補體依賴的微量淋巴細胞毒試驗（CDC）淋巴細胞毒試驗概念免疫應答進行中既有非特異殺傷細胞又有特異殺傷細胞既有非特異性細胞毒分子（因子）又有特異性細胞毒因子免疫反應的結果：導致靶細胞的裂解、死亡殺傷癌細胞的方法非特異性殺傷腫瘤細胞如NK細胞，K細胞，是體內抗腫瘤的第一道防線，NK可自發殺腫瘤細胞，K細胞依賴于抗腫瘤細胞的抗體存在而發生殺腫瘤效應，體外可用細胞毒實驗方法來進行研究，通常采用51Cr釋放試驗來觀察其殺傷效應殺傷癌細胞的方法人體內特異殺腫瘤細胞為TC（或TK）殺傷效應，該細胞的特異性抗原預先致敏TC（或TK）細胞，以區別于非特異性殺傷特異性殺傷腫瘤細胞（CTL）某些淋巴因子的調節作用IFN-γ、IL-2等細胞因子來處理淋巴細胞均可大大增強NK、K、TC細胞的殺傷效應，特別是用IL-2培養癌癥患者淋巴細胞可誘發和激活LAK等殺傷細胞，經體外增殖達一定量時再回輸患者體內，可治療晚期癌癥患者殺傷癌細胞的方法為了篩選理想的癌細胞毒性物質和抑制物質如化療藥物，通常采用相應的癌細胞進行體外試驗，以尋找最佳化療藥物和適宜的藥物濃度，為臨床用藥提高依據中草藥對殺傷細胞的調節作用：許多中草藥及其提取物（如多糖或皂甙成分等）已在臨床用于治療腫瘤體外細胞培養技術證明中草藥的人參、黃芪、刺五加、茯苓等均可促進細胞產生干擾素（IFN-γ、β、α）IL-2和增強NK、K、TC細胞的殺傷效應單克隆抗體的生物導彈作用將殺腫瘤的毒性藥物結合在抗體上，在將此抗體座位導彈輸入患者體內，該抗體一旦與體內腫瘤細胞特異性結合即可發揮殺腫瘤效應，若與淋巴因子制成聯合試劑可能效果更好藥物毒性作用細胞毒試驗類型淋巴細胞對腫瘤細胞的細胞毒試驗微量細胞毒試驗（CTL）：補體介導的細胞毒抗體依賴細胞介導的細胞毒試驗（ADCC）：殺傷靶細胞無特異性NK細胞毒試驗：51Cr釋放法，K562細胞微量淋巴細胞毒試驗的由來最早為Terasaki和McCalland在1964年首先介紹的1976年美國NIH把這個方法標準化，使這一技術廣泛使用它是臟器移植中的組織配型和人白細胞分型研究中的主要方法之一試驗所有補體被稱為8屆ABC補體和8屆DR補體（第八屆國際HLA會議用補體）實驗原理抗體與淋巴細胞表面的膜抗原特異性結合后，免疫球蛋白的補體結合位點暴露。該抗原抗體復合物與補體結合而使其活化，通過一系列級聯反應，最終導致靶細胞的溶解死亡。由于死細胞膜通透性增加，可使染料（如錐蘭、伊紅等）進入細胞內，而使死細胞染色，且活細胞折光性也無改變。通過光學顯微鏡的觀察，可測得死細胞的百分率，依此來確定相應靶細胞上是否攜帶有特異性的膜抗原。補體的作用和激活途徑

細胞毒作用調理作用炎癥介質作用清除免疫復合物活化肥大細胞經典途徑旁路途徑

C3C3b

C3a活化巨噬細胞調理作用直接殺傷靶細胞C5a

C5C5b~9MBL途徑MAC實驗原理示意圖補體（兔血清）淋巴細胞+抗淋巴細胞血清+細胞溶解現象實驗原理示意圖+補體臺盼藍染液抗原與抗體結合補體依賴細胞毒實驗的應用HLA分型（HLAtyping）

可用于確定供受者間的組織相容性CD抗原的鑒定、淋巴細胞亞群分析…

12345678910ARPMI-1640RPMI-1640RPMI-1640RPMI-1640RPMI-1640BC抗淋巴細胞血清抗淋巴細胞血清抗淋巴細胞血清抗淋巴細胞血清抗淋巴細胞血清DRPMI-1640RPMI-1640RPMI-1640RPMI-1640RPMI-1640EF抗淋巴細胞血清抗淋巴細胞血清抗淋巴細胞血清抗淋巴細胞血清抗淋巴細胞血清12345678910對照孔和反應孔各加三滴補體（兔血清）RT45-60min甲組對照孔反應孔對照孔反應孔乙組對照孔和反應孔各加三滴0.4%臺盼藍RT5min吸去蓋板中的石蠟油與錐蘭溶液，鏡下觀察并判斷結果操作步驟對照孔和反應孔各加一滴淋巴細胞懸液RT（22±2℃）30min輕輕倒入10ml石蠟油，避免氣泡產生正確放置細胞反應板操作步驟選反應孔與對照孔各3個（不礙顯微鏡、互相隔開）對照孔中各加入一滴（半粒芝麻）培養液，反應孔中各加入一滴抗體各加一滴細胞懸液（軟加不交叉污染）輕輕倒入石蠟油覆蓋（勿沖移反應體系）室溫（22±2℃）作用30分鐘各加補體（兔血清）3滴（軟加不交叉污染）室溫作用4560分鐘加入錐藍（染死細胞）3滴（軟加不交叉污染）吸去石蠟油與錐蘭（以利觀察，但不吸干不吸走細胞）顯微鏡觀察并判斷結果影響因素血清、補體以及分離淋巴細胞的質量操作方法會影響結果的準確性補體依賴性細胞毒實驗的應用細胞性抗原的測定單克隆抗體的篩選和鑒定組織相容性抗原的檢查與分型（HLA分型）抗體檢測（移植前預存抗體檢測）補體依賴性細胞毒實驗臨床意義主要用于HLA血清學分型試驗基本方法是取HLA分型血清，加入被檢者淋巴細胞，在補體的參與下可以使攜帶與分型血清型相同抗原的淋巴細胞死亡，判定被檢者HLA型的一種方法檢查某種抗原或抗體存在的一種技術手段，這一技術目前主要應用于器官移植的HLA配型實驗。根據實驗結果分析供受體間HLA型別的一致性，或確定各自攜帶的HLA型別。HLA型的一致性基本決定了受體移植器官存活的可能性

實驗結果記錄與分析死細胞百分數記分意義0~101陰性（－）11~202可疑陰性（±）21~404弱陽性（＋）41~806陽性（＋＋）81~1008強陽性（＋＋＋）0無效（O）結果觀察

臺盼藍染色：如果細胞膜不完整、破裂，臺盼藍染料進入細胞，細胞變藍如果細胞膜完整，細胞不為臺盼藍染色，則為正常細胞或凋亡細胞。此方法對反映細胞膜的完整性，區別壞死細胞有意義。A.對照組B.實驗組注意事項：

臺盼藍染色后放置時間不能太長，否則出現假陽性操作步驟選反應孔與對照孔各3個（不礙顯微鏡、互相隔開）對照孔中各加入一滴（半粒芝麻）培養液，反應孔中各加入一滴抗體各加一滴細胞懸液（軟加不交叉污染）輕輕倒入石蠟油覆蓋（勿沖移反應體系）室溫（22±2℃）作用30分鐘各加補體（兔血清）3滴（軟加不交叉污染）室溫作用4560分鐘加入錐藍（染死細胞）3滴（軟加不交叉污染）