生物化學實驗指導生物化學實驗指導生物化學實驗指導資料僅供參考文件編號：2022年4月生物化學實驗指導版本號：A修改號：1頁次：1.0審核：批準:發布日期：《生物化學》實驗指導實驗室規則一、實驗目的生物化學是醫學教育中的一門實踐性較強的基礎學科。實驗教學是過程的重要組成部分，是理論教學的延伸和補充。實驗目的是：初步學會生物化學實驗的基本操作技能及實驗研究的基本方法。熟悉生物化學實驗原理，了解一些臨床生化檢驗項目。培養嚴肅認真的工作方法、實事求是的科學態度、團結協作的工作作風和觀察分析、思考、獨立解決問題的能力。二、實驗基本要求實驗教學包括實驗前準備、實驗操作、整理實驗結果、書寫實驗報告等環節，為了提高實驗效果，實現實驗目的，要求學生必須做到以下幾點。實驗前仔細閱讀實驗指導，了解實驗目的和要求，充分理解實驗原理，熟悉實驗步驟、操作程序和注意事項。預測實驗各個步驟可能得到的結果，對預期實驗結果能做出合理的解釋。注意和估計實驗中可能發生的誤差，并制定防止誤差的措施。實驗時保持實驗室肅靜，不能進行與實驗無關的活動。在教師或實驗技術人員的指導下，熟悉儀器的構造、性能及操作規程。實驗器材擺放整齊，有條不紊、裝置正確。按照實驗步驟，嚴肅認真的循序操作，不能隨意更動。愛護公物，注意節省實驗器材和藥品。注意安全，嚴防觸電、火災、酸堿灼傷及中毒事故的發生。仔細、耐心地觀察實驗田中出現的現象，隨時客觀的記錄實驗結果，以免發生錯誤或遺漏。實驗條件應始終保持一致，如有變動,應加文字說明。實驗后整理實驗結果，書寫實驗報告，按時交給指導教師評閱。整理實驗儀器和清洗玻璃儀器，關閉儀器、設備和電源。清點實驗器材，辦理借還手續。做好實驗室清潔衛生工作，關閉水、氣閥門，切斷電源，關閉門窗，確保安全。實驗一生化實驗基本操作一、實驗目的通過基本操作訓練，學會熟練進行進行玻璃儀器洗滌；吸量管使用；溶液的混合；離心機使用；７２１型分光光度儀使用。二、實驗用品燒杯、試管；吸量管、移液管；旋渦混合（振蕩）器、玻璃棒；離心機使用；７２１型分光光度儀三、實驗內容及步驟（一）玻璃儀器的洗滌在生化實驗中，玻璃儀器潔凈與否，是獲得準確結果的重要環節。潔凈的玻璃儀器內壁應十分明亮光潔，無水珠附著在玻壁上。（二）吸量管的使用1．刻度吸量管的正確使用方法用右手拇指和中指夾住管身，將吸量管的尖端伸入試液深處，左手持洗耳球把試液吸入管內至高過刻度以上時，迅速用右手食指按住吸量管的上口，以控制試液的泄放。吸液后應盡量使吸量管保持垂直，使右眼與刻度等高，稍微輕抬食指或輕輕轉動吸量管，使試液面緩慢降落，至管內試液彎月面的最低點與吸量管的刻度線相齊為止。然后將吸量管插到需加試劑的容器中，讓尖端與容器內壁靠緊，松開食指讓液體流出。液體流完后再等15秒鐘，捻動一下吸量管后移去（如需吹的吸量管，則吹出尖端的液體后再捻轉一下吸量管移去）。2．定量吸液器的使用方法(微量加樣器)：選擇適當的吸液器：吸液前先把吸嘴套在吸引管上，套上后要輕輕旋緊一下，以保證結合嚴密。持法：右手四指（除大拇指外）并攏握住吸液器外殼（使外殼突起部分搭在食指近端），大拇指輕輕放在吸液器的按鈕上。取樣(吸液)：用大拇指按下按鈕到第一停止點，以排出一定容量的空氣，隨后把吸嘴尖浸入取樣液內，徐徐松開大拇指，讓按鈕慢慢自行復原，取樣即告完成。排液：將吸液器的吸嘴尖置于加樣容器壁上，用大拇指慢慢地將按鈕按下到第一停止點，停留1秒鐘（粘性較高的溶液停留時間應適當延長）。然后再把按鈕按到第二停止點上，讓吸嘴沿管壁向上滑動。當吸嘴尖與容器壁或溶液離開時，方可釋放按鈕，使其恢復到初始位置。吸液器用后應及時取下吸嘴。將吸嘴用自來水沖洗后浸入盛水的容器內（以防干涸），待實驗結束后集中仔細清洗。（三）溶液混勻1．混勻的方法使盛器作離心運動。左手持試管上端，用右手指輕擊試管下半部，使管內溶液作旋轉運動。利用旋渦混合（振蕩）器混勻。不得已時可用干燥清潔的玻璃棒攪勻。（四）離心機使用1．TGL-20M臺式離心機使用方法操作程序：

1）把離心機放置于平面桌或平面臺上，四只橡膠機腳應堅實接觸平面，目測使之平衡，用手輕搖一下離心機，檢查離心機是否放置平穩。

2）打開門蓋，將離心管放入轉子體內，離心管必須成偶數對稱放入（離心管試液應稱量加入），注意把轉子體上螺釘旋緊，并重新檢查試管是否對稱放入、螺釘是否旋緊。

3）關上門蓋，注意一定要使門蓋鎖緊，完畢用手檢查門蓋是否關緊。

4）插上電源插座，按下電源開關。

5）設置轉子號、轉速、溫度、時間：

（五）分光光度儀使用721型1）721分光光度計使用前應預熱20分鐘，做樣之前應對比色皿成套性進行校正，減小測量誤差。2）波長選擇置于所要分析物相對應的波長值，3）打開比色皿蓋進行調零調整面板0旋鈕進行零點調整。4）將空白放入比色皿盒后蓋上比色皿蓋，調整100旋鈕進行100%調整。5）然后逐一拉出樣品進行比色分析。四、實驗報告與內容（略）五、注意事項（一）使用刻度吸量管的注意事項：選擇適當規格的吸量管：吸量管的最大容積應等于或略大于所需容積（ml數）。仔細看清吸量管的刻度情況：刻度是否包括吸量管尖端的液體讀數方向是從上而下，還是從下而上拿吸量管時，刻度一定要面向自己，以便讀數。吸取試劑時應注意三點：一是先吹去吸量管內可能存在的殘留液體，二是將吸量管插入試劑液面深部(以免吸液過程中因液面降低而吸入空氣產生氣泡或管內試劑進入洗耳球)，三是使用洗耳球(不可直接用口吸)。按吸量管上口時應該用食指，不能用拇指。吸取粘滯性大的液體(如血液、血漿、血清等)時，除選用合適的吸管(奧氏管)外，應注意拭凈管尖附著的液體，盡量減慢放液速度(用食指壓力控制)，待液體流盡后吹出管尖殘留的最后一滴液體。使用的吸量管應干凈、干燥無水。如急用而又有水時，可用少量欲取試劑沖洗3次，以免試劑被稀釋。（二）溶液混勻注意事項：防止盛器內的液體濺出或被污染。嚴禁用手指堵塞管口或瓶口震蕩混勻。六、思考題1、吸取某標準液，應選用ml的吸管移取。2、去油污能力最強的洗液是。3、配制NaOH溶液1000ml，需NaOH克。4、配制HCL400ml，需1MHCL溶液毫升。實驗二尿蛋白定性實驗一、實驗目的通過接觸尿蛋白定性實驗，初步學會判斷和了解腎臟功能是否出現問題及問題的嚴重性二、實驗原理在含有蛋白質的尿液中另磺柳酸時，可產生白色沉淀。是磺柳酸的酸離子可與蛋白質堿性基團結合，生成不溶性蛋白鹽深沉。三、實驗用品與試劑配制尿杯、試管、滴管、20%磺柳酸溶液四、實驗內容及步驟1、采集尿液標本：用尿杯采集自己的尿液標本備用。2、取試管一支，加入清晰的尿液24滴，然后加入20%磺柳酸溶液2滴，輕輕搖勻，一分鐘后觀察結果。3、結果記錄和判斷：尿蛋白定性實驗是尿常規檢查中必做的一項實驗，是診斷腎臟疾病和病變的重要常規指標之一。尿蛋白定性試驗常通過半定量方式或加號方式檢測尿液中排出的蛋白質的多少，用于判斷和了解腎臟功能是否出現問題及問題的嚴重性，其結果可用陰性‘—’、微量‘±’、1--4個加號‘+’‘++’‘+++’‘++++’表示，也可用數值表示，加號越多或數值越高則尿蛋白越多。五、實驗報告與內容此次實驗結果為六、注意事項收集中段尿七、思考題試討論尿蛋白定性實驗臨床意義實驗三蛋白質的性質實驗一、實驗目的學會驗證蛋白質呈色反應、沉淀反應及等電點的實驗操作。二、實驗原理蛋白質分子中的氨基酸是以肽鍵連接的，因此蛋白質具有縮二脲反應。由于蛋白質分子中含有自由氨基，可與茚三酮試劑作用生成紫藍色化合物，稱茚三酮反應。以上呈色反應可用于檢驗蛋白質。在蛋白質溶液中加入中性鹽時，蛋白質即沉淀，這種過程稱為鹽析。鹽析包括：（1）大量電解質破壞蛋白質的水化層而出現沉淀；（2）電解質中和了蛋白質分子的電荷而沉淀。中性鹽能否沉淀各種蛋白質決定于中性鹽的濃度、蛋白質的種類、溶液的pH、以及蛋白質膠體顆粒的大小。顆粒大的比顆粒小的容易析出，如球蛋白多在半飽和(NH4)2SO4溶液中析出，而清蛋白則常在飽和(NH4)2SO4溶液中析出。極性較大的有機溶劑，對水的親和力較大，可破壞蛋白質的水化層使其沉淀；當溶液的pH值大于蛋白質的等電點時，蛋白質帶負電荷，可與重金屬離子結合成蛋白鹽沉淀；在溶液的pH值小于蛋白質的等電點時，蛋白質帶正電荷，可與酸根離子結合成蛋白鹽沉淀。蛋白質解離成兩性離子時，溶液的pH值稱該蛋白質的等電點。酪蛋白溶液在等電點時很不穩定，可以發生沉淀。所以，可以根據相對濁度來測定酪蛋白的等電點的近似值。三、實驗用品與試劑配制1、蒸餾水2、10%雞蛋白溶液(v/v)3、%茚三酮乙醇液4、固體(NH4)2SO45、%NaOH溶液6、%硫酸鋅溶液7、10%三氯乙酸溶液8、mol/L醋酸9、mol/L醋酸10、L醋酸11、飽和(NH4)2SO4溶液：稱取377g硫酸銨溶于20℃500ml的蒸餾水中。硫酸銨在20℃水中的溶解度為75412、%酪蛋白醋酸鈉溶液：稱取純酪蛋白，置于50ml容量瓶內，準確地加蒸餾水20ml及1mol/LNaOH5ml，搖勻，使酪蛋白溶解，然后準確地加1mol/L醋酸液5ml，最后用蒸餾水稀釋至刻度。13、滴管、試管和試管架、記號筆。四、實驗內容及步驟 （一）茚三酮反應取小試管1支，加10%雞蛋白溶液4滴，蒸餾水10滴和%茚三酮乙醇液6滴，混勻，在沸水浴中加熱5～10分鐘，待冷卻后觀察溶液的顏色變化。（二）沉淀反應⒈鹽析：取10%雞蛋白溶液4ml于小試管中，再加入4ml飽和(NH4)2SO4溶液，混勻，靜置20分鐘后，則球蛋白全部析出。離心（2000轉/分鐘）5分鐘，取上清液1ml加固體(NH4)2SO4約使之飽和，邊加邊振搖至溶液出現渾濁，再向渾濁液（應不含硫酸銨結晶顆粒）加～蒸餾水，觀察結果。⒉重金屬鹽沉淀蛋白質：取試管1支，加入10%雞蛋白溶液1ml，及%NaOH溶液1滴混勻，再加入%硫酸鋅溶液6滴，觀察結果。三氯乙酸沉淀蛋白質：取試管1支，加入10%雞蛋白溶液1ml，然后再加入10%三氯乙酸溶液3～5滴，觀察沉淀的生成。（三）蛋白質等電點的測定：⒈取5個大試管，編號，按下表準確加入試劑，混勻。試管號試劑(ml)12345蒸餾水L醋酸————L醋酸———1.0mol/L醋酸———%酪蛋白醋酸鈉溶液（加入方法見后）溶液pH值濁度比較⒉各試管加入酪蛋白醋酸鈉溶液時，應隨加隨搖（切勿在各管加完后才搖），觀察各管濁度。靜置10～30分鐘后，比較各管濁度，用（＋）多少表示其渾濁程度。沉淀最多而上清液最透明的試管的pH值，即為酪蛋白的等電點。為什么五、實驗報告與內容（一）茚三酮反應結果（二）沉淀反應結果（三）蛋白質等電點的測定沉淀最多而上清液最透明的試管的pH值=，即為酪蛋白的等電點。為什么六、注意事項緩沖液的pH值必須準確。七、思考題1、根據實驗觀察結果，指出PH值為是酪蛋白的等電點。2、酪蛋白在時，溶解度，容易沉淀。3、各試管中酪蛋白帶什么電荷：12345。4、蛋白質變性的機理是什么哪些因素引起蛋白質的變性5、根據你這次的實驗觀察討論變性與沉淀的關系。6、什么是蛋白質的等電點7、在等電點時，蛋白質溶液為什么容易發生沉淀實驗四溫度、pH、激動劑和抑制劑對酶促反應速度的影響一、實驗目的學會溫度、pH、激動劑和抑制劑對酶促反應影響的實驗操作。二、實驗原理溫度與酶促反應速度關系密切。溫度降低酶促反應速度降低以至完全停止；隨著溫度升高，反應速度逐漸加快。在某一溫度時反應速度達到最大值，此溫度稱酶作用的最適溫度。溫度再升高，反應速度反而下降。人體內大多數酶的最適溫度在37℃PH值影響酶促反應速度，是由于酶本身是蛋白質。PH不僅影響酶蛋白分子某些基團的解離，也影響底物的解離程度，從而影響酶與底物的結合。當酶促反應速度達到最大值時的溶液pH值，稱為該酶的最適pH。不同的酶最適pH值不盡相同，人體多數酶的最適pH值在左右。例如唾液淀粉酶的最適pH值為。凡是能夠提高酶活性，加快酶促反應速度的物質都稱為酶的激動劑。例如Cl-是唾液淀粉酶的激動劑。凡是能夠降低酶的活性，使酶促反應速度減慢，又不使酶變性的物質稱為酶的抑制劑。例如Cu2+是唾液淀粉酶的抑制劑。三、實驗用品與試劑的配制1、滴管、試管和試管架、恒溫水箱、記號筆。2、％淀粉液3、％NaCl溶液4、％CuSO4溶液5、蒸餾水6、不同pH值緩沖溶液的配制:1/15mol/LKH2PO4液：稱取純KH2PO4加蒸餾水溶解并稀釋成1000ml。1/15mol/LNa2HPO4液：稱取Na2HPO4·2H2O，加蒸餾水溶解并稀釋成1000ml。上述兩液下列比例混合均勻，即可得到不同pH值的緩沖溶液。pH1/15mol/LKH2PO41/15mol/LNa2HPO4四、實驗內容與步驟制備稀唾液：用清水漱口，含蒸餾水少許，咀嚼刺激唾液分泌。取唾液2ml加蒸餾水18ml混勻備用。溫度對酶促反應速度的影響1.取試管3支，編號，按下表依次加入各種試劑。試管號試劑（ml）123％淀粉溶液555PH緩沖液111％NaCl溶液1112.混勻后，將1號、2號、3號試管分別置于沸水浴、溫水浴（37～40℃（二）pH對酶促反應速度的影響1.取試管4支，編號，按下表依次加入各種試劑。試管號試劑（ml）1234％淀粉液5555PH緩沖液2PH緩沖液22PH緩沖液2％NaCl溶液11112.混勻后，將各管置于溫水浴（37～40℃（三）激動劑和抑制劑對酶促反應速度的影響1.取試管3支，編號，按下表依次加入各種試劑。試管號試劑（ml）123％淀粉液333PH緩沖液111蒸餾水1％NaCl溶液1％CuSO4溶液1稀唾液1112.混勻后，將各管置于溫水浴（37～40℃五、實驗報告與內容溫度對酶促反應速度的影響觀察顏色變化并予以分析。pH對酶促反應速度的影響觀察顏色并解釋結果。激動劑和抑制劑對酶促反應速度的影響觀察顏色變化并解釋結果。 六、注意事項1．唾液淀粉酶活性存在個體差異，同時受稀釋倍數影響，收集時應事先確定稀釋倍數，或收集2-3人的濁合唾液。2．根據實驗室條件通過預測，確定最佳保溫時間。七、思考題說明PH、溫度、激活劑、抑制劑對酶促反應速度的影響。實驗五

血清總蛋白、清蛋白及A／G比值測定一、實驗目的

1．學會血清總蛋白(雙縮脲比色法)、血清清蛋白(BCG法)測定的原理、試劑配制及結果計算

2．熟練進行實驗基本操作并能遵照注意事項操作

3．正確使用生化實驗室常規儀器二、實驗原理蛋白質分子中的肽鍵在堿性條件下，與Cu2+產生紫紅色絡合反應，與縮二脲在堿性溶液中與Cu2+的反應相似，故稱為雙縮脲反應。產生的顏色強度在一定范圍內與蛋白質的含量成正比，與同樣處理的蛋白標準液比較，經計算或查標準曲線即可求出血清總蛋白質含量。三．實驗用品與試劑配制

1、6mol／L氫氧化鈉溶液

稱取氫氧化鈉(NaOH，優級純)240g，用新鮮蒸餾水配制成1L，置室溫貯存在密封的聚乙烯瓶里。

2、雙縮脲試劑

稱取未失結晶水的硫酸銅(CuSQ·5H20)3．0g，溶于500m1新鮮蒸餾水中，加酒石酸鉀鈉(NaKC4H4O6。4H2O)9．0g，碘化鉀(KI)5．0g，待安全溶解后，加入6mol／L氫氧化鈉溶液100ml，最后加蒸餾水至1L。室溫貯存在密閉的聚乙烯瓶里，約穩定6個月。

3、蛋白標準液

可用商品血清蛋白標準液或定值質控血清為標準。亦可收集混合新鮮血清，用凱氏定氮法標定后，加疊氮鈉防腐(疊氮鈉的終濃度0．5~1．0g／L)，冰凍保存。

4、恒溫水浴箱、分光光度計、吸管、試管。四.實驗內容與步驟（一）標準曲線的操作步驟配制20g／L蛋白標準液

如蛋白標準液濃度為70g／L，則取此液2m1，加入新鮮蒸餾水5ml，混勻即成。加入物（ml）空白管1234520g/L蛋白標準液～蒸餾水～雙縮脲試劑相當血液蛋白質（g/L）～20406080100混勻，置37℃水浴10min(或25℃30min)，用540nm波長比色，以空白管調零，讀取各管吸光度。（二）標準曲線繪制（三）樣品測定操作加入物（ml）測定管標準管空白管血清～～蛋白標準液～～蒸餾水雙縮脲試劑五、實驗內容與報告標準曲線繪制實驗結果：A測=

根據測定管吸光度，從標準曲線查找相對應的總蛋白濃度。C測=六、注意事項1．血清標本以新鮮為宜，但在冰箱保存而不混濁的標本也可應用，含脂類極多的血清加入試劑后仍渾濁不清，可用乙醚抽提后在比色。

2．雙縮脲試劑要密閉貯存，防止吸收空氣中的二氧化碳。

3．試管、吸管應清潔，否則會有混濁現象出現。

4．明顯溶血標本可干擾雙縮脲反應，故不宜使用。

5．黃疸血清可使結果偏高，最好做相應的血清空白，以保證結果準確。

6．各種血清蛋白與雙縮脲試劑的顯色基本相同，但其他類蛋白質的顯色強度與血清強度與血清蛋白有很大差別，故不可隨意選用未知性能的蛋白質作為血清蛋白測定的標準。七、思考題測定血清總蛋白及白、球比值有什么臨床意義實驗六轉氨酶活性測定一、實驗目的本實驗要證實肝臟中GPT(ALT)活力較高。二、實驗原理本實驗以動物肝組織、肌肉組織為標本，觀察這些組織中轉氨酶(ALT)的活性大小。GPT的底物：丙酮酸與a-酮戊二酸在pH時，經組織勻漿中GPT催化進行轉氨基作用，生成丙酮酸和谷氨酸。丙酮酸與2，4-二硝基苯肼作用，生成丙酮酸-2，4-二硝基苯腙，后者在堿性溶液中顯棕紅色。棕紅色深淺與酶活力大小成正比，用顏色深淺來比較肝臟和肌肉中GPT活力。反應式如下：三、實驗用品1．勻漿器(或組織搗碎機或研缽)、滴管、試管和試管架、恒溫水箱、記號筆。2．／L磷酸鹽緩沖液。精確量取／L毫升，／L毫升，混勻即成。

3．GPT底物液。稱取DL-丙氨酸克，a-酮戊二酸毫克。將兩種物質先溶于10毫升lmol／LNaOH中，待溶解后，以1mol／LHCI校正到，再加磷酸鹽緩沖液至100毫升，加氯仿數滴防腐，置冰箱備用。

4．2，4-二硝基苯肼溶液。稱取2，4-二硝基苯肼20毫克溶于100毫升1mol／LHCl中(可略加溫助溶)。

5．／LNaOH。取16克NaOH溶于500毫升蒸餾水中，再加蒸餾水稀釋至1000毫升。四.實驗內容與步驟1．將家兔處死后，立即取出肝和肌肉，分別以冰生理鹽水洗去血液，取10克新鮮肝和10克肌肉組織，分別剪碎，各加磷酸鹽緩沖液10毫升，用勻漿器或研缽等制成肝勻漿和肌肉勻漿，再加磷酸鹽緩沖液20毫升混勻，制成酶浸出液。2．取試管三支，編號1、2、3，按表操作．試劑（滴）管

號123GPT底物液101010肝勻漿3————肌勻漿——3——緩沖液————337℃，水浴20分鐘2，4-二硝基苯肼55537℃，水浴30分鐘LNaOH5ml5ml5ml5至10分鐘后，觀察結果。五、實驗報告與內容觀察各管顏色深淺結果，并加以說明。六、注意事項1、酶的活力測定與溫度、時間影響很大，因此反應嚴重控制溫度和注意掌握時間。2、光密度與丙酮酸的標準線成拋物線，是因為除丙酮酸與二硝基苯肼在堿性溶液中能成腙外，α－酮戊二酸亦能與二硝基苯肼產生苯腙。這是本實驗方法的缺點。七、思考題轉氨酶活性測定臨床意義。實驗七血清蛋白醋酸纖維薄膜電泳一、實驗目的敘述電泳法分離蛋白質的原理、及臨床意義，熟練掌握操作方法。二、實驗原理

血清中各種蛋白質的等電點大都在pH7以下，將血清置于的緩沖液中，蛋白質均帶負電，在電場中都向陽極移動。因血清各種蛋白質在同一pH環境中所帶負電荷多少及分子大小不同，所以在電場中向陽極泳動速度不同。蛋白質分子小而帶電荷多者，泳動速度快；反之則慢。因此可將血清蛋白質依次分為清蛋白、a1-球蛋白、a2-球蛋白、b-球蛋白和g球蛋白五條區帶，經染色可計算出各血清蛋白質含量的百分數。

三．實驗用品1．儀器：電泳儀、電泳槽、分光光度計。

2．材料：醋酸纖維薄膜、培養皿、濾紙、鑷子、加樣器、直尺、鉛筆、剪刀等。3．巴比妥—巴比妥鈉緩沖液，m=。稱取巴比妥克和巴比妥鈉克，溶于500毫升蒸餾水中，加熱溶解。待冷至室溫后，再加蒸餾水稀釋至1000毫升。

4．染色液。稱取麗春紅克及三氯醋酸6克；用蒸餾水溶解，并稀釋至100毫升。

5．漂洗液。3%(V／V)醋酸溶液。

6．透明液。取無水乙醇75毫升和冰醋酸25毫升混勻備用。

7．／L氫氧化鈉溶液。

8．40%(V／V)醋酸溶液。四.實驗內容與步驟1．薄膜的準備：取醋纖薄膜(2厘米*8厘米)在毛面的一端約厘米處，用鉛筆輕劃一直線，表露點樣位置并編號。將此薄膜置于巴比妥緩沖液中浸泡，待充分浸透(即膜條無白斑時)后取出，用潔凈濾紙輕輕吸去表面的多余緩沖液。

2．點樣：取少量血清置于玻璃板上，用加樣器的取血清(約1~2ml)，隨后均勻加在點樣線上，待血清滲入膜后移開點樣器。3．電泳：將已點樣的薄膜加樣面朝下，加樣端置于陰極