石蠟切片技術操作第1頁，共13頁，2023年，2月20日，星期六實驗目的掌握動植物材料石蠟切片的方法及要求。實驗原理見石蠟切片理論部分實驗材料小白鼠各種器官組織第2頁，共13頁，2023年，2月20日，星期六實驗方法石蠟切片技術（一）取材與固定石蠟切片技術（二）滲透與包埋石蠟切片技術（三）切片石蠟切片技術（四）染色石蠟切片技術（五）觀察總結第3頁，共13頁，2023年，2月20日，星期六1準備工作：工具、藥品、計劃等2動物的麻醉：氯仿麻醉3解剖取材4材料分割：保持樣品的完整性與代表性，考慮切片方向，實心組織大小5*5*2mm,空心細長組織10mm長。5固定：布溫氏固定液固定24h。6漂洗：70%乙醇換洗3次，每次20~60min。7保存：70%乙醇0~4℃。一、取材與固定第4頁，共13頁，2023年，2月20日，星期六二、脫水、滲透與包埋1脫水：85%乙醇→95%乙醇→100%乙醇→100%乙醇，每步30min~60min2透明：1/2乙醇＋1/2二甲苯→二甲苯→二甲苯，每步30min~60min3滲透：1/2二甲苯＋?石蠟→石蠟→石蠟，每步20min~60min，溫度62℃4包埋：將材料放入盛有石蠟的紙盒中，擺好位置（要考慮下一步的修快與切片方向），在水中冷卻5～10min.第5頁，共13頁，2023年，2月20日，星期六三、切片1修塊用單面刀片在玻璃板上修快使達到以下要求：（1）一個蠟塊含一個材料，蠟塊呈正方形或長方形，材料位于蠟塊正中央。（2）材料邊緣與蠟塊邊緣平行，各面要平直，材料邊緣與蠟塊邊緣的距離約3mm。2固著將修好塊的蠟塊用燒熱的解剖刀固著在樣品臺上。第6頁，共13頁，2023年，2月20日，星期六3切片按以下順序進行（1）將樣品臺固定在切片機樣品臂上，使切面豎直；（2）調切片厚度5～10um；（3）將切片刀用紗布蘸少許二甲苯擦凈后裝到切片機上，調刀角15～20，將刀固定好；（4）調刀距使樣品與刀口盡可能靠近；

(5)切片順時針搖動切片機速度40-60r/min；

(6)將切好的蠟帶光面向下用毛筆放到臺紙上。第7頁，共13頁，2023年，2月20日，星期六第8頁，共13頁，2023年，2月20日，星期六4貼片

(1)清洗載波片；

(2)加粘片劑，要求薄、勻；

(3)放切片，光面向下；

(4)加水于切片下面；

(5)展片將載波片放于50℃的溫臺上至切片完全展平；

(6)烤干吸掉多余水，繼續放于溫臺上至水完全干燥；5貼標簽臨時標簽，用鉛筆寫明組號、姓名。第9頁，共13頁，2023年，2月20日，星期六四、染色1脫蠟二甲苯(2)→二甲苯(1)，每步5-10min；2復水1/2乙醇+1/2二甲苯→100%乙醇(2)→100%乙醇(1)→85%乙醇→70%乙醇→50%乙醇→30%乙醇→蒸餾水,每步2min；3初染代氏蘇木精染色15min；4分化0.1%HCl脫色至變紅→0.1%NaOH至變藍；5脫水蒸餾水（3－5s）→30%乙醇→50%乙醇→70%乙醇→85%乙醇,每步2min；6復染0.5%伊紅（溶于95%乙醇）染色10~15min；7脫水透明95%乙醇(10-20s)→100%乙醇(1)→100%乙醇(2)→1/2乙醇+1/2二甲苯→二甲苯(1)→二甲苯(2)(≥3min),每步2~3min；第10頁，共13頁，2023年，2月20日，星期六8封片將材料周圍擦干凈（注意在擦的過程中材料上的二甲苯必須保證不能干，可隨時補加），加1～2滴中性樹膠，加蓋玻片（需提前洗凈擦干備用）；9貼標簽注明樣品名稱、染色方法、組號、姓名和日期；10鏡檢檢查樣品取材、切片及染色情況，熟悉樣品為下次樣品觀察做好準備；11干燥平放于展片盤中，于37℃溫箱中或自然干燥；12預習下次實驗：樣品的觀察，需提前做好預習，并準備紙、鉛筆。第11頁，共13頁，2023年，2月20日，星期六五、觀察1樣品觀察小白鼠腦；小白鼠心肌；小白鼠肝臟；小白鼠腎臟；小白鼠肺；小白鼠小腸；小白鼠肌肉；小白鼠