì)算公式：動(dòng)脈血（（大氣壓水蒸氣壓）X吸入氣氧濃度）呼吸商（（-4———、.8家兔正常組織呈淡紅色，表面光滑，實(shí)驗(yàn)兔肺組織呈暗褐色，有點(diǎn)狀或片狀出血、小灶性壞死，多數(shù)動(dòng)物氣管內(nèi)有粉紅色泡沫樣液體，肺體積增大。曾測(cè)定2、例實(shí)驗(yàn)兔肺系數(shù)，平均值為1、.±421.9，明4顯大于正常值射4-，5提）示有顯著肺水腫。肺重量射肝）肺系數(shù)二體重鏡檢可見部分肺泡呈代償性擴(kuò)張，部分肺泡萎陷顯示局部不張，肺泡內(nèi)有水腫液及出血，偶可見有透明膜形成。應(yīng)注意必須保證油酸準(zhǔn)確注入于血管內(nèi)用因油酸總量甚微用如稍有外溢則影響很大。處死動(dòng)物以放血為好。取肺時(shí)應(yīng)將心肺提起，結(jié)扎并離斷腔靜脈及主動(dòng)脈，并于氣管分叉上處再結(jié)扎一線，從上端剪斷氣管，最后連同心肺血管全部結(jié)扎離斷用務(wù)求準(zhǔn)確得出肺重量。如此模型作實(shí)驗(yàn)治療用，則可根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求延長動(dòng)物存活時(shí)間或調(diào)整油酸劑量。四、神經(jīng)系統(tǒng)疾病模型實(shí)驗(yàn)性變態(tài)反應(yīng)性腦脊髓炎實(shí)驗(yàn)性變態(tài)反應(yīng)性腦脊髓炎是一典型的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ汀Ｔ缭谀旮鶕?jù)對(duì)一系列實(shí)驗(yàn)結(jié)果的總結(jié)，指出和人的脫髓鞘病有相似之處。年等報(bào)告以腦或脊髓加佐劑進(jìn)行免疫，僅需一次注射就能引起豚鼠A而且成功率相當(dāng)高。以后，以兔、小鼠、大鼠、羊、貓、田鼠及猴等動(dòng)物用同樣方法均能復(fù)制成功，以豚鼠最為敏感。這里介紹用同種脊髓加進(jìn)行免疫復(fù)制的方法。氏左劑的制備參照的制法液體石臘，無水羊毛脂，結(jié)核菌。用上述混合液配成的。高壓滅菌后使用。脊髓組織懸液：于實(shí)驗(yàn)當(dāng)時(shí)，在無菌條件下先將豚鼠肝素化，然后經(jīng)胸主動(dòng)脈用生理鹽水灌洗至無血。取出脊髓，除去脊膜，稱重，用玻璃研磨器將脊髓研成勻漿，以生理鹽水配制成50％懸液。脊髓乳劑的制備：將脊髓組織懸液與按混合，用注射器反復(fù)抽注，即成乳劑。選用體重左右的豚鼠，于豚鼠的四個(gè)足掌肉墊各注射脊髓1每只豚鼠共注射。注射后按常規(guī)飼養(yǎng)。免疫注射半月后，血清中逐漸出現(xiàn)抗脊髓抗體，皮膚試驗(yàn)呈延緩反應(yīng)，而且豚鼠陸續(xù)出現(xiàn)后肢癱瘓，甚至大小便失禁，很易死亡。血清補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)：由豚鼠心臟抽血，以3，00轉(zhuǎn)0/分離心30分鐘分離血清。抗原為1％脊髓生理鹽水懸液，也經(jīng)3，00轉(zhuǎn)0/分離心1小時(shí)，取其上清液作試驗(yàn)用。補(bǔ)體為2應(yīng)用單位，溶血系統(tǒng)為2％綿羊紅細(xì)胞及2單位的溶血素。皮膚試驗(yàn)：將豚鼠背部剃毛，用％同種脊髓生理鹽水懸液作皮內(nèi)注射，注后當(dāng)時(shí)及、48小時(shí)觀察皮膚反應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)在注后當(dāng)時(shí)不見皮膚反應(yīng)，而在24小時(shí)出現(xiàn)紅斑或硬結(jié)，48小時(shí)仍存在，所以是延緩型反應(yīng)。組織學(xué)檢查：在實(shí)驗(yàn)終了時(shí)處死動(dòng)物，取出腦及脊髓等欲檢查的臟器，福爾馬林固定，常規(guī)切片、染色作鏡檢。可見脊膜及中央管周圍有明顯的淋巴樣組織浸潤、增厚，脊髓白質(zhì)內(nèi)有細(xì)胞浸潤的小灶狀病變及靜脈周圍呈套袖樣浸潤。神經(jīng)細(xì)胞有壞死，細(xì)胞核消失呈勻質(zhì)小體，或細(xì)胞體消失留下一空隙，以及細(xì)胞周圍有圓細(xì)胞浸潤等。在腦組織中可見到腦膜增厚，淋巴樣細(xì)胞及單核細(xì)胞浸潤。室管膜及脈絡(luò)膜亦呈同樣變化。小靜脈及毛細(xì)血管周圍，則呈套袖狀細(xì)胞浸潤。腦實(shí)質(zhì)內(nèi)有小膠質(zhì)細(xì)胞組成的浸潤灶。有些星狀細(xì)胞呈核碎裂、胞漿蒼白、細(xì)胞變形等。上述變化以脊髓的病理改變和癱瘓最為一致,是最特異的變化，僅見于注射脊髓加引起癱瘓的動(dòng)物。血清抗體雖也有特異性但與癱瘓或脊髓病變的程度無一致性關(guān)系；而皮膚反應(yīng)則既有特異性，又與癱瘓及脊髓病變呈一致性。文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)還曾指出，這種模型不能用血清抗體進(jìn)行傳遞，但用淋巴細(xì)胞被動(dòng)傳遞則能成功。提示病變的本質(zhì)屬于細(xì)胞免疫機(jī)制。至于腦內(nèi)的變化,特異性較差用或其它組織懸液加注射的動(dòng)物也能發(fā)現(xiàn)，唯程度輕的多，可能是本身引起的，也可能因?yàn)槠渌M織和腦脊液之間有某些共同抗原性，從而引起交叉反應(yīng)之故。五、泌尿系統(tǒng)疾病模型腎小球腎炎疾病模型在動(dòng)物身上建立腎小球腎炎的方法很多，最常用的是通過免疫手段，主要采用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有大鼠、兔及狗。以生理鹽水配制及雞蛋白即為抗原。用兔制備抗血清選體重左右的兔第一次用雞蛋白加作成的乳劑注射于肌肉內(nèi)，以后每周腹腔注射一次雞蛋白，不加佐劑，共注射8次。最后一次注射后5天，心臟穿刺抽血，300轉(zhuǎn)0/分離心30分鐘，得血清作沉淀反應(yīng)。如抗體滴度高就可采血，將血清在56℃滅活30分鐘后備用。于上述血清中加入、倍量1:5-1雞:蛋1白0，以保證抗原處于稍過剩狀態(tài)，將溶液混勻即可。選用體重左右的兔在實(shí)驗(yàn)前小時(shí)，給實(shí)驗(yàn)用的健康兔靜脈注射％臺(tái)盼藍(lán)以封閉網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)，實(shí)驗(yàn)時(shí)由靜脈注射上述抗原抗體復(fù)合物，注射速度要慢。注射后2小時(shí)，腎臟就開始出現(xiàn)病變,其程度隨著時(shí)間的推移而逐漸明顯。可在不同時(shí)間收集動(dòng)物尿液、血液等進(jìn)行各種檢查。以后將動(dòng)物處死,取出腎臟作組織學(xué)檢查。尿液檢查時(shí)可發(fā)現(xiàn)蛋白、白細(xì)胞、紅細(xì)胞甚至管型,這些改變?cè)谧⑸浜笠惶煲呀?jīng)很明顯。血中非蛋白氮、肌酐等的濃度也在注射后一天即明顯升高。腎臟的組織學(xué)檢查顯示病變呈彌漫性，兩側(cè)腎臟均受累。可以發(fā)現(xiàn)腎小球毛細(xì)血管充血、白細(xì)胞滲出，時(shí)間稍久者還有由于腎小球內(nèi)細(xì)胞增生而出現(xiàn)腎小球細(xì)胞增多、小球體積增大等變化。有些腎小球囊內(nèi)還可見紅細(xì)胞、漿液和纖維性滲出物，嚴(yán)重時(shí)血管內(nèi)可有血栓形成。腎小管上皮細(xì)胞常有濁腫、玻璃樣變等，管腔內(nèi)含有從腎小球?yàn)V過的蛋白、紅細(xì)胞、白細(xì)胞和脫落的上皮細(xì)胞，有時(shí)它們凝成管型。腎間質(zhì)內(nèi)常有不同程度的充血、水腫和少量淋巴細(xì)胞及中性粒細(xì)胞浸潤。動(dòng)物死亡大約發(fā)生在注射后4天或更晚，如能存活2-天3，一般就不致死亡，一周后病變可逐漸恢復(fù)。影響本實(shí)驗(yàn)的因素主要是抗體的滴度、抗原和抗體的比例。抗體的滴度要高，抗原量又要比抗體稍多，以致形成的抗原抗體復(fù)合物是溶解性的。的經(jīng)驗(yàn)指出，腎臟病變呈急性還是呈慢性，與抗體的量及抗原、抗體的相對(duì)量有直接關(guān)系。抗體量過剩易引起急性腎炎，而抗原抗體量相等時(shí)則易引起慢性腎炎。另外，在注射抗原抗體復(fù)合物前必須把網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)充分地封閉，否則就不易成功。如果在注射前用大劑量肝素，則能預(yù)防腎炎的發(fā)生。六、內(nèi)分泌疾病模型缺碘性甲狀腺腫地方性甲狀腺腫除少數(shù)地區(qū)是由食物高碘和致甲狀腺腫物質(zhì)引起外，主要病因是缺碘。該模型復(fù)制方法很多，如用人工配制的低碘飲食飼養(yǎng)動(dòng)物及用硫尿類和某些磺胺類藥物抑制甲狀腺組織的過氧化酶以阻礙甲狀腺合成。后一種方法致甲狀腺腫的機(jī)制和低碘性甲狀腺腫的發(fā)病機(jī)制相差很大，不能真實(shí)地表現(xiàn)人類甲狀腺腫的病理演變，因此在使用上受到一定限制。這里介紹后一方法。選體重的大鼠，飼以含玉米粉％、大米粉％、黃豆粉％、碳酸鈣%、氯化鈉％、以及少量維生素粉的食物。此外每周兩次飼以去離子水培養(yǎng)的麥芽或稻芽。其中糧食是購自嚴(yán)重地方甲狀腺腫病區(qū)，磨粉后12℃0烘拷24小時(shí)。氯化鈉采用分析純品,經(jīng)7、℃0烘烤12小時(shí)后使用。自由飲用電阻值Q以上的去離子水。實(shí)驗(yàn)三天后尿碘含量顯著減少，并隨著實(shí)驗(yàn)時(shí)間的延長而不斷下降。說明低碘飲食3天后大鼠即處于碘饑餓狀態(tài)。與對(duì)照組相比缺碘17天甲狀腺未見腫大，但充血顯著，呈暗紅色外觀。缺碘3、天全部甲狀腺都顯著腫大，充血更明顯。隨著缺碘時(shí)間的延長，腫大加劇，但到了127天雖然甲狀腺腫大，局部充血卻減輕。缺碘早期甲狀腺細(xì)胞增生活躍，腺組織濾泡增多，腺上皮呈高柱狀，并增生形成乳頭突入濾泡腔中，濾泡腔內(nèi)膠質(zhì)變稀薄