第二十二章

免疫學檢測技術的基本原理1第一節(jié)體外抗原抗體反應（血清學反應）21、高度特異性：

抗原抗體反應的特點：32、表面化學基團之間的可逆結合：

結合：非共價鍵

氫鍵,靜電引力，范德華力,疏水鍵

解離：抗體親和力

受溫度、酸堿度和離子強度的影響

4親和力（affinity）

YKeq=104Affinity5AbAgHighAffinityAbAgLowAffinity親和力6YYYYY1010AvidityY106Avidity親合力7AbexcessAgexcessEquivalence–Latticeformation3、適宜的抗原抗體濃度和比例84、抗原抗體反應的兩個階段

抗原抗體特異性結合階段可見反應階段

9抗原抗體反應的影響因素：電解質溫度:37℃酸堿度:pH6–8之間10

第二節(jié)

檢測抗原和抗體的體外實驗

11檢測抗原或抗體的方法：凝集反應：顆粒性抗原與相應抗體在電解質存在的

條件下結合，出現(xiàn)肉眼可見的凝集團塊直接凝集反應：顆粒性抗原+相應抗體

間接凝集反應：可溶性抗原+顆粒載體+相應抗體121/21/41/81/161/321/641/1281/2561/512直接凝集反應13YYY+間接凝集反應14沉淀反應：可溶性抗原與相應抗體結合出現(xiàn)肉眼可見的沉淀物。速率散射比濁法/免疫比濁法：可檢測樣品中多種分子，

并進行精確定量單向瓊脂擴散：可用于檢測血清中Ig或其他可溶性抗原的定量測定雙向瓊脂擴散：抗原抗體的定性分析免疫電泳：分析樣品的成分及其性質，常用于血清蛋白的組分分析15AgConcentrationDiameter2AgAgAgAgAbingel單向瓊脂擴散16雙向瓊脂擴散17補體參加的反應原理：抗體+紅細胞

補體

紅細胞裂解1819免疫標記技術

將抗原抗體反應與標記技術結合，提高了抗原抗體反應的靈敏度，可定性、定量、定位。20酶免疫測定法（enzymeimmunoassay,EIA)

酶標記抗體進行的抗原抗體反應

酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)：

（enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA)

將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面，使抗原抗體反

應在固相表面進行。它將抗原抗體反應的特異性與酶的高

效催化作用相結合，通過酶作用于底物后顯色來判定結果。

直接法間接法雙抗體夾心法2122雙抗體夾心法（sandwichELISA)23免疫熒光法：熒光素與抗體連接熒光抗體直接免疫熒光：熒光素標記的抗體直接作標本染色

間接免疫熒光：一抗與標本中的抗原結合，再用熒光素標記的二抗染色。既可檢測抗原，也可檢測抗體。24AgYFluorochromeLabeledAbTissueSection直接免疫熒光25AgYYFluorochromeLabeledAnti-IgTissueSectionUnlabeledAb間接免疫熒光26

放射免疫測定法：用放射性核素標記抗原或抗體進行的免疫測定

化學發(fā)光免疫技術：將化學發(fā)光分析和免疫反應相結合免疫膠體金技術：用膠體金顆粒標記抗體或抗原，以測未知抗原或抗體的方法。27免疫印跡技術（Westernblotting)28轉膜2930第三節(jié)免疫細胞功能的檢測31免疫細胞的分離與類型鑒定外周血單個核細胞的分離：密度梯度離心

淋巴細胞及其亞群的分離：磁珠分離：抗體與磁珠交聯(lián)流式細胞術（FACS）

32Cytofluorimetry33磁珠分離法34免疫細胞功能測定：T細胞功能測定B細胞功能測定35T細胞功能測定T細胞增殖試驗細胞毒試驗細胞因子檢測遲發(fā)型超敏反應(DTH)的檢測36淋巴細胞轉化37殺傷實驗38產(chǎn)生細胞因子的細胞頻數(shù)的檢測：

ELISPOTAssay3940遲發(fā)型超敏反應的檢測DTH(Delayed-TypeHypersensitivity)41檢測抗原肽特異的T細胞頻數(shù)---Tetramer(四聚體)Biotin42B細胞功能測定B細胞增殖試驗抗體形成細胞測定:溶血空斑試驗43第二十三章疫苗及預防接種44第一節(jié)免疫預防

特異性免疫的獲得：自然免疫和人工免疫人工免疫：

人工主動免疫

人工被動免疫45

種類：抗毒素，免疫球蛋白，細胞因子與單克隆抗體人工主動免疫（artificialpassiveimmunization)

用疫苗接種機體使之產(chǎn)生特異性免疫,從而預防感染的措

施。

人工被動免疫（artificialactiveimmunization)

給人體注射含特異性抗體的免疫血清或細胞因子等制劑,

以治療或緊急預防感染的措施。46EdwardJenner1749-18231796-Localmilkmaid,SarahNelmes,diagnosedwithcowpox.Jennerscratchedmaterialfrompocksontothearmof8-year-oldJamesPhipps.Showedmildsymptoms&recovered.Sixweekslater,JennerinoculatedJameswithsmallpox–hedevelopednosymptomsofdisease!疫苗的起源47EdwardJennerinoculatingJamesPhippswithcowpox（1796）4849天花的流行情況：50Theprinciplebehindthesmallpoxvaccine51安全：滅活疫苗應徹底滅活，避免無關蛋白和毒素污染；活疫苗無回復突變，無致癌性。有效:

疫苗具有很強的免疫原性，在大多數(shù)人引起保護性免疫。保護性免疫的類型免疫記憶

實用：接種程序簡化，價格低廉……疫苗的基本要求:52疫苗種類：

現(xiàn)代疫苗種類：

減毒活疫苗：脊髓灰質炎、麻疹、風疹、腮腺炎疫苗

滅活疫苗（死疫苗）：狂犬病、傷寒、流感疫苗

亞單位疫苗：有效免疫原成分制成的疫苗，如乙型肝炎病毒表面抗原制成的乙型肝炎疫苗

53類毒素疫苗：細菌的外毒素經(jīng)0.3%-0.4%甲醛處理

白喉類毒素、破傷風類毒素疫苗結合疫苗：細菌夾膜多糖+白喉類毒素（腦膜炎球菌、肺炎球菌疫苗已獲準使用）聯(lián)合疫苗：白百破三聯(lián)疫苗重組載體疫苗：病毒載體疫苗54疫苗的現(xiàn)狀：常規(guī)使用的疫苗的成功率：

脊髓灰質炎、麻疹、風疹、腮腺炎疫苗

BCG

百日咳疫苗55

年齡疫苗種類基礎接種

出生卡介苗乙型肝炎疫苗

1個月乙型肝炎第二針

2個月小兒麻痹疫苗初服

3個月小兒麻痹疫苗復服，百白破第一針

4個月小兒麻痹疫苗復服，百白破第二針

5個月百白破第三針

6個月乙型肝炎第三針流腦多糖疫苗第一針（到6月齡后12月接種

8個月麻疹疫苗初種

1歲乙腦疫苗免疫2針，間隔7-10天（到1歲后5月份接種）加強接種

1歲半百白破加強1針，麻疹疫苗復種，小兒麻痹疫苗加服，流腦多糖疫苗第二針。

2歲乙腦疫苗加強1針（到2歲后5月份接種）

3歲乙腦疫苗加強1針(到3歲后5月份接種)

4歲小兒麻痹疫苗加強1次

5歲百白破加強1針,麻疹疫苗復種,乙腦疫苗加強1針,卡介苗復種我國計劃免疫程序56許多疾病無有效疫苗：

病毒：HIV，皰疹病毒細菌：葡萄球菌，A組鏈球菌真菌：假絲酵母原生動物：瘧疾，利什曼病

蠕蟲感染：血吸蟲病57新疫苗的研制合成肽疫苗：生產(chǎn)方便，安全，多價疫苗DNA疫苗：用編碼有效免疫原的基因與細菌質粒構

建重組體直接免疫機體。主要