中科院612生物化學與分子生物學2009年部分真題及參考答案一、名詞解釋（5題20分）1.綠色熒光蛋白：最初從水母體內發現的一種發光蛋白，含有發光基團，在不同物種中均能發出穩定的熒光，其基因是常用的報告基因。2.RNA編輯：是指mRNA在轉錄后通過插入、缺失、堿基替換或者變更剪接途徑以擴大或改變模板DNA的遺傳信息，從而表達出氨基酸序列不同的多種蛋白質的過程。3.必需脂肪酸：必需脂肪酸是指機體生命活動必不可少，但機體自身又不能合成，必需由食物供給的多不飽和脂肪酸。4.組蛋白修飾：組蛋白參與基因表達調控的一種重要方式，主要的類型有磷酸化、乙酰化、甲基化等。5.…二、選擇題（20題20分）1.GST－PULLDOWN用于蛋白質之間的相互反應2.綠色熒光蛋白需要Ca2+3.反向PCR求未知序列三、判斷題（30題30分）四、簡答題（6題30分）1.魚藤酮，抗霉素A，CO抑制呼吸鏈部位答：魚藤酮能夠抑制NADH-CoQ氧化還原酶的活性；抗霉素A能抑制復合物=3\*ROMANIII的活性；co能夠復合物=4\*ROMANIV里的電子傳遞。2.泛素化降解3個步驟答：第一步泛素的羧基端通過硫脂鍵同泛素活化酶偶聯。第二步：泛素轉接到泛素攜帶蛋白的硫基上，同時釋放泛素活化酶（E1）；第三步：泛素-蛋白鏈接酶（E2）催化活化的泛素從泛素攜帶蛋白轉移并與被選定降解的靶蛋白的賴氨酸的氨基形成酰胺鍵。 3.主動運輸的特點答：（1）逆濃度梯度進行運輸（2）需要能量或與能量釋放的過程偶聯（3）一般需要載體蛋白4.蛋白質化學修飾答：詳細介紹酶的共價修飾以及組蛋白的化學修飾，如其方式和意義。5.凱式定氮法的原理，紫外吸收測蛋白質的原理答:基礎知識，詳見教材。6.酶活力，比活力答：酶的活力又稱酶活性，是指酶催化一定化學反應的能力，酶活性的高低是研究酶的特性、進行酶制劑生產和應用是的一項不可缺少的指標。比活力又稱比活性，用來表示酶的純度，指每毫克蛋白質所具有的活性，用“活力單位數/每毫克蛋白質”來表示。五、論述題（5題50分）1.試述啟動子，增強子，沉默子，絕緣子的概念，功能和它們的相互作用。答：啟動子是指基因編碼區上游能夠與RNA聚合酶特異性識別結合的DNA序列，它主要的功能是與RNA聚合酶結合，啟動轉錄合成RNA。增強子是指能夠增強其上游或下游基因轉錄的DNA序列，主要的功能是與其特異性反式作用因子相互作用，增強基因的轉錄效率。沉默子為負控元件，能抑制上游或下游基因轉錄的DNA序列。當其結合特異蛋白質因子時能對基因的轉錄起阻遏的作用。絕緣子長約幾百個核苷酸對，是通常位于啟動子同正調控元件(增強子)或負調控因子(為異染色質)之間的一種調控序列。絕緣子本身對基因的表達既沒有正效應，也沒有負效應，其作用只是不讓其他調控元件對基因的活化效應或失活效應發生作用。2.什么是脂肪動員？為什么人們會得脂肪肝？答：儲存在脂肪組織中的脂肪，被脂肪酶逐步水解為游離脂肪酸和甘油，經血液運輸到其他組織和細胞，以供氧化利用，該過程被稱為脂肪動員。脂類代謝障礙是產生脂肪肝的原因：(1)食物中脂肪過量、高脂血癥及脂肪組織動員增加(饑餓、創傷及糖尿病)，游離脂肪酸(FFA)輸送入肝增多，為肝內三酰甘油合成提供大量前體。(2)食物中缺乏必需脂肪酸，急性酒精中毒、急性蘇氨酸缺乏、攝入大劑量巴比妥鹽等使肝細胞內三酰甘油及游離脂酸合成增加。(3)熱量攝入過高，從糖類轉化為三酰甘油增多。(4)肝細胞內游離脂酸清除減少，過量飲酒、膽堿缺乏、四氯化碳和乙硫氨酸中毒等均可抑制肝內游離脂酸的氧化。乙硫氨酸中毒及膽堿缺乏可阻斷磷脂合成。(5)VLDL合成或分泌障礙等一個或多個環節，破壞脂肪組織細胞、血液及肝細胞之間脂肪代謝的動態平衡，引起肝細胞三酰甘油的合成與分泌之間失去平衡，最終導致中性脂肪為主的脂質在肝細胞內過度沉積形成脂肪腫。3.敘述核酸分子雜交的分子基礎及其在分子生物學中的應用。答：核酸分子雜交的分子基礎是堿基序列互補的兩段單鏈核酸分子在適當的條件下可以根據堿基互補配對的原則重新形成雙鏈分子結構，形成的雙鏈分子稱作雜交分子。核酸分子雜交作為一項基本技術,已應用于核酸結構與功能研究的各個方面。核酸分子雜交具有很高的靈敏度和高度的特異性,因而該技術在分子生物學領域中已廣泛地使用于克隆基因的篩選、酶切圖譜的制作、基因組中特定基因序列的定性、定量檢測和疾病的診斷等方面。因而它不僅在分子生物學領域中具有廣泛地應用,而且在臨床診斷上的應用也日趨增多4.敘述兩種或三種用于研究蛋白質相互作用的實驗方法及原理。答案略。什么是酶的活性部位，怎么解釋酶作用的專一性？答：酶在催化過程中需要具有完整的結構，完成的酶分子是由活性部位和底物結合部位構成的。真正起到催化作用的只是酶蛋白分子中很小的一部分，該一小部分稱為酶的活性部位。酶在催化生