骨髓細胞化學染色

細胞化學染色是以細胞形態學為基礎，利用化學反應原理，對細胞中的酶類、脂類、糖類及蛋白質等化學物質進行定性、定位或半定量分析的方法。用于血液系統疾病的診斷、鑒別診斷及療效判斷；用于白血病細胞類型的判斷。骨髓細胞化學染色

細胞化學染色是以細胞形態學為基礎，利用化學1基本步驟1.固定:目的是保持細胞固有結構和化學成份不變，分蒸汽固定和液體固定。2.顯示:通過化學反應顯示被測物質，有偶氮偶聯法，聯苯胺法，金屬沉淀法等。3.復染：作為背景染色，使反應的細胞結構能更清楚顯示出來。基本步驟1.固定:目的是保持細胞固有結構和化學成份不變，分2

[原理]

機體多余的鐵以鐵蛋白及含鐵血黃素的形式儲存。這些鐵與低鐵氰化鉀在酸性溶液中發生反應而呈藍色。鐵染色

[原理]

機體多余的鐵以鐵蛋白及含鐵血黃素3[試劑]40g/l亞鐵氰化鉀溶液。4%鹽酸（38%濃鹽酸40ml，小心倒入340ml冷蒸餾水中，混勻）20g/l伊紅溶液。甲醛溶液。[試劑]40g/l亞鐵氰化鉀溶液。4骨髓細胞化學染色課件5骨髓細胞化學染色課件6細胞外鐵陽性（++）細胞外鐵陽性（++）7（2）細胞內鐵：油鏡下計數100個有核紅細胞，記錄陽性細胞（胞漿中有藍色顆粒即鐵粒幼細胞）的百分率。同時注意有無環形鐵粒幼細胞（6顆以上，并繞核1/2以上者）。（2）細胞內鐵：油鏡下計數100個有核紅細胞，記錄陽性細胞（8骨髓細胞化學染色課件9骨髓細胞化學染色課件10環形鐵粒幼紅細胞環形鐵粒幼紅細胞111.細胞內鐵：計算100個中幼紅細胞、晚幼紅細胞，計數陽性率，正常值20-45%；鐵顆粒1-5粒，一般不超過10粒。

2.細胞外鐵：觀察骨髓小粒中巨噬細胞胞漿內藍色顆粒。正常為（+）或（++）。

[參考值]

1.細胞內鐵：計算100個中幼紅細胞、晚幼紅細胞，計數陽性率12

[臨床意義]

鐵染色主要用于缺鐵性貧血與鐵粒幼細胞性貧血的診斷，也是指導鐵劑治療的一個靈敏而可靠的指標。特別是鐵粒幼細胞貧血形成特有的環形鐵粒幼細胞，也易與其他類型貧血區別。

[臨床意義]

鐵染色主要用于缺鐵性貧血與鐵粒幼細13中性粒細胞堿性磷酸酶

(NAP)染色(鈣-鈷法）

[原理]

當細胞內的NAP活性存在時，在pH為9.2～9.5的堿性條件下，它可將作用液中的基質β-甘油磷酸鈉水解，釋出磷酸，進而與作用液中的鈣離子結合，成為磷酸鈣沉淀，再經過硝酸鈷和硫化胺的作用，生成不溶性硫化鈷，呈黑色沉淀定位于胞漿。中性粒細胞堿性磷酸酶

(NAP)染色(鈣-鈷法）

[原理]14NAP染色測定(偶氮偶聯法）[檢測原理]

血細胞內的堿性磷酸酶（NAP）在堿性環境下，水解α-磷酸萘酚鈉，產生α-萘酚。后者與重氮試劑偶聯形成有色沉淀物，沉淀物的顯色深淺與NAP活性成正比。[試劑盒組成]1.NAP固定液：1瓶×52.NAPI液(α-磷酸萘酚鈉)：1瓶×53.NAPII(堅牢藍B+tris-HCl)液:1瓶×54.蘇木素復染液:1瓶×5NAP染色測定(偶氮偶聯法）[檢測原理]15[方法]1.新鮮涂片滴加固定液(4°C)30秒,水洗待干。2.將I液置入II液混合成為基質液。將涂片置入后，37°C放置30分鐘，流水沖洗數分鐘，取出待干。3.蘇木素復染1-2分鐘，水洗，待干，鏡檢。4.結果顯示：陽性——細胞內出現暗紅色沉淀物，定位于胞質。陰性——細胞內無紅色沉淀物。[方法]1.新鮮涂片滴加固定液(4°C)30秒,水洗待干。16(-)(-)17(+)(+)18(++)(++)19(+++)(+++)20(++++)(++++)21(+++)、（+）、（++++）(+++)、（+）、（++++）22[積分計算]在油鏡下計數100個成熟中性粒細胞，包括桿狀核和分葉核粒細胞，結果分級為（-）、（+）、（++）、（+++）、（++++），分別為0-4分，所有細胞分值之和即為積分值，陽性細胞之和為陽性率。正常范圍：10-100分，陽性率10-50%[積分計算]在油鏡下計數100個成熟中性粒細胞，包括桿狀核和23[注意事項]1.標本宜新鮮，若不能及時測定可先用固定液處理后，可保存數天。2.基質液配制后要及時應用，以免失效或降低陽性強度。3.基質液為一次性使用，配制后不能反復應用。[注意事項]1.標本宜新鮮，若不能及時測定可先用固定液處理后24[臨床意義]1.各種急、慢性粒細胞性白血病，其NAP積分可降低甚至為零。2.各種炎癥（細菌性），手術后，灼傷等NAP積分均可升高。3.NAP活性對下列疾病有鑒別診斷價值：1）.慢性粒細胞白血病與類白血病反應的鑒別2）.慢性粒細胞白血病與其他骨髓增生性疾病的鑒別[臨床意義]1.各種急、慢性粒細胞性白血病，其NAP積分可降253）PNH與再生障礙性貧血的鑒別4）惡性組織細胞病與反應性組織細胞增生癥的鑒別5）真性紅細胞增多癥與繼發性紅細胞增多癥的鑒別6）區別細菌性感染和病毒性感染3）PNH與再生障礙性貧血的鑒別26

粒細胞和部分單核細胞胞漿中存在過氧化酶，它可將底物(H2O2)分解產生出新生態氧，進而使無色的聯苯胺氧化為藍色的聯苯胺藍，后者與亞硝基鐵氰化鈉結合，形成穩定的藍色物質。

過氧化物酶(POX)染色[原理]

粒細胞和部分單核細胞胞漿中存在過氧化酶，它可將底物(H2O27陽性的中性粒細胞陽性的中性粒細胞28陽性的原始粒細胞和陰性的淋巴細胞陽性的原始粒細胞和陰性的淋巴細胞29陽性的粒細胞和陰性的巨核細胞陽性的粒細胞和陰性的巨核細胞30[臨床意義]

用于鑒別急性粒細胞白血病、急性單核細胞白血病、急性淋巴細胞白血病。POX主要存在于粒系細胞中，細胞越成熟，其反應越強。原始單核細胞呈陰性，幼稚單核細胞和成熟單核細胞呈弱陽性反應。淋巴系、巨核系、紅細胞系各階段細胞均呈陰性反應。

[臨床意義]用于鑒別急性粒細胞白血病、急性單核細胞白血病31酸性磷酸酶(ACP)染色

[原理]

在酸性條件下(pH值4.9)，磷酸酶將作用液中的基質(甘油磷酸鈉)水解，產生磷酸，進而與鉛作用生成磷酸鉛沉淀于細胞酶活性存在處，然后與硫化銨作用，生成黑色硫化鉛沉淀。

酸性磷酸酶(ACP)染色

[原理]

在酸性條件下(32[臨床意義]1.網狀細胞、吞噬細胞、組織細胞、粒細胞和單核細胞此酶呈陽性反應。2.毛細胞白血病時，毛細胞呈陽性反應，且不為L-酒石酸所抑制。3.戈謝細胞ACP染色陽性，而尼曼-匹克細胞呈陰性。[臨床意義]1.網狀細胞、吞噬細胞、組織細胞、粒細胞和單核細33特異性酯酶(SE)染色

[原理]

氯醋酸AS-D萘酚酯酶為粒細胞所特有，故稱特異性酯酶，可將基質中的氯醋酸AS-D萘酚水解而產生萘酚AS-D，后者與重氮鹽偶聯生成不溶性有色沉淀定位于胞漿中。

特異性酯酶(SE)染色

[原理]

氯醋酸AS34[臨床意義]

1.正常血細胞反應：SE在分化好的原始粒細胞可呈弱陽性反應，早幼粒細胞呈強陽性反應，SE活性不隨粒細胞的成熟而增強。單核細胞呈陰性或弱陽性反應，其他細胞均呈陰性反應。

[臨床意義]

1.正常血細胞反應：SE在分化好的原35

2.急性白血病類型的鑒別：急性粒細胞白血病時，原始粒細胞和早幼粒細胞的SE活性顯著增強；急性單核細胞白血病、急性淋巴細胞白血病、急性巨核細胞白血病時，其原始、幼稚細胞均呈陰性反應。

2.急性白血病類型的鑒別：急性粒細胞白血病時，原始粒細胞和36非特異性酯酶(NSE)染色

[原理]

α-醋酸萘酚酯酶存在于單核細胞粒細胞及淋巴細胞中，故稱為非特異性酯酶。NSE水解基質液中α-醋酸萘酯而產生α-萘酚，后者與重氮鹽偶聯生成不溶性有色沉淀定位于胞質中。

非特異性酯酶(NSE)染色

[原理]

α-醋37陽性的原始單核細胞陽性的原始單核細胞38被NaF抑制被NaF抑制39被NaF抑制的原單細胞和不抑制的中幼粒細胞被NaF抑制的原單細胞和不抑制的中幼粒細胞40[臨床意義]

1.正常血細胞反應：NSE主要存在于單核細胞系，從原單細胞到成熟單核細胞逐漸增強。陽性反應能被NaF抑制，粒細胞一般呈陰性反應。

[臨床意義]

1.正常血細胞反應：NSE主要存在于單41

2.急性白血病類型的鑒別：急性單核細胞白血病時，NSE呈強陽性或陽性反應，但NSE活性能被氟化鈉所抑制，稱為氟化鈉抑制試驗陽性。2.急性白血病類型的鑒別：急性單核細胞白血病時，NSE呈強42急性粒細胞白血病時，有部分病例是弱陽性或陽性反應，但其酶活性不被氟化鈉抑制，即氟化鈉抑制試驗陰性。故本試驗可以用于急性單核細胞白血病的診斷及其與急性粒細胞白血病的鑒別。

急性粒細胞白血病時，有部分病例是弱陽性或陽性反應，但其酶活性43糖原染色（又稱過碘酸-雪夫反應，PAS反應）

[原理]

含有乙二醇基的糖類，在過碘酸的作用下，經氧化而產生雙醛基，醛基進而與堿性復紅液(Schiff液)結合，使無色液體變成紫紅色染料，并沉著于含有糖原的細胞或組織結構上。

糖原染色（又稱過碘酸-雪夫反應，PAS反應）

[原理44

正常血細胞中中性粒細胞、單核細胞、巨核細胞及少數淋巴細胞呈陽性反應。

1.紅細胞系列的糖原反應及其診斷意義：正常人、再生障礙性貧血、巨幼紅細胞貧血的幼稚紅細胞均無陽性反應

[臨床意義]

正常血細胞中中性粒細胞、單核細胞、巨核細胞及少45巨幼貧的PAS染色幼紅細胞呈陰性

巨幼貧的PAS染色幼紅細胞呈陰性

46AML-M6PAS染色

（幼紅細胞呈顆粒狀陽性）AML-M6PAS染色

（幼紅細胞呈顆粒狀陽性）47溶血性貧血及MDS偶而有弱陽性反應。紅白血病、缺鐵性貧血、地中海貧血的幼稚紅細胞呈陽性反應。

溶血性貧血及MDS偶而有弱陽性反應。紅白血病、缺鐵性貧血、地482.急性粒細胞白血病的原始及早幼粒細胞的糖原一般呈陽性反應，但早幼粒胞漿內多呈彌漫性著色顆粒；急性淋巴細胞白血病有l/5～1/2呈陽性反應，并可見紅色粗大顆粒，形成環狀。2.急性粒細胞白血病的原始及早幼粒細胞的糖原一般呈陽性反應，49ALLPAS染色陽性（桿狀核粒細胞也陽性）

原始淋巴細胞ALLPAS染色陽性（桿狀核粒細胞也陽性）50淋巴瘤細胞白血病及慢性淋巴細胞白血病，巨核細胞白血病的原始巨核細胞、幼稚巨核細胞，特別是小巨核細胞的糖原呈強陽性反應，彌漫于胞漿內。

淋巴瘤細胞白血病及慢性淋巴細胞白血病，巨核細胞白血病的原始巨51骨髓細胞化學染色

細胞化學染色是以細胞形態學為基礎，利用化學反應原理，對細胞中的酶類、脂類、糖類及蛋白質等化學物質進行定性、定位或半定量分析的方法。用于血液系統疾病的診斷、鑒別診斷及療效判斷；用于白血病細胞類型的判斷。骨髓細胞化學染色

細胞化學染色是以細胞形態學為基礎，利用化學52基本步驟1.固定:目的是保持細胞固有結構和化學成份不變，分蒸汽固定和液體固定。2.顯示:通過化學反應顯示被測物質，有偶氮偶聯法，聯苯胺法，金屬沉淀法等。3.復染：作為背景染色，使反應的細胞結構能更清楚顯示出來。基本步驟1.固定:目的是保持細胞固有結構和化學成份不變，分53

[原理]

機體多余的鐵以鐵蛋白及含鐵血黃素的形式儲存。這些鐵與低鐵氰化鉀在酸性溶液中發生反應而呈藍色。鐵染色

[原理]

機體多余的鐵以鐵蛋白及含鐵血黃素54[試劑]40g/l亞鐵氰化鉀溶液。4%鹽酸（38%濃鹽酸40ml，小心倒入340ml冷蒸餾水中，混勻）20g/l伊紅溶液。甲醛溶液。[試劑]40g/l亞鐵氰化鉀溶液。55骨髓細胞化學染色課件56骨髓細胞化學染色課件57細胞外鐵陽性（++）細胞外鐵陽性（++）58（2）細胞內鐵：油鏡下計數100個有核紅細胞，記錄陽性細胞（胞漿中有藍色顆粒即鐵粒幼細胞）的百分率。同時注意有無環形鐵粒幼細胞（6顆以上，并繞核1/2以上者）。（2）細胞內鐵：油鏡下計數100個有核紅細胞，記錄陽性細胞（59骨髓細胞化學染色課件60骨髓細胞化學染色課件61環形鐵粒幼紅細胞環形鐵粒幼紅細胞621.細胞內鐵：計算100個中幼紅細胞、晚幼紅細胞，計數陽性率，正常值20-45%；鐵顆粒1-5粒，一般不超過10粒。

2.細胞外鐵：觀察骨髓小粒中巨噬細胞胞漿內藍色顆粒。正常為（+）或（++）。

[參考值]

1.細胞內鐵：計算100個中幼紅細胞、晚幼紅細胞，計數陽性率63

[臨床意義]

鐵染色主要用于缺鐵性貧血與鐵粒幼細胞性貧血的診斷，也是指導鐵劑治療的一個靈敏而可靠的指標。特別是鐵粒幼細胞貧血形成特有的環形鐵粒幼細胞，也易與其他類型貧血區別。

[臨床意義]

鐵染色主要用于缺鐵性貧血與鐵粒幼細64中性粒細胞堿性磷酸酶

(NAP)染色(鈣-鈷法）

[原理]

當細胞內的NAP活性存在時，在pH為9.2～9.5的堿性條件下，它可將作用液中的基質β-甘油磷酸鈉水解，釋出磷酸，進而與作用液中的鈣離子結合，成為磷酸鈣沉淀，再經過硝酸鈷和硫化胺的作用，生成不溶性硫化鈷，呈黑色沉淀定位于胞漿。中性粒細胞堿性磷酸酶

(NAP)染色(鈣-鈷法）

[原理]65NAP染色測定(偶氮偶聯法）[檢測原理]

血細胞內的堿性磷酸酶（NAP）在堿性環境下，水解α-磷酸萘酚鈉，產生α-萘酚。后者與重氮試劑偶聯形成有色沉淀物，沉淀物的顯色深淺與NAP活性成正比。[試劑盒組成]1.NAP固定液：1瓶×52.NAPI液(α-磷酸萘酚鈉)：1瓶×53.NAPII(堅牢藍B+tris-HCl)液:1瓶×54.蘇木素復染液:1瓶×5NAP染色測定(偶氮偶聯法）[檢測原理]66[方法]1.新鮮涂片滴加固定液(4°C)30秒,水洗待干。2.將I液置入II液混合成為基質液。將涂片置入后，37°C放置30分鐘，流水沖洗數分鐘，取出待干。3.蘇木素復染1-2分鐘，水洗，待干，鏡檢。4.結果顯示：陽性——細胞內出現暗紅色沉淀物，定位于胞質。陰性——細胞內無紅色沉淀物。[方法]1.新鮮涂片滴加固定液(4°C)30秒,水洗待干。67(-)(-)68(+)(+)69(++)(++)70(+++)(+++)71(++++)(++++)72(+++)、（+）、（++++）(+++)、（+）、（++++）73[積分計算]在油鏡下計數100個成熟中性粒細胞，包括桿狀核和分葉核粒細胞，結果分級為（-）、（+）、（++）、（+++）、（++++），分別為0-4分，所有細胞分值之和即為積分值，陽性細胞之和為陽性率。正常范圍：10-100分，陽性率10-50%[積分計算]在油鏡下計數100個成熟中性粒細胞，包括桿狀核和74[注意事項]1.標本宜新鮮，若不能及時測定可先用固定液處理后，可保存數天。2.基質液配制后要及時應用，以免失效或降低陽性強度。3.基質液為一次性使用，配制后不能反復應用。[注意事項]1.標本宜新鮮，若不能及時測定可先用固定液處理后75[臨床意義]1.各種急、慢性粒細胞性白血病，其NAP積分可降低甚至為零。2.各種炎癥（細菌性），手術后，灼傷等NAP積分均可升高。3.NAP活性對下列疾病有鑒別診斷價值：1）.慢性粒細胞白血病與類白血病反應的鑒別2）.慢性粒細胞白血病與其他骨髓增生性疾病的鑒別[臨床意義]1.各種急、慢性粒細胞性白血病，其NAP積分可降763）PNH與再生障礙性貧血的鑒別4）惡性組織細胞病與反應性組織細胞增生癥的鑒別5）真性紅細胞增多癥與繼發性紅細胞增多癥的鑒別6）區別細菌性感染和病毒性感染3）PNH與再生障礙性貧血的鑒別77

粒細胞和部分單核細胞胞漿中存在過氧化酶，它可將底物(H2O2)分解產生出新生態氧，進而使無色的聯苯胺氧化為藍色的聯苯胺藍，后者與亞硝基鐵氰化鈉結合，形成穩定的藍色物質。

過氧化物酶(POX)染色[原理]

粒細胞和部分單核細胞胞漿中存在過氧化酶，它可將底物(H2O78陽性的中性粒細胞陽性的中性粒細胞79陽性的原始粒細胞和陰性的淋巴細胞陽性的原始粒細胞和陰性的淋巴細胞80陽性的粒細胞和陰性的巨核細胞陽性的粒細胞和陰性的巨核細胞81[臨床意義]

用于鑒別急性粒細胞白血病、急性單核細胞白血病、急性淋巴細胞白血病。POX主要存在于粒系細胞中，細胞越成熟，其反應越強。原始單核細胞呈陰性，幼稚單核細胞和成熟單核細胞呈弱陽性反應。淋巴系、巨核系、紅細胞系各階段細胞均呈陰性反應。

[臨床意義]用于鑒別急性粒細胞白血病、急性單核細胞白血病82酸性磷酸酶(ACP)染色

[原理]

在酸性條件下(pH值4.9)，磷酸酶將作用液中的基質(甘油磷酸鈉)水解，產生磷酸，進而與鉛作用生成磷酸鉛沉淀于細胞酶活性存在處，然后與硫化銨作用，生成黑色硫化鉛沉淀。

酸性磷酸酶(ACP)染色

[原理]

在酸性條件下(83[臨床意義]1.網狀細胞、吞噬細胞、組織細胞、粒細胞和單核細胞此酶呈陽性反應。2.毛細胞白血病時，毛細胞呈陽性反應，且不為L-酒石酸所抑制。3.戈謝細胞ACP染色陽性，而尼曼-匹克細胞呈陰性。[臨床意義]1.網狀細胞、吞噬細胞、組織細胞、粒細胞和單核細84特異性酯酶(SE)染色

[原理]

氯醋酸AS-D萘酚酯酶為粒細胞所特有，故稱特異性酯酶，可將基質中的氯醋酸AS-D萘酚水解而產生萘酚AS-D，后者與重氮鹽偶聯生成不溶性有色沉淀定位于胞漿中。

特異性酯酶(SE)染色

[原理]

氯醋酸AS85[臨床意義]

1.正常血細胞反應：SE在分化好的原始粒細胞可呈弱陽性反應，早幼粒細胞呈強陽性反應，SE活性不隨粒細胞的成熟而增強。單核細胞呈陰性或弱陽性反應，其他細胞均呈陰性反應。

[臨床意義]

1.正常血細胞反應：SE在分化好的原86

2.急性白血病類型的鑒別：急性粒細胞白血病時，原始粒細胞和早幼粒細胞的SE活性顯著增強；急性單核細胞白血病、急性淋巴細胞白血病、急性巨核細胞白血病時，其原始、幼稚細胞均呈陰性反應。

2.急性白血病類型的鑒別：急性粒細胞白血病時，原始粒細胞和87非特異性酯酶(NSE)染色

[原理]

α-醋酸萘酚酯酶存在于單核細胞粒細胞及淋巴細胞中，故稱為非特異性酯酶。NSE水解基質液中α-醋酸萘酯而產生α-萘酚，后者與重氮鹽偶聯生成不溶性有色沉淀定位于胞質中。

非特異性酯酶(NSE)染色

[原理]

α-醋88陽性的原始單核細胞陽性的原始單核細胞89被NaF抑制被NaF抑制90被NaF抑制的原單細胞和不抑制的中幼粒細胞被NaF抑制的原單細胞和不抑制的中幼粒細胞91[臨床意義]

1.正常血細胞反應：NSE主要存在于單核細胞系，從原單細胞到成熟單核細胞逐漸增強。陽性反應能被NaF抑制，粒細胞一般呈陰性反應。

[臨床意義]

1.正常血細胞反應：NSE主要存在于單92

2.急性白血病類型的鑒別：急性單核細胞白血病時，NSE呈強陽性或陽性反應，但NSE活性能被氟化鈉所抑制，稱為氟化鈉