稀土敏化熒光法檢測動物源食品中環丙沙星藥物殘留的研究與應用

第一頁，共二十二頁。答辯內容第一章緒論第二章實驗部分第三章結論致謝第二頁，共二十二頁。第一章緒論氟喹諾酮類藥物(Fluoroquinolones，FQs)是一類十分重要的廣譜抗菌藥物，是繼磺胺類藥物之后人類在合成抗菌藥方面最重要的突破。氟喹諾酮類藥物幾乎適用于臨床常見的多種細菌感染性疾病，很多己經成為畜禽專用的抗菌藥物。其中本次實驗檢驗的環丙沙星(CPFX)是其中最常用的藥物之一。環丙沙星的結構式第三頁，共二十二頁。對人體的毒性作用導致人類病原菌耐藥性的產生對環境的污染作用獸藥殘留的危害第四頁，共二十二頁。FQs殘留的主要檢測方法

高效液相色譜法1具有靈敏度高、特異性強、定量準確、穩定性和重復性好等優點，缺點是儀器昂貴，樣品的前處理較繁瑣耗時。

2普遍適用于抗菌藥物的殘留測定，其檢測限常高于藥物的最高殘留量，不夠靈敏，因此僅能作為殘留的一種篩選方法。微生物法3操作簡便、快速和樣品容量大的優點,可使用正相或反相板,分辨率較高。缺點是樣品的前處理較繁瑣耗時。

高效薄層色譜法第五頁，共二十二頁。稀土敏化熒光法

鑭系敏化熒光：屬f→f禁戒躍遷的三價鑭系金屬如Tb3+對200-400nm紫外光的吸收相當弱，因而發光發光效率很低。但當有機配體與Tb3+離子形成配合物后，在高能射線激發下，配體吸收能量后有效的傳遞給Tb3+從而發射出鑭系離子的特征熒光。

鑭系敏化發光過程中的光的吸收和發射可簡單表示如下：

L+hν→L*（配體吸收激發光能）L*+Ln3+→L+Ln3+*（能量轉移）Ln3+*→Ln3++hν（發射Ln3+特征熒光）第六頁，共二十二頁。稀土敏化熒光法的優點Stokes位移大，克服了因激發和發射光譜重疊帶來的誤差1發射光譜譜帶窄，特異性強

2熒光壽命長，比普通熒光物質高幾個數量級

3熒光強度大，可提高測定的靈敏度

4熒光穩定，受外界影響少。

5第七頁，共二十二頁。第二章實驗部分雞胗購自虹橋菜市場七氧化四鋱Tb4O7（優級純）環丙沙星標準品C17H18FN3O3（分析純）Cary100紫外-可見分光光度計920穩態熒光光譜儀970CRT型熒光儀試驗材料與儀器第八頁，共二十二頁。實驗部分熒光光譜測定Tb3+離子濃度對于實驗體系的影響繪制標準曲線計算回歸方程樣品的測定

結論pH值對于實驗體系的影響體系激發波長的選擇方法回收率的測定

第九頁，共二十二頁。體系激發波長的選擇271nm320nm1.0×10-5mol/L環丙沙星的紫外可見吸收光譜（Cary100紫外-可見分光光度計，美國瓦里安公司）第十頁，共二十二頁。熒光光譜測定490nm545nm588nm621nm435nm環丙沙星和環丙沙星-鋱離子配合物的熒光光譜（920穩態熒光光譜儀，英國愛丁堡公司）CPFX：1.0×10-5mol/L；Tb3+：1.0×10-3mol/L；pH：6.0

第十一頁，共二十二頁。pH值對于實驗體系的影響發射波長555nm下pH對CPFX－Tb3+配合物體系的影響（970CRT型熒光儀，上海三科儀器有限公司）CPFX：1.0×10-5mol/L；Tb3+：1.0×10-3mol/L第十二頁，共二十二頁。Tb3+濃度對于實驗體系的影響Tb3+濃度的影響（970CRT型熒光儀，上海三科儀器有限公司）CPFX：1.0×10-5mol/L；pH：6.4

第十三頁，共二十二頁。標準曲線與回歸方程Tb3+：1.0×10-3mol/L；pH：6.4CPFX濃度在5.0×10-7mol/L～1.0×10-5mol/L范圍內線性關系良好。第十四頁，共二十二頁。樣品的處理振蕩離心上清液樣品提取液清洗儀器振蕩離心樣品樣品提取液混勻靜置下清液待用正己烷上清液第十五頁，共二十二頁。樣品的測定樣品-Tb3+熒光光譜（920穩態熒光光譜儀，英國愛丁堡公司）Tb3+：1.0×10-3mol/L；pH：6.4第十六頁，共二十二頁。方法回收率的測定

加入量（1×10-5mol/L）測定量（1×10-5mol/L）回收率（%）平均回收率（%）相對標準差（%）Added（1×10-5mol/L）Measured（1×10-5mol/L）Recover（%）AverageRecover（%）RSD2.001.73486.780.22.444.003.13078.26.004.93882.38.005.88073.5第十七頁，共二十二頁。關于儀器的差異490nm545nm588nm621nm435nm445nm436nm555nm482nm—CPFX—CPFX—Tb3+CPFX（1.0×10-5mol/L）CPFX（1.0×10-5mol/L）—Tb3+（1.0×10-3mol/L）920穩態熒光光譜儀英國愛丁堡公司970CRT型熒光儀上海三科儀器有限公司第十八頁，共二十二頁。結論本文利用Tb3+離子與氟喹諾酮藥物形成配合物后產生的敏化熒光來檢測動物源食品中的環丙沙星含量，建立了Tb3+增敏熒光光度法檢測雞肉組織中的環丙沙星的方法。

本實驗樣品前處理簡單、快速，實驗過程操作方便、快捷、經濟，可以滿足快速判斷CPFX的殘留量超標與否的要求，為CPFX藥物殘留分析提供了極為經濟的快速篩選方法。第十九頁，共二十二頁。三、致謝

本論文是在孫春燕副教授的悉心指導下完成的。導師扎實的理論基礎，嚴謹的學風以及精益求精的科研精神都是我學習的榜樣。導師不僅在學習上給予我諄諄教誨，而且在生活的各個方面都給與了我無微不至的關懷和幫助。在此，謹向我的恩師孫春燕副教授致以最誠摯的感謝和祝福。

我還要感謝在整個實驗過程中給予我很多關心的盧靜老師，袁媛老師，葉海清老師，王海波老師，卜秀娟老師，李鳳芝老師等，感謝你們對我一直以來的的幫助和指導！第二十頁，共二十二頁。謝謝！第二十一頁，共二十二頁。內容總結稀土敏化熒光法檢測動物源食品中環丙沙星藥物殘留的研究與應用。第二章實驗部分。第三章結論。氟喹諾酮類藥物幾乎適用于臨床常見的多種細菌感染性疾病，很多己經成為畜禽專用的抗菌藥物。具有靈敏度高、特異性強、定量準確、穩定性和重復性好等優點，缺點是儀器昂貴，樣品的前處理較繁瑣耗時。操作簡便、快速和樣品容量大的優點,可使用